免疫印跡與免疫檢測實驗——半干轉移系統轉印蛋白質
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒轉移緩沖液儀器、耗材半干燥轉移裝置濾紙實驗步驟1. 制備樣品，并在小型或標準尺寸的單向或雙向凝膠上分離蛋白質。 2. 準備轉印膜3. 拆卸凝膠夾層，除去積層膠。4. 組裝轉印夾層：Mylar聚酯薄膜屏蔽物3張以轉移緩沖液飽和的濾紙已平衡的轉印膜凝膠3張以轉移緩沖液飽和的濾紙當每一組分往上堆疊時，需排除氣泡。5. 在轉移夾層的頂部放置頂電極。 6. 小心將高壓導線和電源相連。在恒流下轉移蛋白。通常只需轉移1 h。 7. 轉移后，關閉電源，拆卸轉移裝置，取出膜，標記好凝膠方向。進行染色和免疫檢測。 圖一、利用半干轉移系統中進行免疫印跡展開......閱讀全文
如何做出一手漂亮的Western－Blot實驗結果？
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們
如何獲得精準的Western－Blot實驗結果
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們
如何獲得精準的Western－Blot實驗結果
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們，實驗做
蛋白質轉印法檢定蛋白質
蛋白質轉印法檢定蛋白質?????蛋白質經SDS-PAGE后，膠片浸入轉印緩沖液，蛋白質可被轉印到硝化纖維紙（nitrocellulose）?上，先經?素洗去SDS，并使蛋白質回?原態抗原性，可使用抗體進?免疫染色?（Towbin?et?al,?1979）。儀器用具：電泳轉印槽?（Hoefer?Tra
如何獲得精準的Western－Blot實驗結果？（一）
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們
以毛細管轉移方式進行Northern－Blotting轉印實驗
要進行北方雜合反應前，必須先將RNA自洋菜膠體轉移至硝化纖維紙（nitrocellulose membrane） 或尼龍膜 （nylon membrane） 上，這一個過程稱為轉印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛細管轉移法 （capillary transfer）、真空轉移法 （vac
一文讀懂蛋白質轉印原理－大分子量蛋白轉印有哪些技巧
通過凝膠電泳分離蛋白后，蛋白質被轉移到固體膜載體上進行后續步驟。有效的轉印依賴于膜的選擇、所使用的轉印設備的類型以及轉印緩沖液的組成。 轉印條件 蛋白的有效轉印依賴于蛋白質從凝膠中遷移出來，也依賴于蛋白在膜上的滯留。像凝膠電泳一樣，轉印步驟將帶負電荷的蛋白轉印到帶正電荷的電極上。轉印效率受所
濕轉和干轉，哪個方法更好？
對于一個完美的westernblot實驗，蛋白在聚丙烯凝膠中根據天然分子量進行分離，蛋白被很好的從凝膠上轉移到固相支持物上，然后通過特異性的抗體進行免疫檢測。對于轉印來說，使用濕轉的方法是比較好的，因為凝膠和膜都能夠完全浸沒在轉印buffer中，在半干轉的條件下，轉印是在兩個電極板之間發生，這種類型
濕轉和干轉，哪個方法更好
對于一個完美的westernblot實驗，蛋白在聚丙烯凝膠中根據天然分子量進行分離，蛋白被很好的從凝膠上轉移到固相支持物上，然后通過特異性的抗體進行免疫檢測。 對于轉印來說，使用濕轉的方法是比較好的，因為凝膠和膜都能夠完全浸沒在轉印buffer中，在半干轉的條件下，轉印是在兩個電極板之間發
總蛋白染色劑替代麗春紅S用于熒光Western－Blots的優勢
麗春紅S是一種快速，可逆的蛋白質染色劑，通常用于確認蛋白樣品是否成功地從凝膠轉移到膜上，然后研究人員進行免疫印跡過程。 轉印后對膜進行染色可以在用抗體孵育印跡之前快速且容易地識別一些轉印的問題，例如由于存在氣泡而導致的條帶不完全、不均勻的轉移和偽影。 此外，染色膜上的總蛋白為總蛋白標準化定量提供
總蛋白染色劑替代麗春紅S用于熒光Western－Blots的優勢
麗春紅S是一種快速，可逆的蛋白質染色劑，通常用于確認蛋白樣品是否成功地從凝膠轉移到膜上，然后研究人員進行免疫印跡過程。 轉印后對膜進行染色可以在用抗體孵育印跡之前快速且容易地識別一些轉印的問題，例如由于存在氣泡而導致的條帶不完全、不均勻的轉移和偽影。 此外，染色膜上的總蛋白為總蛋白標準化定量
做western轉膜，用濕轉電泳，還是半干轉電泳好
半干轉要用專門的半干轉膜儀，而濕轉用電泳儀配附件即可；半干轉所需時間較短，但控制不好，中間發熱比較大容易把膜和膠烘壞；而濕轉耗時較長，尤其對大分子量的蛋白轉膜效果較好。相對來講，還是濕法轉膜的實驗室多一些。
鼎昊源全自動轉印儀Blotstainer在蛋白免疫印跡上的應用
由于蛋白免疫印跡的步驟操作較為繁瑣，要求精度較高，實驗中一步出現操作失誤就會導致整個實驗的白白浪費。并且一抗二抗試劑也比較寶貴，所以采用儀器操作可以降低實驗的風險，保證實驗的順利進行。 鼎昊源推出的全自動轉印儀就是替代人工操作的好選擇，它配有自動移液系統，溫控系統和孵育搖床。自動移液系
以毛細管轉移方式進行北方轉印實驗
?? 要進行北方雜合反應前，必須先將RNA自洋菜膠體轉移至硝化纖維紙（nitrocellulose membrane） 或尼龍膜 （nylon membrane） 上，這一個過程稱為轉印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛細管轉移法 （capillary transfer）、真空轉移法 （
蛋白質印跡實驗——從SDS凝膠上轉移蛋白質
蛋白質印跡（protein blotting ) 也稱為電泳轉移（electropheretic transfer)，即把從電泳或層析分離的蛋白轉移到固定基質上的過程。固定基質通常是一些紙或膜。最通常的蛋白質印跡是將從聚丙烯酰胺凝膠電泳上分離的蛋白質分子轉移到硝化纖維素膜上。本實驗來源「蛋白質電泳實
大分子量蛋白轉印的5個技巧
做western blot印跡膜時，較大的蛋白質眾所周知是難以處理的。 特別是，您可能很難實現良好的轉印效率。 在某些方面，蛋白質難以朝著你想要的方向前進。我們將給5點建議，幫助膠上大分子量蛋白的轉印。01犧牲膠的韌性來提高效率低濃度的丙烯酰胺凝膠可能難以操作。一旦手指觸摸它就會撕裂？ 但是，與
大分子量蛋白轉印的5個技巧
做western blot印跡膜時，較大的蛋白質眾所周知是難以處理的。 特別是，您可能很難實現良好的轉印效率。 在某些方面，蛋白質難以朝著你想要的方向前進。 我們將給5點建議，幫助膠上大分子量蛋白的轉印。 01 犧牲膠的韌性來提高效率 低濃度的丙烯酰胺凝膠可能難以操作。一旦手指觸摸它就會
高靈敏度化學發光技術應用心得
一．概述 化學發光 (ChemiLuminescence ，簡稱為 CL) 分析法是分子發光光譜分析法中的一類，它主要是依據化學檢測體系中待測物濃度與體系的化學發光強度在一定條件下呈線性定量關系的原理，利用儀器對體系化學發光強度的檢測，而確定待測物含量的一種痕量分析方法。化學發光與其它發光
蛋白質印跡的實驗原理、方法與步驟
實驗概要本實驗介紹了蛋白質印跡與探測(Western Blot)實驗原理、方法與步驟。實驗原理Western ?Blot（蛋白質印跡或免疫印跡）技術，以蛋白質為檢測對象，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。實驗采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）將樣品蛋白質分離，再轉移到固相載體（PVDF尼龍膜或N
western－blot－半干轉時濾紙上出現藍色
western blot 半干轉時濾紙上出現藍色marker一般是代表轉過了western blot 半干轉一般是電壓10V轉膜30分鐘就可以了，時間長了就轉到濾紙上去了所以western blot 半干轉時濾紙上出現藍色marker一般是代表轉過了
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗15
方案15 雙向凝膠的半干印跡實驗實驗方法原理當 “ 三明治”結構中的濾紙浸透緩沖液時，半干印跡轉移設備能將蛋白質從凝膠轉移到膜上。和槽式印跡轉移設備相比，半干印跡只用較少的緩沖液；因為電極板靠得很近，故轉移時只要求較低的電壓。實驗材料含有蛋白質樣品的凝膠試劑、試劑盒轉移緩沖液儀器、耗材印跡紙支持性纖
Southern－轉印分析
在膠體中的DNA 可利用毛細現象的作用將DNA 牽引轉印至覆蓋在膠片上的濾膜，經烘烤或UV 照射后，可使DNA 固定在膜上，以進行探針的雜合（hybridization） 反應。儀器用具：玻璃缸；玻璃板或吸水海綿；Crosslinker （Stratalinker 1800, Stratagene）
Western－Blot－實驗試劑選購指南（一）
(一)蛋白質電泳1.請參照常規電泳操作.2.分子量標準:可選擇普通分子量標準或預染的分子量標準.在選擇預染的分子量標準時,要注意其優點和缺點:優點: 在電泳過程中可監控蛋白質分離狀態; 可指示轉印中蛋白質的轉印效率.缺點: 染料影響蛋白質移動速度;分子量測定略欠精確;影響蛋白質與膜的結合力. 購
定量western：最佳的蛋白印跡標準化方法是什么？
現代數字檢測儀器對于western blotting不僅僅是檢測“有或沒有”的技術，還可以進行western blotting重復性和定量的檢測。 在檢測方法的線性動態范圍，對數據進行標準化以控制蛋白上樣量和膜轉印帶來的變化，可以獲得真正的定量結果。 但是，對蛋白印跡進行標準化的最佳方法
蛋白質印跡與探測(Western－Blot)實驗原理、方法與步驟（1）
【實驗原理】Western Blot（蛋白質印跡或免疫印跡）技術，以蛋白質為檢測對象，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。實驗采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）將樣品蛋白質分離，再轉移到固相載體（PVDF尼龍膜或NC膜）上；固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且保持電泳分離的多肽類型及其生物學活
蛋白質印跡實驗——從瓊脂糖凝膠上轉移蛋白質
試劑、試劑盒甘氨酸TrisSDS甲醇實驗步驟1. 溶液配置不連續緩沖系統陽極緩沖液Ⅰ：0.3 mol/L Tris，pH 10.4。陽極緩沖液Ⅱ：25 mmol/L Tris，pH 10.4。陰極緩沖液：40 mmol/L 6-氨基-n-己酸，pH 7.6。2. 轉移單元的組成SDS 凝膠轉移單元的
定量western：最佳的蛋白印跡標準化方法是什么？
現代數字檢測儀器對于western blotting不僅僅是檢測“有或沒有”的技術，還可以進行western blotting重復性和定量的檢測。 在檢測方法的線性動態范圍，對數據進行標準化以控制蛋白上樣量和膜轉印帶來的變化，可以獲得真正的定量結果。 但是，對蛋白印跡進行標準化的最佳方法是什么？
定量westerns：最佳的蛋白印跡標準化方法是什么？
現代數字檢測儀器對于western blotting不僅僅是檢測“有或沒有”的技術，還可以進行western blotting重復性和定量的檢測。 在檢測方法的線性動態范圍，對數據進行標準化以控制蛋白上樣量和膜轉印帶來的變化，可以獲得真正的定量結果。 但是，對蛋白印跡進行標準化的最佳方法是什么？
蛋白質免疫印跡實驗組織蛋白提取
組織蛋白提取 1）所需器材：制冰機、標記筆、兩套1.5ml EP管（最好高溫高壓處理）、一個大冰盒、一個1.5ml EP管盒、手套、眼科剪（最好高溫高壓處理）、新鮮組織或保存于-80℃冰箱組織、保存于4℃冰箱的PBS（最好高溫高壓處理）、移液槍、吸頭（最好高溫高壓處理）、兩套研磨棒（最好高溫高
免疫印跡實驗的原理和方法
免疫印跡是一個用于蛋白質分析的常規技術,在電場的作用下將電泳分離的蛋白從凝膠轉移至一種固相支持物,然后利用抗原-抗體的特異性反應,從蛋白混合物中檢測出目標蛋白,從而定量或定性的確定正常或實驗條件下細胞或組織中目標蛋白的表達情況。Western blotting還可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-