以磁性顆粒為基礎純化PCR產物實驗
試劑、試劑盒 乙醇PCR 樣品儀器、耗材 自動定位器吸頭液體處理自動機械分離裝置平板密封條PCR 純化系統實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑乙醇,80%2. 核酸和寡核苷酸在 96 孔板中的 PCR 樣品(不多于100ul/孔)3. 特殊設備3 臺單位置的實驗用自動定位器(BeckmanCoulter)4 套 P250 盒裝吸頭(BeckmanCoulter)4X4 位置實驗用自動定位器(BeckmanCoulter)96 孔吸頭洗滌自動實驗用定位器(BeckmanCoulter)加熱和冷卻自動實驗用定位器(BeckmanCoulter)液體處理自動機械,如 BiomekFx 或 Biomek2000 實驗室自動工作平臺(BeckmanCoulter)MagnaBot96 磁性分離裝置(Promega)無浸透性的平板密封條回旋振蕩式自動實驗用定位器(BeckmanCoulter)吸頭裝卸自動實驗用定位器(BeckmanC......閱讀全文
以磁性顆粒為基礎純化-PCR-產物實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙醇 PCR 樣品 儀器、耗材 自動定位器 吸頭
以磁性顆粒為基礎純化-PCR-產物實驗
MagneSil 是一種順磁性硅質顆粒,能夠充當可移動的固相物質而用于捕獲雙鏈 DNA 片段。通過洗滌黏附于硅質顆粒上的靶復合物來去除殘留污染,從而純化的目的 DNA。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。 試劑、試劑盒 乙醇PCR 樣品 儀器、耗材
以磁性顆粒為基礎純化-PCR-產物實驗
試劑、試劑盒 乙醇PCR 樣品 儀器、耗材 自動定位器吸頭液體處理自動機械分離裝置平板密封條PCR 純化系統 實驗步驟 一、材料 1. 緩沖液、溶液和試劑 乙醇,80% 2. 核酸和寡核苷酸 在 96 孔板中的 PCR 樣品(不多于100ul/孔)
以硅膜為基礎純化-PCR-產物實驗方法
試劑、試劑盒 乙醇PCR 樣品儀器、耗材 真空裝置真空泵真空廢物收集裝置真空管PCR 純化系統實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑乙醇,80%(75 ml/板;使用前配制)2. 核酸和寡核苷酸在 96 孔板中的 PCR 樣品(每樣品 20?lOOul)3. 特殊設備Vac-man96 真空裝置
以硅膜為基礎純化-PCR-產物實驗方法
Wizard SV96 PCR 純化系統提供了一個以膜為基礎,用于從 96 孔板中進行高產率 PCR純化的方法。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。試劑、試劑盒乙醇PCR 樣品儀器、耗材真空裝置真空泵真空廢物收集裝置真空管PCR 純化系統實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和
以硅膜為基礎純化-PCR-產物實驗方法
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙醇 PCR 樣品 儀器、耗材 真空裝置 真空泵 真空廢物收集裝置
PCR-產物純化實驗
介紹一個采用 AmiconMicrocon-PCR 濾件(Millipore) 的方法,有效地去除冗余dNTP 和引物的方法純化 PCR 產物。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。試劑、試劑盒TE 或去離子水PCR 產物儀器、耗材離心機和轉子PCR 濾 件微量離心管實驗步驟
PCR-產物純化實驗
試劑、試劑盒 TE 或去離子水PCR 產物儀器、耗材 離心機和轉子PCR 濾 件微量離心管實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液TE(lOmmol/L Tris-HCl,lmmol/L EDTA,pH7.5) 或去離子水2. 核酸和寡核苷酸待測序的 PCR 產物3. 離心機和轉子帶有固定傾角轉子的小型
PCR-產物純化實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 TE 或去離子水 PCR 產物 儀器、耗材 離心機和轉子 PCR 濾 件
以PCR為基礎的相關技術
(一)巢式PCR 定義: 是對靶基因進行二次擴增,第二次擴增用的模板就是第一次的擴增產物。 應用: 可以得到足夠和特異性的擴增產物,在靶基因表達量比較低或者一些其他原因導致的,使用常規的PCR無法得到理想的產物得時候。 注意事項: (1)第二次擴增的時候,必須至少有一條引物是另外設計
染色末端的清潔純化實驗
利用 ABIPRISMRigDye 末端化學法進行自動熒光測序是高效率 DN 八序列測定的方法之一。序列梯度是由標準的 Sanger 方法利用熒光標記鏈末端的核苷而產生的。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。 試劑、試劑盒 乙醇洗脫上樣液 儀器、耗
PCR產物純化方法
Purification of PCR Products in Preparation for CloningJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid
簡述PCR-產物純化
PCR 反應完成目標 DNA 的擴增后,PCR 產物可以用于進一步的研究,例如用于 DNA 測序、克隆、分析基因的功能和表達等。然而,通過 PCR 反應后體系中仍然存在具有活性的 DNA 聚合酶,剩余的 dNTP、引物以及反應緩沖體系中的各種金屬離子等。因此,我們必須通過一定的方法從反應體系中提純
PCR產物常規純化方法
大批量、廉價、用于測序的PCR產物純化方法--PEG沉淀?最近,摸索了一下PEG沉淀PCR產物的方法,貼出來,與大家共享。?目的:探索一種方法,能將PCR產物大批量地、廉價地、純度比較高地純化出來,并且最好能去掉200bp以下的小片段DNA,用于DNA測序。?有文獻和方法說,不同濃度的PEG能沉淀不
PCR產物的直接純化
實驗概要本實驗介紹了PCR產物直接純化的原理及操作步驟。實驗原理PCR產物一般都含有過量的引物、Taq ? DNA酶及dNTP,這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程,因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多,商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中
PCR產物的回收純化
PCR產物的回收純化的目的是:高質量DNA;除去蛋白(如酶等),RNA,無機鹽(NaCl超過150 mM對T4連接酶有抑制作用),小于100 bp的短片段(如引物DNA),有機小分子(如dNTP、Agrose、EB、甘油、礦物油)。
染色末端的清潔純化實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙醇 洗脫上樣液 儀器、耗材 磁性分離裝置 平板夾
染色末端的清潔純化實驗
試劑、試劑盒 乙醇洗脫上樣液 儀器、耗材 磁性分離裝置平板夾平板架測序反應純化系統 實驗步驟 一、材料 1. 緩沖液、溶液和試劑 用于測序的膠洗脫/上樣液 (見表 9-4) 90% 乙酵洗滌液 2. 特殊設備 MagnaBotⅡ磁性分離裝
pcr產物的純化與回收實驗報告
PCR產物的直接純化: 一、原理 PCR產物一般都含有過量的引物、 Taq DNA酶及dNTP,這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程,因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多,商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中, Buffer PCR
以PCR為基礎的檢測工具的優缺點
第一,PCR反應是快速的。整個DNA提取,擴增和檢測的過程通常少于6小時,如果反應利用嵌套的引物,過程可能長些。對于一些樣本來說,比如來自糞便和表皮,就需要在DNA提取中增加步驟,這樣就延長了整個檢測的時間到14小時。 用購買的核苷酸提取工具就能縮短檢測時間,同時機械進行提取,使PCR方案最優化或
PCR擴增產物鑒定與純化實驗原理及實驗過程
?實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。(原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗)本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統,結合DNA制備膜技
PCR擴增產物鑒定與純化實驗原理及實驗過程
實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。(原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗)本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統,結合DNA制
制備克隆用PCR產物的純化
實驗方法原理 PCR 產物經酚:氯仿抽提、乙醇沉淀及其他一些常用方法純化后,DNA 樣品內還往往殘留了一些具有酶活性的 Taq DNA 酶與另外一些熱穩定 DNA 聚合酶(Cioweetal. 1991; Bamesl992)。這些殘余的 DNA 聚合酶連同一些殘余的 dNTP 的持續存
PCR擴增產物鑒定與純化
實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。(原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗)本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統,結合DNA制
制備克隆用PCR產物的純化
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 PCR 產物經酚:氯仿抽提、乙醇沉淀及其他一些常用方法純化后,DNA 樣品內還往往殘留了一些具有酶活性的 Taq DNA 酶與另外一些熱穩定 DNA 聚合酶(Cioweetal. 1991; Bamesl992)。這些殘余的
制備克隆用PCR產物的純化
PCR 產物經酚:氯仿抽提、乙醇沉淀及其他一些常用方法純化后,DNA 樣品內還往往殘留了一些具有酶活性的 Taq DNA 酶與另外一些熱穩定 DNA 聚合酶(Cioweetal. 1991; Bamesl992)。這些殘余的 DNA 聚合酶連同一些殘余的 dNTP 的持續存在,常常妨礙有待進一步克隆
PCR擴增產物鑒定與純化
實驗原理 瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。(原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗) 本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統,結合DN
PCR擴增產物鑒定與純化
實驗原理 瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。(原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗) 本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統,結合DN
直接從PCR產物回收純化DNA
1)直接加90-100μl純化緩沖液于1.5ml離心管,再加入30~300μl PCR反應物,Vortex混合;2)加入1ml樹脂輕輕Vortex 3次,每次間隔1分鐘;3)將取出拉桿的注射器筒(3ml)裝在純化柱上,加入上述DNA與樹脂混合液,然后裝上拉桿,慢慢將混合液推進純化柱內;4)卸下注射器
PCR擴增產物鑒定與純化
實驗概要通過瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產物,并對獲得的產物進行割膠純化回收,為接下來的DNA重組和轉化實驗提供外源DNA片段。實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。(原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗) 本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒(Agarose Gel DNA Purifi