利用 ABIPRISMRigDye 末端化學法進行自動熒光測序是高效率 DN 八序列測定的方法之一。序列梯度是由標準的 Sanger 方法利用熒光標記鏈末端的核苷而產生的。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。
| 試劑、試劑盒 | 乙醇洗脫上樣液 |
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| 儀器、耗材 | 磁性分離裝置平板夾平板架測序反應純化系統 |
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| 實驗步驟 | 
一、材料
1. 緩沖液、溶液和試劑
用于測序的膠洗脫/上樣液 (見表 9-4)
90% 乙酵洗滌液
2. 特殊設備
MagnaBotⅡ磁性分離裝置(Promega)
平板夾 96(Promega)
平板架(Promega)
3. 其他
WizardMagneSil 測序反應純化系統(Promega; 包括 MagneSilGREEN[順磁性顆粒])
96 孔板
二、方法

1. 將 96 孔板裝到平板夾 96 中 [圖 9-10(a)、(b)]。
2. 使用平板架 [圖 9-10(c)] 將平板放置在自動機械工作臺上。
3. 劇烈振蕩瓶以重懸 MagneSil 顆粒,每 20ul 測序反應體系中加入 180ulMagneSil顆粒。
4. 室溫下溫育 5 min, 期間分別在 0、2.5 min 和 5 min 時進行抽吸混合。
5. 將板放到 MagnaBotⅡ磁性分離裝置 [圖 9-10(d)] 上以捕獲顆粒。
6. 移棄液體,避免損失任何顆粒。
7. 從 MagnaBotⅡ設備上取出板,置于平板架上。
8. 每個樣品中加入 100ul90% 的乙醇。
9. 室溫下溫育 5 min, 期間分別在 0、2.5 min 和 5 min 時進行抽吸混合。
10. 將板放到 MagnaBotnⅡ磁性分離裝置上以捕獲顆粒。
11. 移棄液體,避免損失任何顆粒。
12. 重復步驟 7~11 使總洗滌次數達到 2 次。
13. 顆粒在室溫下風干約 10 min。
14. 加適量洗脫/上樣液(表 9-4)。
15. 室溫下溫育 1~2 min。
16. 將板放到 MagnaBotnⅡ磁性分離裝置上以捕獲顆粒。
17. 將已純化的測序反應體系轉移到干凈的 96 孔板,小心以避免損失任何顆粒。
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