1)直接加90-100μl純化緩沖液于1.5ml離心管,再加入30~300μl PCR反應物,Vortex混合;
2)加入1ml樹脂輕輕Vortex 3次,每次間隔1分鐘;
3)將取出拉桿的注射器筒(3ml)裝在純化柱上,加入上述DNA與樹脂混合液,然后裝上拉桿,慢慢將混合液推進純化柱內;
4)卸下注射器筒,拔出拉桿,再將注射器筒裝上純化柱,加2ml 80%的Isopropanol(異丙醇), 然后裝上拉桿,慢慢推出液體以清洗柱子;
5)再次卸下注射器筒,將純化柱裝在1.5ml離心管上,10000g離心2 min,以干燥樹脂;
6)再將純化柱裝在一個新的1.5ml離心管上,加30-50μl水或TE緩沖液,1分鐘后,10000g離心20秒,溶出DNA片段;
7)移去純化柱,將純化出的DNA溶液取出部分用于酶切,其余在-20℃下保存備用
補充幾點本人在試驗過程中的經驗:
1)用50~60度溫育過的水洗脫可以提高DNA的回收效率;
2)可適當降低離心的轉速,讓DNA緩慢的通過純化柱,這樣也可以提高DNA的回收效率。