剛接觸 Western Blot 不久的用戶,在選購 WB 設備時,經常會遇到儀器選型的問題:為什么常見的蛋白質電泳的轉膜有兩種方式可以選擇,干式和濕式,那么哪種方法更適合我們呢?這里我們結合美國 WEALTEC 公司的 E-Blotter 濕轉槽和 YRDIMES 快速半干轉印槽舉例說明。

我們一般會優先推薦大家選購
YRDIMES 快速半干轉印系統,因為干式轉印速度很快(常規轉膜 30-60min,快速轉膜 7-10min),操作也簡單,并且
YRDIMES 快速半干轉膜系統性價比非常高,不僅整體儀器采購成本低,并且整個系統采用分體設計:YRDIMES 快速半干轉印槽 +
ELITE200 高電流電泳儀。

這點區別于市面很多把轉印槽和電源做成一體設計的快轉系統,為了打包銷售,給用戶帶來額外預算負擔。快速半干轉膜系統分體設計也就意味著:YRDIMES
半干轉印槽部分可以與實驗室其他電泳儀兼容,同時,配套的 ELITE 200
高電流電泳儀可以兼容實驗室其他電泳或者轉印槽,儀器利用率非常高,并且后期維護成本非常低。
YRDIMES 的快轉成本也很低,如果需要做7 -10 分鐘快速轉膜時,只需要單獨購買快速緩沖液,而無需每次轉膜都購買全套一次性專用耗材包。
大多數實驗室需要做轉膜的蛋白質都是分子量在 0-200 KD 之間的小蛋白質分子,比如常用的內參 Beta Actin 蛋白質分子量為 42 KD,這些小分子蛋白都適合使用半干轉印。
但是有一種情況我們會建議用戶考慮濕轉,比如大分子量 500 kd 的 Native-Gel 這種轉膜,因為半干轉膜的特點是大尺寸電極板利用強電場快轉,但是蛋白質分子量如果太大,運動速度就會減慢,而半干轉膜的緩沖液僅僅是靠著上下濾紙浸潤的緩沖液提供離子。
這時候如果轉膜需要時間太長,容易出現濾紙和膠塊被烤干的情況,導致轉膜結果不穩定,如果實驗室經常需要轉膜這種大分子量蛋白質,但又是希望借用半干轉膜技術縮短時間提高效率。
我們建議轉膜時選用加厚的濾紙,并且使用新鮮配置的緩沖液,充分浸泡轉印體系使用;或者使用 E-Blotter 濕轉槽在充足緩沖液條件下用較長時間轉膜。

E-Blotter 濕轉槽相比半干轉印槽購置成本較低,同時因為濕轉槽的電極板是鉑金絲構成,不是大尺寸整塊電極板,所以可以配合功率較低、較為基礎通用的ELITE300/300PLUS 電泳儀使用。
濕轉(或者叫濕法)的優點是,可以對不論大分子量還是小分子量蛋白質,濕轉都能比較穩定地轉膜,不足之處在于后期緩沖液消耗較大,轉印時間較長,并且需要注意做好降溫措施。僅建議儀器購置經費十分有限,或者平時經常需要轉膜大分子蛋白質的實驗室考慮。
不過,如果實驗室僅僅是要添置一套入門級別的WB蛋白電泳轉膜系統,V-GES 垂直電泳 + E-Blotter 濕轉槽一定是你最優的選擇。
濕轉是 Western Blot 最傳統最穩定的轉膜方式,因為濕轉是將轉印膜與凝膠浸泡在緩沖液中做電轉,所以可以用較小的電流在較長的時間中進行轉膜,外部配置冰盒或者冰箱甚至可以做隔夜慢速濕轉達到最佳轉膜效果。
如果同樣電場條件下,出現濕轉的結果可重現性不強,常見有兩方面原因:
1. 轉膜時間不長,實驗者圖省事沒有加冰盒做降溫,小槽體緩沖液體積太小,溫度升高過快導致液體電阻變化過快,電流不穩定波動導致轉膜結果變動
2. 有些實驗室出于經費考慮,要求循環利用緩沖液,緩沖液多次利用后導致有效離子不足,也會影響結果。
針對市面的小型濕轉槽常見的這兩個問題,E-Blotter 改用 max. 1450ml 的大緩沖液槽設計,這個容積對于比如 30min左右的短時間轉膜,使用剛從冰箱取出的緩沖液,大體積緩沖液本身的比熱容完全可以控制溫度穩定,不需要額外加冰盒制冷;
而對于需要循環利用緩沖液的實驗室來說,足夠量的緩沖液體積也能最大限度壓榨同體積緩沖液中離子的使用效率。有的用戶還是有擔心,覺得大體積緩沖液槽是不是還是有點浪費緩沖液?
其實不是,對于希望節省緩沖液的用戶,大緩沖液槽的設計允許內部添加足量冰袋冰盒占用體積,在同樣緩沖液用量下可以達到更好的控溫效果。