濕轉和干轉,哪個方法更好?
對于一個完美的westernblot實驗,蛋白在聚丙烯凝膠中根據天然分子量進行分離,蛋白被很好的從凝膠上轉移到固相支持物上,然后通過特異性的抗體進行免疫檢測。對于轉印來說,使用濕轉的方法是比較好的,因為凝膠和膜都能夠完全浸沒在轉印buffer中,在半干轉的條件下,轉印是在兩個電極板之間發生,這種類型的轉印裝置可能影響蛋白的轉印效率和膜上的截留能力。對于優化蛋白的轉印條件,每個系統的優缺點都應該考慮進去。濕轉對于一個濕轉過程,要建立一個三明治結構,順序為海綿,濾紙,膜,膠,濾紙,和第二個海綿。在組裝之前,需要將所有部分(包括膠)放在轉印buffer中進行平衡,然后將堆疊的三明治結構用轉印夾夾起來放在轉印裝置上,連上電極裝置,蛋白在轉印buffer中從膠上轉移到膜上。大多數western blot實驗應用都可以使用濕轉。半干轉對于半干轉來說,也需要進行堆疊組裝(濾紙,膠,膜需要放在轉印buffer中進行預平衡)放在裝置電極板的底......閱讀全文
濕轉和干轉,哪個方法更好?
對于一個完美的westernblot實驗,蛋白在聚丙烯凝膠中根據天然分子量進行分離,蛋白被很好的從凝膠上轉移到固相支持物上,然后通過特異性的抗體進行免疫檢測。對于轉印來說,使用濕轉的方法是比較好的,因為凝膠和膜都能夠完全浸沒在轉印buffer中,在半干轉的條件下,轉印是在兩個電極板之間發生,這種類型
濕轉和干轉,哪個方法更好
對于一個完美的westernblot實驗,蛋白在聚丙烯凝膠中根據天然分子量進行分離,蛋白被很好的從凝膠上轉移到固相支持物上,然后通過特異性的抗體進行免疫檢測。 對于轉印來說,使用濕轉的方法是比較好的,因為凝膠和膜都能夠完全浸沒在轉印buffer中,在半干轉的條件下,轉印是在兩個電極板之間發
Western-轉膜時用干轉還是濕轉效果比較好?
關鍵看效果怎么細分,干轉,速度快,效率稍低,濕轉,速度比較慢,轉移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量為主,干轉就挺好的,效率非常高,幾分鐘就做完了。分子量特別大,又沒有其他人的方案做參考,可以先試試濕轉。就是幾個小時等得比較痛苦。好幾個人做的話,真是等到花兒也謝了。至于說效果,不是
做western轉膜,用濕轉電泳,還是半干轉電泳好
半干轉要用專門的半干轉膜儀,而濕轉用電泳儀配附件即可;半干轉所需時間較短,但控制不好,中間發熱比較大容易把膜和膠烘壞;而濕轉耗時較長,尤其對大分子量的蛋白轉膜效果較好。相對來講,還是濕法轉膜的實驗室多一些。
Western-轉膜時用干轉還是濕轉效果比較好
關鍵看效果怎么細分,干轉,速度快,效率稍低,濕轉,速度比較慢,轉移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量為主,干轉就挺好的,效率非常高,幾分鐘就做完了。分子量特別大,又沒有其他人的方案做參考,可以先試試濕轉。就是幾個小時等得比較痛苦。好幾個人做的話,真是等到花兒也謝了。至于說效果,不是
半干轉印與濕式轉印的區別-|-WEALTEC-威泰克
剛接觸 Western Blot 不久的用戶,在選購 WB 設備時,經常會遇到儀器選型的問題:為什么常見的蛋白質電泳的轉膜有兩種方式可以選擇,干式和濕式,那么哪種方法更適合我們呢?這里我們結合美國 WEALTEC 公司的 E-Blotter 濕轉槽和 YRDIMES 快速半干轉印槽舉例說明。
半干轉是否要去膜?
半干轉是否要去膜、濾紙、膠同樣大小,因為膠大小不一定規則,膜和濾紙會大一點,那樣會不會短路?可以相等,但是如果紙、膜比凝膠大就比較容易形成短路了,上下兩層濾紙也不能因過大而相互接觸,這樣會短路,電流不會通過膠和濾紙。轉移前和轉移過程中看看電壓就行,正常的半干轉是慢慢變高的,最后結束時一般是開始的1.
半干電轉印法
先將凝膠緊貼于一塊硝酸纖維濾膜,然后再將這種夾層組合直接置于兩個乎板電極之間,采用這種半干方法可將蛋白質從凝膠中轉印至硝酸纖維素膜上(Kyhse-Andersen1984)。平板可以是石墨(這種平板較便宜,但使用100次后必須更換)制成的,也可以是鉑金的(這種子板價格較貴,但使用壽命較長)。通過電洗
半干電轉印法
實驗概要本方法是先將凝膠緊貼于一塊硝酸纖維濾膜,然后再將這種夾層組合直接置于兩個乎板電極之間,采用這種半干方法可將蛋白質從凝膠中轉印至硝酸纖維素膜上。平板可以是石墨(這種平板較便宜,但使用100次后必須更換)制成的,也可以是鉑金的(這種子板價格較貴,但使用壽命較長)。通過電洗脫將蛋白質從凝膠中轉印至
半干轉膜儀如何使用
以WEALTEC的YRDIMES半干轉膜儀為例,首先確認是轉蛋白質還是核酸。蛋白質可參考Bjerrum and Schafer-Nielsen或Towbin或Dunn緩沖液系統配置緩沖液,電泳后將凝膠浸入緩沖液平衡5分鐘,將轉印膜和濾紙裁切并浸入緩沖液,合上上蓋,按說明書墊上BP-C紙,普通轉印1或
濕式轉印槽使用教程
濕式轉印槽可快速、高質量地轉印小型凝膠。作為電泳系統的一個組件,小型轉印槽能容納2個凝膠三明治轉印夾, 用于在電泳槽內電轉印兩塊小凝膠。
企業為何“不想轉”“不敢轉”“不會轉”?
企業“不想轉”“不敢轉”“不會轉”,資源要素支撐相對不足,高端化、智能化、綠色化、融合化水平參差不齊,轉型升級環境尚待優化……7月4日,在“粵商·省長面對面協商座談會”上,關于傳統產業轉型升級的討論熱火朝天。 習近平總書記在二十屆中央財經委員會第一次會議上強調,“堅持推動傳統產業轉型升級,不能
western-濕轉-時間長了會怎樣
western 濕轉時間長了造成的影響,要具體結合目標蛋白分子量等來分析一般如果目標蛋白分子量很小,而膜的孔徑較大。轉膜緩沖液條件使得蛋白移動快或者缺乏幫助蛋白與膜結合的性質,則有可能過度轉膜,即蛋白穿過膜而丟失如果目標蛋白分子量非常大,而緩沖液條件不促進它的移動,即使濕轉時間很長也有可能未將目的蛋
半干轉印系統操作使用說明
一.簡介美國Bio-Rad公司的Trans-Blot SD型半干轉印系統是在電場的作用下把聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠上的蛋白或核酸條帶轉移到硝酸纖維素膜上,其運用了電泳檢測的方法,使得蛋白或核酸從凝膠中進行分離轉移到硝酸纖維素膜上,由于硝酸纖維素膜的可支撐性,使得蛋白或核酸條帶能夠在電泳后繼續做
western-blot-半干轉時濾紙上出現藍色
western blot 半干轉時濾紙上出現藍色marker一般是代表轉過了western blot 半干轉一般是電壓10V轉膜30分鐘就可以了,時間長了就轉到濾紙上去了所以western blot 半干轉時濾紙上出現藍色marker一般是代表轉過了
轉管培養法與轉瓶培養
轉管培養法(roller tube culture)是Gey 提出的,實驗室常用,為了擴大細胞產量,將試管改用轉瓶,故稱轉瓶培養,其培養方法是一樣的,試管或轉瓶固定在支加上,傾斜度為5°~10°左右,或將轉瓶放在一排排轉軸之間,使轉瓶隨著轉軸以每小時6~12 轉緩慢轉動。細胞貼附于玻璃壁
電泳、轉膜
轉膜是把DNA從瓊脂糖凝膠中轉移到固相支持物(一般是尼龍膜)上固定,是進行各種后續研究(如RFLP分析,陽性克隆的篩選驗證等所有涉及分子雜交的研究)的前提。實驗目的:掌握Southern blotting的原理及操作步驟。實驗原理:1. 轉膜的方式: 向上的毛細管轉移 向下的毛細管轉移 同時向
western-blot-試驗中蛋白轉膜總轉不上去
當然,首先要考慮的問題是你轉過頭了,蛋白質跑出去了。其次你的電流有點大,你也沒說轉了多久?用的干轉還是濕轉?是不是拿出來的時候很熱?這種情況有可能使蛋白質降解。我們一般是濕轉用100mA轉2小時, 干轉所需電流更小。
大氣“推著”金星轉
金星的“超級旋轉”大氣層也許為其自轉“添了一把柴”。6月18日,《自然—地球科學》在線發表的一項研究報告稱,金星的自轉速度,會隨著其密集、快速流動的大氣與其表面山脈之間的相互作用而發生改變。 金星自轉緩慢,自轉1周需要大約243個地球日。然而,金星探測器的測量尚未就1個金星日的精確長度達成一致
轉決定的概念
一般胚胎細胞一旦決定, 沿著特定類型進行分化的方向是穩定的, 但在果蠅中發現了某種突變體或培養的成蟲盤細胞中有時會出現不按已決定的分化類型發育, 而生長出不是相應的成體結構, 這種現象叫轉決定。
西紅柿基因轉殖
隨著生物科技的發展,利用遺傳工程,藉由 DNA 載體把外來基因導入植物體內,已經成功且高效率地育成傳統育種法無法獲得的作物新品種,改良作物承受逆境的能力,以減少損失或提高單位面積的產量,并減緩土地無限開發及農藥肥料的濫用,省工又省成本。在各種植物基因轉殖法中,比較常用的是基因槍轉植、農桿菌轉殖及電穿
轉氨基的作用
大多數氨基酸在進行分解代謝之初,首先通過轉氨基作用將α-氨基轉移給α-酮戊二酸,使其形成谷氨酸和相應的α-酮酸(α-ketoacid)。轉氨基作用是氨基酸在氨基轉移酶(aminotransferase)或稱轉氨酶(transaminase)催化下,可逆地把α-氨基酸的氨基轉移給α-酮戊二酸,使α-氨
電泳、轉膜概述
轉膜是把DNA 從瓊脂糖凝膠中轉移到固相支持物(一般是尼龍膜)上固定,是進行各種后續研究(如 RFLP 分析,陽性克隆的篩選驗證等所有涉及分子雜交的研究)的前提。實驗目的:掌握 Southern blotting 的原理及操作步驟實驗原理:1.轉膜的方式:向上的毛細管轉移向下的毛細管轉移同時向兩張膜
Western轉膜步驟
下面的步驟適用于通過Xcell Ⅱ轉印系統進行蛋白印記的大部分應用。為達到最佳效果,用戶的優化是必要的。I. 所需材料:?Xcell SureLock?或Xcell Ⅱ? Mini-Cell以及Blot Module(Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051)?電泳后的迷你膠
Southern轉膜方法
Southern轉膜方法(毛細管虹吸印跡法、電轉移法與真空轉移法)將凝膠中的DNA進行堿變性并將pH值恢復至中性后,即可將凝膠中的DNA片段轉移到固相支持物上。用于轉膜的固相支持物有多種,包括硝酸纖維素濾膜(NCM)、尼龍膜、化學活性膜和濾紙等,Southern轉膜時可根據需要選擇不同的固相支持物用
Southern-轉印分析
在膠體中的DNA 可利用毛細現象的作用將DNA 牽引轉印至覆蓋在膠片上的濾膜,經烘烤或UV 照射后,可使DNA 固定在膜上,以進行探針的雜合(hybridization) 反應。儀器用具:玻璃缸;玻璃板或吸水海綿;Crosslinker (Stratalinker 1800, Stratagene)
轉肽酶的介紹
轉肽酶(sortase)功能:在蛋白質生物合成過程中肽鍵的形成具有必須的作用。轉肽酶識別特異多肽,催化不同的轉肽反應。 在體內分布很廣,如腎、肝、胰等臟器均有些酶。但血清中GGT主要來自肝臟,具有較強的特異性。所以當肝膽系統病變的時候,GGT活性升高,臨床上測定此酶活性來協助診斷肝膽疾病。
轉肽酶是什么?
轉肽酶(transpeptidase)是一種酶,它參與蛋白質合成過程中的肽鏈轉移反應。在細菌細胞壁的合成過程中,轉肽酶起著至關重要的作用。 具體來說,轉肽酶能夠催化兩個多肽鏈之間的氨基酸殘基之間的化學反應,從而使它們通過肽鍵連接起來形成一個完整的蛋白質分子。在細菌細胞壁的合成過程中,轉肽酶負責
電泳儀電泳槽半干轉印電泳槽
電泳儀,半干轉(半干轉印電泳槽)一、兩塊膠電泳和四塊膠電泳Mini P-4小型垂直電泳槽?
電泳儀電泳槽半干轉印電泳槽
電泳儀,半干轉(半干轉印電泳槽) 一、兩塊膠電泳和四塊膠電泳 Mini P-4小型垂直電泳槽