直接從PCR產物回收純化DNA
1)直接加90-100μl純化緩沖液于1.5ml離心管，再加入30～300μl PCR反應物，Vortex混合；2)加入1ml樹脂輕輕Vortex 3次，每次間隔1分鐘；3)將取出拉桿的注射器筒（3ml）裝在純化柱上，加入上述DNA與樹脂混合液，然后裝上拉桿，慢慢將混合液推進純化柱內；4)卸下注射器筒，拔出拉桿，再將注射器筒裝上純化柱，加2ml 80%的Isopropanol（異丙醇）, 然后裝上拉桿，慢慢推出液體以清洗柱子；5)再次卸下注射器筒，將純化柱裝在1.5ml離心管上，10000g離心2 min，以干燥樹脂；6)再將純化柱裝在一個新的1.5ml離心管上，加30-50μl水或TE緩沖液，1分鐘后，10000g離心20秒，溶出DNA片段；7)移去純化柱，將純化出的DNA溶液取出部分用于酶切，其余在-20℃下保存備用補充幾點本人在試驗過程中的經驗：1）用50～60度溫育過的水洗脫可以提高DNA的回收效率；2）可適當降低離心的......閱讀全文
直接從PCR產物回收純化DNA
1)直接加90-100μl純化緩沖液于1.5ml離心管，再加入30～300μl PCR反應物，Vortex混合；2)加入1ml樹脂輕輕Vortex 3次，每次間隔1分鐘；3)將取出拉桿的注射器筒（3ml）裝在純化柱上，加入上述DNA與樹脂混合液，然后裝上拉桿，慢慢將混合液推進純化柱內；4)卸下注射器
PCR產物的回收純化
PCR產物的回收純化的目的是：高質量DNA；除去蛋白（如酶等），RNA，無機鹽（NaCl超過150 mM對T4連接酶有抑制作用），小于100 bp的短片段（如引物DNA），有機小分子（如dNTP、Agrose、EB、甘油、礦物油）。
PCR產物的直接純化
實驗概要本實驗介紹了PCR產物直接純化的原理及操作步驟。實驗原理PCR產物一般都含有過量的引物、Taq ? DNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程，因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多，商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中
pcr產物的純化與回收實驗報告
PCR產物的直接純化： 一、原理 PCR產物一般都含有過量的引物、 Taq DNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程,因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多,商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中, Buffer PCR
PCR產物的直接純化原理、材料與方法
一．原理PCR產物一般都含有過量的引物、Taq DNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程，因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多，商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中，Buffer PCR-A促使大于100bp的DNA
PCR產物的直接純化原理、材料與方法
一．原理PCR產物一般都含有過量的引物、Taq?DNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程，因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多，商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中，Buffer PCR-A促使大于100bp的DNA片斷選擇
一種從凝膠中直接回收DNA進行PCR的方法
分子生物學實驗中，常常需要從瓊脂糖凝膠或聚丙酰胺凝膠中回收DNA，進行純化、探針標記或進一步擴增等。鑒于PCR反應具有高度敏感性，微量模板即可擴增出陽性產物。我們從瓊脂糖凝膠中直接回收DNA進行PCR，取得較滿意的結果，報道如下。?1 材料和方法?1.1 試劑 Taq DNA聚合酶、dNTP、瓊
PCR－產物純化實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 TE 或去離子水 PCR 產物 儀器、耗材 離心機和轉子 PCR 濾 件
PCR產物純化方法
Purification of PCR Products in Preparation for CloningJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid
簡述PCR－產物純化
PCR 反應完成目標 DNA 的擴增后，PCR 產物可以用于進一步的研究，例如用于 DNA 測序、克隆、分析基因的功能和表達等。然而，通過 PCR 反應后體系中仍然存在具有活性的 DNA 聚合酶，剩余的 dNTP、引物以及反應緩沖體系中的各種金屬離子等。因此，我們必須通過一定的方法從反應體系中提純
PCR－產物純化實驗
介紹一個采用 AmiconMicrocon-PCR 濾件（Millipore) 的方法，有效地去除冗余dNTP 和引物的方法純化 PCR 產物。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒TE 或去離子水PCR 產物儀器、耗材離心機和轉子PCR 濾 件微量離心管實驗步驟
PCR－產物純化實驗
試劑、試劑盒 TE 或去離子水PCR 產物儀器、耗材 離心機和轉子PCR 濾 件微量離心管實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液TE(lOmmol/L Tris-HCl，lmmol/L EDTA，pH7.5) 或去離子水2. 核酸和寡核苷酸待測序的 PCR 產物3. 離心機和轉子帶有固定傾角轉子的小型
DNA測序醋酸鈉/乙醇法純化PCR產物
1. 將混合物離心，將擴增產物轉移到1.5 ml EP管中。 2. 加入25 μl醋酸鈉/乙醇混合液，充分振蕩，置冰上10 min以沉淀DNA。12 000 r/min于4℃離心30 min，小心棄上清。 3. 加70%(V/V)的乙醇50 μl洗滌沉淀2次。12 000 r/min于4℃離
PCR產物電泳做膠回收不也得到純化的目的
PCR產物純化試劑盒去除的是PCR反應體系中的離子、dNTP、引物以及聚合酶，收集其中的DNA片段。這只適合于幾乎沒有非特異性條帶的PCR產物的收集。如果你的PCR產物具有非特異性條帶，那么一定需要使用膠回收試劑盒。
PCR產物常規純化方法
大批量、廉價、用于測序的PCR產物純化方法--PEG沉淀?最近，摸索了一下PEG沉淀PCR產物的方法，貼出來，與大家共享。?目的：探索一種方法，能將PCR產物大批量地、廉價地、純度比較高地純化出來，并且最好能去掉200bp以下的小片段DNA，用于DNA測序。?有文獻和方法說，不同濃度的PEG能沉淀不
DNA片段回收與純化
????質粒、噬菌體等經酶切，電泳；PCR產物經電泳后，常常需要對一些DNA電泳片段進行回收和純化，用于亞克隆、探針標記等。DNA回收和純化常用方法有壓碎法、低融點瓊脂糖法、凍融法等，也有現成的試劑盒供應。一、凍融法1.??紫外燈下仔細切下含待回收DNA的膠條，將切下的膠條（小于0.6g）搗碎，置于
pcr產物沒有純化能夠直接進行雙酶切嗎
PCR產物經PCR純化試劑盒純化后，可以做EcoRI和BamHI的雙酶切。酶切、純化都可以用PCR純化試劑盒完成，只有一種情況例外，PCR模板為質粒，且這個質粒和要用的載體有相同的抗性。此時需要跑一次膠來丟掉模板質粒，否則在連接產物轉化的平板上長出的菌落許多是模板質粒，而不是你所構建的質粒。PCR產
酶切后產物可以做pcr產物回收么
如果沒有其他雜帶就可以。單一條帶的PCR產物，如果酶切后也只有一條帶，就可以用產物回收試劑盒回收。但如果酶切后有雜帶或多條帶，就只能做膠回收。
DNA純化實驗——DNA凝膠回收試劑盒純化法
DNA純化可用于：（1）獲得高純度的DNA；（2）濃縮DNA；（3）測序、遺傳信息分析等分子生物學應用。實驗方法原理本試劑盒適合從各種瓊脂糖凝膠中提取多至 8 μg DNA（70 bp-10 Kb），回收率為 60-85%。瓊脂糖凝膠在溫和的緩沖液(DE-A 溶液)中溶解，其中的保護劑能防止線狀 D
DNA小片段的純化回收
DNA 電泳小于100bp的片斷通常在電泳時就比較難觀察分辨，需要用分辨率很高的瓊脂糖或者丙烯酰胺凝膠。比如Cambrex的NuSieve 3:1或者GTG，或者是大名鼎鼎的MetaPhor瓊脂糖。所以實際上對于小片斷，可以分為兩種情況：一個是真的要回收電泳中特別小的片斷，這種情況我們前面有提到，比
制備克隆用PCR產物的純化
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 PCR 產物經酚:氯仿抽提、乙醇沉淀及其他一些常用方法純化后，DNA 樣品內還往往殘留了一些具有酶活性的 Taq DNA 酶與另外一些熱穩定 DNA 聚合酶（Cioweetal. 1991; Bamesl992)。這些殘余的
PCR擴增產物鑒定與純化
實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗）本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（Agarose Gel DNA Purification Kit），該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統，結合DNA制
PCR擴增產物鑒定與純化
實驗原理 瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗） 本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（Agarose Gel DNA Purification Kit），該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統，結合DN
制備克隆用PCR產物的純化
PCR 產物經酚:氯仿抽提、乙醇沉淀及其他一些常用方法純化后，DNA 樣品內還往往殘留了一些具有酶活性的 Taq DNA 酶與另外一些熱穩定 DNA 聚合酶（Cioweetal. 1991; Bamesl992)。這些殘余的 DNA 聚合酶連同一些殘余的 dNTP 的持續存在，常常妨礙有待進一步克隆
PCR擴增產物鑒定與純化
實驗原理 瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗） 本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（Agarose Gel DNA Purification Kit），該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統，結合DN
PCR擴增產物鑒定與純化
實驗概要通過瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產物，并對獲得的產物進行割膠純化回收，為接下來的DNA重組和轉化實驗提供外源DNA片段。實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗） 本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（Agarose Gel DNA Purifi
制備克隆用PCR產物的純化
實驗方法原理 PCR 產物經酚:氯仿抽提、乙醇沉淀及其他一些常用方法純化后，DNA 樣品內還往往殘留了一些具有酶活性的 Taq DNA 酶與另外一些熱穩定 DNA 聚合酶（Cioweetal. 1991; Bamesl992)。這些殘余的 DNA 聚合酶連同一些殘余的 dNTP 的持續存
常規的－PCR－產物純化的基本過程
常規的 PCR 產物純化的基本過程如下：首先使用瓊脂糖凝膠電泳分離除去反應體系中靶序列的非特異性擴增片段，然后使用蛋白酶 K 滅活耐熱的 DNA 聚合酶，此后使用常規的苯酚/氯仿抽提法除去剩余的 dNTP，離心、乙醇洗脫后干燥，最后使用高效液相色譜或者凝膠電泳分離反應體系中剩余的引物和引物二聚體。通
PCR產物是否需要用凝膠純化？
如凝膠分析擴增產物只有一條帶,不需要用凝膠純化。如可見其他雜帶,可能是積累了大量引物的二聚體。少量的引物二聚體的摩爾數也很高,這會產生高比例的帶有引物二聚體的克隆,而非目的插入片段。為此需在克隆前做凝膠純化。
瓊脂糖凝膠電泳回收PCR產物
一．原理 DNA片斷的分離與回收是基因工程操作中的一項重要技術，例如可收集特定酶切片斷用于克隆或制備探針，回收PCR產物用于再次鑒定等。回收實驗中兩個最重要的技術指標是純度和回收率：前者未達標時會嚴重影響以后的酶切、連接、標記等酶參與的反應；后者不理想時往往會大大增加前期的工作量。 本實驗采