NorthernBlotting轉印實驗（毛細管轉移法）
要進行Northern雜合反應前，必須先將RNA自洋菜膠體轉移至硝化纖維紙（nitrocellulose membrane） 或尼龍膜 （nylon membrane） 上，這一個過程稱為轉印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛細管轉移法 （capillary transfer）、真空轉移法 （vacuum transfer） 與電轉印法 （electroblotting）。 毛細管轉移法借助吸水紙吸收轉移緩沖液時所產生的牽引力量將RNA自洋菜膠體轉移至膜上；要轉印完全，起碼需要作用6 h以上。 雖然所需花費的時間比較長，以其不須要特別的儀器設備，毛細管轉移法目前仍被普遍采用。 若分析RNA時采用變性聚丙烯酰胺膠體電泳，則必須以電轉印法進行RNA轉印。至于膜的選擇，硝基纖維素膜的優點是比較不會產生非專一性反應；不過其一旦被潤濕再烘干的后，容易碎裂，不適用于進行多次雜合反應。 尼龍膜的優點是韌性好......閱讀全文
Northern－Blotting轉印實驗（毛細管轉移法）
要進行Northern雜合反應前，必須先將RNA自洋菜膠體轉移至硝化纖維紙（nitrocellulose membrane） 或尼龍膜 （nylon membrane） 上，這一個過程稱為轉印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛細管轉移法 （capillary transfer）、
以毛細管轉移方式進行Northern－Blotting轉印實驗
要進行北方雜合反應前，必須先將RNA自洋菜膠體轉移至硝化纖維紙（nitrocellulose membrane） 或尼龍膜 （nylon membrane） 上，這一個過程稱為轉印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛細管轉移法 （capillary transfer）、真空轉移法 （vac
Northern－Blotting－實驗操作指南
實驗概要本文介紹了Northern Blotting實驗詳細操作流程。實驗材料1. 試劑盒提供NorthernMax (Formaldehyde-Based System for Northern Blots)[Catlog#1940]6ml?? -20℃????? Formaldehyde Loa
以毛細管轉移方式進行北方轉印實驗
?? 要進行北方雜合反應前，必須先將RNA自洋菜膠體轉移至硝化纖維紙（nitrocellulose membrane） 或尼龍膜 （nylon membrane） 上，這一個過程稱為轉印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛細管轉移法 （capillary transfer）、真空轉移法 （
Southern－印跡實驗——電轉印法
實驗方法原理因為聚丙烯酰胺凝膠的扎徑太小，DNA不能在其橫截面上有效地擴散，毛細管轉移法不適用DNA從聚丙烯酰胺凝膠的轉移。因此，聚丙烯酰胺凝晈必須在低離子強度的緩沖液中用電轉移法進行印跡。實驗材料DNA試劑、試劑盒TBE儀器、耗材Scotch-Brite墊Whatman濾紙實驗步驟1. ?在非變性
Northern－blotting操作步驟
1. 取RNA2. 將電泳槽和板，梳齒浸泡在3%H2O2中20-30分鐘，并吹干3. 跑 1%瓊脂糖凝膠，檢測樣本RNA含量4. 變性膠在桌面上利用保險膜鋪出一塊干凈的區域，將1.95g 瓊脂糖加入 110ml 的 DEPC-H2O （加熱前可在三角瓶上做一個記號，在加熱后把蒸發的水分補足）加熱
蛋白質轉印法
蛋白質經SDS-PAGE后，膠片浸入轉印緩沖液，蛋白質可被轉印到硝化纖維紙（nitrocellulose） 上，先經尿素洗去SDS，并使蛋白質回復原態抗原性，可使用抗體進行免疫染色 （Towbin et al, 1979）。儀器用具：電泳轉印槽 （Hoefer Transphor TE 52）：轉印
半干電轉印法
實驗概要本方法是先將凝膠緊貼于一塊硝酸纖維濾膜，然后再將這種夾層組合直接置于兩個乎板電極之間，采用這種半干方法可將蛋白質從凝膠中轉印至硝酸纖維素膜上。平板可以是石墨(這種平板較便宜，但使用100次后必須更換)制成的，也可以是鉑金的(這種子板價格較貴，但使用壽命較長)。通過電洗脫將蛋白質從凝膠中轉印至
半干電轉印法
先將凝膠緊貼于一塊硝酸纖維濾膜，然后再將這種夾層組合直接置于兩個乎板電極之間，采用這種半干方法可將蛋白質從凝膠中轉印至硝酸纖維素膜上（Kyhse-Andersen1984）。平板可以是石墨（這種平板較便宜，但使用100次后必須更換）制成的，也可以是鉑金的（這種子板價格較貴，但使用壽命較長）。通過電洗
Northern－Blotting反應方法步驟
Northern雜合反應的步驟主要包括：（1） 加入核酸探針，使與固定于尼龍膜上的特定RNA 進行雜合反應；（2） 待雜合反應結束后以含鹽緩沖液與SDS 洗掉非專一性結合于尼龍膜上的核酸探針。 進行反應時應注意下列幾個問題：a. 實驗操作過程仍應盡可能避免RNase 的污染；b. 反應前應先進行雜合
Southern－轉印分析
在膠體中的DNA 可利用毛細現象的作用將DNA 牽引轉印至覆蓋在膠片上的濾膜，經烘烤或UV 照射后，可使DNA 固定在膜上，以進行探針的雜合（hybridization） 反應。儀器用具：玻璃缸；玻璃板或吸水海綿；Crosslinker （Stratalinker 1800, Stratagene）
新技術助蛋白質轉印法提速
在發明蛋白質印跡法（Western Blot）出現了30多年之后，這項技術仍然是獲取特定蛋白可靠鑒定的關鍵。許多近期涌現的產品利用各種方法來提高蛋白質印跡實驗的可重復性、敏感性、定量性以及速度。 有三個人都被認為發展了蛋白質的免疫印跡方法，但其中只有一人才算得上是“Western B
蛋白質轉印法檢定蛋白質
蛋白質轉印法檢定蛋白質?????蛋白質經SDS-PAGE后，膠片浸入轉印緩沖液，蛋白質可被轉印到硝化纖維紙（nitrocellulose）?上，先經?素洗去SDS，并使蛋白質回?原態抗原性，可使用抗體進?免疫染色?（Towbin?et?al,?1979）。儀器用具：電泳轉印槽?（Hoefer?Tra
Southern－印跡實驗——向下毛細管轉移法
實驗方法原理向上毛細管轉移法的一個缺點是凝膠可能被加于其上面的加有重物的濾紙層和紙巾塔壓緊，從而降低毛細管作用。實驗材料DNA試劑、試劑盒SSC儀器、耗材轉移塔濾紙實驗步驟一、實驗步驟1. ?按印跡法步驟1~4（高鹽轉移）所述處理凝膠。2. ?如下圖所示，安裝轉移塔，其組成依次為（1）置于一玻璃平皿
浸入式電轉印
實驗概要采用浸入法將蛋白質從凝膠轉移至硝酸纖維素膜是先將凝膠緊貼于一塊硝酸纖維素膜，然后再將這種夾層組合浸入盛有大量緩沖液的轉印槽內，使電流從轉印槽的一側通向另一側。通過電洗脫的方法可將蛋白質從凝膠中轉印至濾膜上，如同在凝膠中遷移，只不過移動方向與膠平面垂直。若操作仔細，這是一種可將許多蛋白質轉印至
半干轉印與濕式轉印的區別－|－WEALTEC－威泰克
剛接觸 Western Blot 不久的用戶，在選購 WB 設備時，經常會遇到儀器選型的問題：為什么常見的蛋白質電泳的轉膜有兩種方式可以選擇，干式和濕式，那么哪種方法更適合我們呢？這里我們結合美國 WEALTEC 公司的 E-Blotter 濕轉槽和 YRDIMES 快速半干轉印槽舉例說明。
Southern－轉印分析方法步驟
在膠體中的DNA 可利用毛細現象的作用將DNA 牽引轉印至覆蓋在膠片上的濾膜，經烘烤或UV 照射后，可使DNA 固定在膜上，以進行探針的雜合（hybridization） 反應。儀器用具：玻璃缸；玻璃板或吸水海綿；Crosslinker （Stratalinker 1800, Stratagene）
Western－blot轉印的優化
從SDS凝膠中進行Western蛋白轉印的優化需要對一系列參數進行考慮。目的是轉印所有凝膠上的蛋白并將其定量地轉移到轉印膜上。進行高效轉印需要一定程度的優化，尤其是對于大分子量和小分子量蛋白。轉印后，凝膠上應不殘留或殘留很少的蛋白。可以在轉印后進行染色進行檢測。轉移出凝膠的蛋白應該僅在接觸凝膠的膜的
western－blotting轉膜是根據什么原理
原理：westernblotting轉膜一般采用“濾紙-凝膠-膜-濾紙”夾心法，凝膠靠近負極，膜靠近正極。因為蛋白上結合有sds，因而帶負電，在電流的作用下會從負極向正極運動，從而轉移到膜上。
western－blotting轉膜是根據什么原理
原理：westernblotting轉膜一般采用“濾紙-凝膠-膜-濾紙”夾心法，凝膠靠近負極，膜靠近正極。因為蛋白上結合有sds，因而帶負電，在電流的作用下會從負極向正極運動，從而轉移到膜上。
轉印槽使用方法步驟
伯樂bio-rad轉印槽可快速、高質量地轉印小型凝膠。作為Mini-PROTEAN 3 電泳系統的一個組件，伯樂bio-rad轉印槽能容納2 個凝膠支架轉印夾，用于在Mini-PROTEAN 3 電泳槽內電轉印兩種小凝膠（Mini-PROTEAN 3 凝膠和ReadyGel 預制膠）。伯樂b
濕式轉印槽使用教程
濕式轉印槽可快速、高質量地轉印小型凝膠。作為電泳系統的一個組件，小型轉印槽能容納2個凝膠三明治轉印夾， 用于在電泳槽內電轉印兩塊小凝膠。
Northern－blot實驗
Northern blot技術 Northern Blot ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離，再轉移至尼龍膜等固相膜載體上，
Northern－blot實驗
實驗方法原理 Northern blot的基本概述是將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離，再轉移至尼龍膜等固相膜載體上，用放射性或非放射性標記DNA或RNA特異性探針對固定于固相膜上的mRNA進行雜交，洗膜去除非特異性結合雜交信號，經放射自顯影或現色反應，對雜交信號進行分析。將雜交的m
電泳及轉膜技術
實驗概要掌握 Southern blotting 的原理及操作步驟實驗原理?1．轉膜的方式：????? 向上的毛細管轉移????? 向下的毛細管轉移????? 同時向兩張膜轉移????? 電轉移????? 真空轉移?2．固相支持物的種類及選擇：???? 硝酸纖維素膜：非共價結合，易脆，易丟失 DNA
放線菌形態觀察實驗——印片法
實驗方法原理將要觀察的放線菌的菌落或菌苔，先印在載玻片上，經染色后觀察。這種方法主要用于觀察孢子絲的形態、孢子的排列及其形狀等。方法簡便、但形態特征可能有所改變。實驗材料細黃鏈霉菌／青色鏈霉菌／弗氏鏈霉菌試劑、試劑盒石炭酸復紅染液儀器、耗材滅菌的高氏1號瓊脂平皿蓋玻片載玻片接種環接種鏟／解剖刀鑷子顯
分子雜交方式介紹
1、固相雜交將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板等。由于固相雜交后，未雜交的游離片段可容易地漂洗除去，膜上留下的雜交物容易檢測和能防止靶DNA自我復性等優點，所以最為常用。常用的固相雜交類型有：菌落原位雜交、
分子雜交的方式介紹
1、固相雜交將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板等。由于固相雜交后，未雜交的游離片段可容易地漂洗除去，膜上留下的雜交物容易檢測和能防止靶DNA自我復性等優點，所以最為常用。常用的固相雜交類型有：菌落原位雜交、
分子雜交方式介紹
1、固相雜交將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板等。由于固相雜交后，未雜交的游離片段可容易地漂洗除去，膜上留下的雜交物容易檢測和能防止靶DNA自我復性等優點，所以最為常用。常用的固相雜交類型有：菌落原位雜交、
轉膜實驗原理與操作步驟
轉膜是把DNA從瓊脂糖凝膠中轉移到固相支持物(一般是尼龍膜)上固定，是進行各種后續研究(如 RFLP 分析，陽性克隆的篩選驗證等所有涉及分子雜交的研究)的前提。 實驗目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步驟 實驗原理： 1. ?轉膜的方式： 向上的毛細管