• <option id="immmk"></option>
  • <noscript id="immmk"><kbd id="immmk"></kbd></noscript>
    發布時間:2019-03-28 11:26 原文鏈接: 染色末端的清潔純化實驗

    利用 ABIPRISMRigDye 末端化學法進行自動熒光測序是高效率 DN 八序列測定的方法之一。序列梯度是由標準的 Sanger 方法利用熒光標記鏈末端的核苷而產生的。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。

    試劑、試劑盒

    乙醇洗脫上樣液

    儀器、耗材

    磁性分離裝置平板夾平板架測序反應純化系統

    實驗步驟



    一、材料


    1. 緩沖液、溶液和試劑

    用于測序的膠洗脫/上樣液 (見表 9-4)

    90% 乙酵洗滌液

    2. 特殊設備

    MagnaBotⅡ磁性分離裝置(Promega)

    平板夾 96(Promega)

    平板架(Promega)

    3. 其他

    WizardMagneSil 測序反應純化系統(Promega; 包括 MagneSilGREEN[順磁性顆粒])

    96 孔板

    二、方法



    1. 將 96 孔板裝到平板夾 96 中 [圖 9-10(a)、(b)]。

    2. 使用平板架 [圖 9-10(c)] 將平板放置在自動機械工作臺上。

    3. 劇烈振蕩瓶以重懸 MagneSil 顆粒,每 20ul 測序反應體系中加入 180ulMagneSil顆粒。

    4. 室溫下溫育 5 min, 期間分別在 0、2.5 min 和 5 min 時進行抽吸混合。

    5. 將板放到 MagnaBotⅡ磁性分離裝置 [圖 9-10(d)] 上以捕獲顆粒。

    6. 移棄液體,避免損失任何顆粒。

    7. 從 MagnaBotⅡ設備上取出板,置于平板架上。

    8. 每個樣品中加入 100ul90% 的乙醇。

    9. 室溫下溫育 5 min, 期間分別在 0、2.5 min 和 5 min 時進行抽吸混合。

    10. 將板放到 MagnaBotnⅡ磁性分離裝置上以捕獲顆粒。

    11. 移棄液體,避免損失任何顆粒。

    12. 重復步驟 7~11 使總洗滌次數達到 2 次。

    13. 顆粒在室溫下風干約 10 min。

    14. 加適量洗脫/上樣液(表 9-4)。

    15. 室溫下溫育 1~2 min。

    16. 將板放到 MagnaBotnⅡ磁性分離裝置上以捕獲顆粒。

    17. 將已純化的測序反應體系轉移到干凈的 96 孔板,小心以避免損失任何顆粒。


  • <option id="immmk"></option>
  • <noscript id="immmk"><kbd id="immmk"></kbd></noscript>
    伊人久久大香线蕉综合影院首页