蛋白質免疫印跡制備分離膠、積層膠
1）所需器材：制冰機、制膠槽、Teflon梳子、小燒杯、手套、大冰盒、去離子水、30%聚BXXA溶液、1.5mol/L的Tris-cl（PH值8.8）、1.0mol/L的Tris-cl（PH值6.8）、10%SDS（十二烷基磺酸鈉）、10%AP（過硫酸銨）、TEMED（四甲基乙二胺）、移液槍、吸頭。 2）操作步驟 a.制冰機制冰； b.將制膠槽雙層玻片裝進制膠槽小夾子（雙層玻片左右方及下方要注意對齊），濾紙吸干雙層玻片中殘留液體，再將小夾子裝進制膠槽大夾子，平放（制膠槽所放平面一定要水平）； c.將大冰盒裝上冰，戴好手套，取出保存于4℃冰箱的30%聚BXXA溶液、1.5mol/L的Tris-Hcl(PH值8.8)、1.0mol/L的Tris-cl(PH值6.8)、TEMED、保存于-20℃冰箱的10%AP，備好存放于常溫的去離子水、10%SDS，根據所需配制的分離膠濃度及量，依次往小燒杯中加不同體積的去離子水、30%......閱讀全文
蛋白質的單向SDS凝膠電泳實驗——制備多塊梯度膠
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒TEMED丙烯酰胺儀器、耗材離心管電泳儀實驗步驟1. ?如灌制均一濃度凝膠一樣在多板凝膠灌制裝置中組裝好微型膠夾層。?2. ?如圖一、安裝好30 ml 梯度發生器、磁力攪拌器、蠕動泵（可選用）和聚乙烯Tygon管，梯度發生器的輸出端連接于制膠室下方的輸入口。圖一3. ?配制
SDSPAGE－蛋白質樣品的制備
SDS-PAGE 蛋白質樣品的制備 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 SDS-PAGE Loading Buffer ddH2O
蛋白質電泳槽－Western－Blot－垂直電泳制膠器漏膠問題分析
Western Blot轉膜之前免不了要在蛋白質垂直電泳槽中跑膠分離蛋白質。關于制膠，大多數用戶還是喜歡用電泳槽配套的制膠器來自己制膠跑電泳，經濟實惠。但是很多實驗室因為設備已經使用多年，常會發現垂直電泳槽的制膠器沒有原來好用了，經常會有“漏膠”或者“漏液”的現象，也就是說，凝膠溶液還沒有來
western－blotting－分離膠濃度是如何計算的
WESTERN技術中，分離膠的濃度是按聚丙烯酰胺的濃度來計算的。一般先配置30%的丙叉-亞甲叉母液，以配置10%濃度的分離膠10毫升為例，則需要30%的母液為（10%/30%）*10毫升。反過來，只要你知道用多少毫升30%的母液時，就能推算出膠的濃度了。
10分鐘了解血清分離膠
血清分離膠是一種粘性流體，其結構中含有大量氫鍵，由于氫鍵的締合作用形成網狀結構。在離心力的作用下，網狀結構被破壞，變成粘度低的流體。當離心力消失之后又重新形成網狀結構．恢復成粘度高的流體．這種性質被稱為觸變性(thixotropy)．利用這一特性可制成一種血清分離膠。當分離膠與凝固后的血液在同一
云石膠，AB膠，環氧石材干掛膠有什么區別
主要區別是，主要成分不同、主要特點不同、適用性不同，具體如下：一、主要成分不同1、云石膠主要成分：環氧樹脂和不飽和樹脂。2、AB膠主要成分：丙烯酸、環氧、聚氨酯。3、干掛膠主要成分：環氧樹脂、有機填充料、石英粉等。二、主要特點不同1、云石膠云石膠性能的優良主要體現在硬度、韌性、快速固化、拋光性、耐候
云石膠，AB膠，環氧石材干掛膠有什么區別
云石膠的主要成分是不飽和樹脂膠，也是AB膠的一種；AB膠有很多種類，如丙烯酸AB膠，聚氨酯AB膠，環氧AB膠，不飽和樹脂AB膠等，AB膠主要是指膠水用之前是一個樹脂，一個固化劑，用之間是分開存放的，用的時候，把AB組分混合在一起，就會固化，產生膠粘的效果；環氧石材干掛膠的主要成分是環氧樹脂，也是一種
Western－Blot操作步驟（一）
背景：蛋白質印跡的發明者是斯坦福大學George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被稱為Western Blot。最開始做印跡的是一個叫Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術稱為Southern
怎樣根據蛋白質大小確定SDSPAGE電泳分離膠的濃度
你可以用12%的膠濃度，如果marker是fermentas家的SDS非預染marker（批號SM0431）的話，可以看到116kd 66.2kd 45kd 35kd 25kd 18.4kd 14.4kd，這樣你的目的條帶20kd就差不多在整塊膠的中間
怎樣根據蛋白質大小確定SDSPAGE電泳分離膠的濃度
按的是你丙烯酰胺和雙丙烯酰胺的總質量與膠總體積的質量體積比（m/v）首先你要將上述藥品粉末按照19:1或29:1的比例用水配置成母液（一般為30%,也是m/v）而10%,12%,16%你自然也就知道應該用多少的母液去配制了.相信如何配膠你是知道的.
WB實驗中9％和11.5％的分離膠凝固時間是否不同
時間上應該會略有不同。擴展知識：WB，蛋白質印跡(Western blotting)又稱免疫印跡(immunoblotting)，是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫
WB操作規程
一、設備和試劑1．設備① 電泳電源Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell,Mini Teans-Blot Module,and PowerPac Basic Power Supply (BIO-RAD,Catalog#165-3323)② 電泳儀及附件Mini-PRO
電泳做Western免疫印跡操作步驟
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。1、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠
蛋白質凝膠電泳凝膠的制備
蛋白質凝膠電泳通常用于（1）分析分子生物學、遺傳學和生物化學（2）制備技術（3)采用某些方法（如質譜(MS)、聚合酶鏈式反應(PCR)、克隆技術、DNA測序或者免疫印跡）檢測之前部分提純分子。實驗方法原理將蛋白質樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS)以及硫基乙醇一起加熱，使蛋白質變性，多肽鏈內部
蛋白質的單向SDS凝膠電泳實驗——均一濃度的微型凝膠電泳
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒電泳緩沖液儀器、耗材電泳儀梳子注射器夾子實驗步驟1. ?按順序安裝帶凹口的小玻璃平板或小矩形玻璃平板、0.75 mm 墊片、大矩形玻璃平板疊放在一起組裝成夾層，并確保夾層放入多膠灌制裝置后，墊片能安放妥當，兩頭均與玻璃平板的上下邊緣對齊。?2. ?將凝膠夾層緊密地安放在多板
冷膠噴膠機的簡介和用途
在糊盒機上使用冷膠噴膠系統替代傳統的滾輪上膠，具有高效、靈活、穩定性好、操作維護簡便等優勢，是快速、高質量生產各種紙盒的必備產品。高壓活塞泵和高壓電子噴槍等具有先進的性能和可靠性，是全自動糊盒機的最佳搭檔。 冷膠噴膠機的用途 科祺冷膠噴膠系統具有高效、靈活、穩定性好、維護簡便等特點，是快速、
LED貼片膠與滴膠基本知識
1、貼片膠的作用表面黏著膠(SMA, surface mount adhesives)用于波峰I接和回流I接，主要用來將元器件固定在印制板上，一般用點膠或鋼網印刷的方法來分配，以保持元件在印刷電路板(PCB)上的位置，確保在裝配線上傳送過程中元件不會丟失。貼上元器件后放入烘箱或再流焊
什么叫正膠顯影和負膠顯影
正膠顯影：正性光刻膠的曝光區的光刻膠在顯影液中溶解，在光刻膠上形成三維圖形。負膠顯影：在負性光刻膠的非曝光區的光刻膠在顯影液中溶解，在光刻膠上形成三維圖形。正膠具有很好的對比度，所以生成的圖形具有良好的分辨率，其他特性如，臺階覆蓋好、對比度好；粘附性差、抗刻蝕能力差、高成本。負膠的特性為，具有良好的
蛋白質免疫印跡實驗
實驗步驟 操作流程(1)制備與凝膠大小一致的硝酸纖維素膜一張，吸水濾紙 2 張 (Whatman 3 MM)。(2) 將凝膠在轉印緩沖液中浸泡 30m in，將轉移膜、濾紙和海綿墊也在同樣的緩沖液浸濕。(3) 安裝轉印「夾心三明治」。將凝膠放置在玻璃平板上，然后將一張浸濕的濾紙放在凝膠上，如
蛋白質免疫印跡實驗
蛋白質免疫印跡實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 操作流程 (1)制備與凝膠大小一致的硝酸纖維素膜一張，吸水濾紙 2 張
蛋白質免疫印跡技術
實驗概要免疫印跡是利用聚丙烯酰胺凝膠電泳來檢測樣品或提取物中某種特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝膠緊貼著膜放置，在電流的作用下蛋白質從凝膠遷移到膜上并且被固定，常用的膜是硝酸纖維素或 PVDF（聚偏乙烯氟化物）。膜是凝膠蛋白質的復制品，然后可以與抗體結合后進行染色。實驗步驟1.?? 樣品準備1)?? 抽
蛋白質免疫印跡實驗
這是一個建立在 B urnette 實驗方案基礎上的實驗流程，小于 80k D a 的蛋白質的轉移效果很好并且結果穩定, 重復性好。應用這種膜轉移方法，我們利用多克隆抗體在下面的樣本中檢測目的蛋白：哺乳動物細胞和細菌溶解產物、細胞培養上清、組織提取物以及組織液。雖然下列實驗條件是根據我們自己的實驗需
藥物誘導細胞凋亡時Bcl2蛋白含量的變化
【原理】Western印跡法，把聚丙烯酰胺凝膠電泳分離的組分從凝膠轉移至一種固定支持體，以針對特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測之。對于蛋白質來說，通常使用的探針是抗體，它與附著于支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。【試劑與器材】1.細胞裂解液：50mmol/LTris-HCl,150
SDSPAGE－蛋白質樣品的制備
試劑、試劑盒?SDS-PAGE Loading BufferddH2O30%丙烯酰胺混合液1.5M Tris(pH8.8) 10%SDS10%過硫酸銨TEMEDTris-甘氨酸電泳緩沖液溴酚藍考馬斯亮藍 R-250 染色液考馬斯亮藍脫色液儀器、耗材?離心機冷室水浴鍋電泳裝置微量移液器水平搖床濾紙實驗
SDSPAGE－蛋白質樣品的制備
試劑、試劑盒SDS-PAGE Loading BufferddH2O30%丙烯酰胺混合液1.5M Tris(pH8.8)10%SDS10%過硫酸銨TEMEDTris-甘氨酸電泳緩沖液溴酚藍考馬斯亮藍 R-250 染色液考馬斯亮藍脫色液儀器、耗材離心機冷室水浴鍋電泳裝置微量移液器水平搖床濾紙實驗步驟實
酶消化法從Wharton膠中分離干細胞
試劑和材料：1. 培養基：完全LG-DMEM：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM，添加10%熱滅活胎牛血清，100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；2. PBSA；3. 胰蛋白酶，2.5%；4. 膠原酶A，0.1%用PBSA配制；5. 培養瓶；6. 圓錐形離心管，50ml；7. 剪刀
westernblot中分離膠的濃度怎么選擇
western?blot中分離膠濃度的選擇取決于目的蛋白分子量 不同的分離膠濃度對不同的目的蛋白分子量的分辨率不一樣，比如15%的分離膠更適合45kDa的分目的蛋白，而10%的分離膠更適合70kDa的目的蛋白而因為western blot的膜應該是完全覆蓋SDS PAGE的凝膠，所以不用太擔心條帶在
血清分離膠促凝采血管的使用
?如何正確地使用分離膠促凝采血管制備高質量血清標本,血液完全凝固和離心條件是至關重要的兩個環節,離心要求采用水平式離心機。??? 具體操作步驟如下:????????采血后立即輕輕倒轉采血試管4~5次混勻標本,等待標本充分凝固需要放置30min,離心半徑200px,離心速度維持在3500~4000r/
westernblot中分離膠的濃度怎么選擇
western?blot中分離膠濃度的選擇取決于目的蛋白分子量 不同的分離膠濃度對不同的目的蛋白分子量的分辨率不一樣，比如15%的分離膠更適合45kDa的分目的蛋白，而10%的分離膠更適合70kDa的目的蛋白而因為western blot的膜應該是完全覆蓋SDS PAGE的凝膠，所以不用太擔心條帶在