由于蛋白免疫印跡的步驟操作較為繁瑣,要求精度較高,實驗中一步出現操作失誤就會導致整個實驗的白白浪費。并且一抗二抗試劑也比較寶貴,所以采用儀器操作可以降低實驗的風險,保證實驗的順利進行。
鼎昊源推出的全自動轉印儀就是替代人工操作的好選擇,它配有自動移液系統,溫控系統和孵育搖床。自動移液系統包括10個管路,相互獨立,避免交叉感染。溫控系統范圍在4℃到80℃之間,滿足蛋白免疫印跡,核酸分子雜交實驗的孵育溫度。整套系統根據客戶自定義的操作程序自動完成。為了方便客戶使用,全自動轉印儀出廠預設了免疫印跡,核酸雜交,原位雜交和免疫組化的自動程序。
內置標準蛋白免疫印跡程序如下:
Step
Task
Time
Action
Buffer
Memo
Execute x times
1
Set temp
Off
Temperature to RT
2
Incubate
00:05
Wash
PBST
Wash membrane
X2
3
Set temp
ON, 10℃
Temperature 10℃
4
Incubate
01:00
Blocking
Block solution
Blocking
5
Incubate
02:00
AB-step
Primary antibody
Primary antibody
6
Incubate
00:05
Wash
PBST
Wash membrane
X4
7
Incubate
00:30
Sec. antibody
Second antibody
Second antibody
8
Set temp
Off
Temperature to RT
9
Wash
00:05
PBST wash
PBST
PBST wash
X10
10
Ready to stain in dark room
1、 設置溫度到室溫
2、 用0.01M PBS洗膜,5min ×2次。
3、 設置溫度到10℃
4、加入包被液,平穩搖動,1hr。
5、加入一抗(按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋,液體必須覆蓋膜的全部),2hr。
6、棄一抗,用0.01M PBS分別洗膜,5min×4次。
7、加入二抗(辣根過氧化物酶偶聯)(按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋),0.5hr。
8、設置溫度到室溫
9、棄二抗,用0.01M PBS洗膜,5min×10次。
10、加入顯色液,避光顯色至出現條帶時放入雙蒸水中終止反應。
全自動轉印儀在上述程序中可以實現在蛋白免疫印跡孵育過程中的溫控,更加保證一抗二抗的活性,這是一般手工操作所達不到的。
整套程序5個小時內自動完成,不需要人工換液和取出薄膜。當然上述程序可以按照用戶實際需要來調整全自動轉印儀的程序。