westernblotting轉膜是根據什么原理
原理：westernblotting轉膜一般采用“濾紙-凝膠-膜-濾紙”夾心法，凝膠靠近負極，膜靠近正極。因為蛋白上結合有sds，因而帶負電，在電流的作用下會從負極向正極運動，從而轉移到膜上。......閱讀全文
western－blotting轉膜是根據什么原理
原理：westernblotting轉膜一般采用“濾紙-凝膠-膜-濾紙”夾心法，凝膠靠近負極，膜靠近正極。因為蛋白上結合有sds，因而帶負電，在電流的作用下會從負極向正極運動，從而轉移到膜上。
western－blotting轉膜是根據什么原理
原理：westernblotting轉膜一般采用“濾紙-凝膠-膜-濾紙”夾心法，凝膠靠近負極，膜靠近正極。因為蛋白上結合有sds，因而帶負電，在電流的作用下會從負極向正極運動，從而轉移到膜上。
Western轉膜步驟
下面的步驟適用于通過Xcell Ⅱ轉印系統進行蛋白印記的大部分應用。為達到最佳效果，用戶的優化是必要的。I. 所需材料：?Xcell SureLock?或Xcell Ⅱ? Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）?電泳后的迷你膠
western轉膜放置問題
1. 定義轉膜時與膠接觸的一面為“正”2. 封閉時使用封閉液，液體蓋過膜就好，所以無所謂正反3. 假如用暗室顯影法，將顯影的試劑與“正”面接觸，膠片與“正面”接觸4. 假如用熒光的話，理論上“正”面朝下，掃描，但實際操作過程中貌似都可以的
Western－Blotting
實驗概要Western Blot (AP)主要試劑1. Membrane Blocking buffer:5% Milk ? 0.05% of Tween 20 PBS2. antibody dilution buffer: PBS 0.05% of Tween20 1.0% Milk(or BSA
Western－Blotting
1. Optional: "Renature" gel- this is thought to permit some refolding of proteins and may be important in finding epitope recognition of monoclonal an
western－blot轉膜的原理
電場力作用條件下，帶電粒子（PAGE膠中的蛋白）會發生定向遷移；蛋白大小如果超過膜孔徑（0.22μm or 0.45μm），不會透過膜；WB用的膜具有蛋白吸附作用；
western轉膜時間和電流
300mA90分鐘,我們是1.0的膠厚度,要是0.75也行,但1.5mm的厚膠要時間長一些,另外你做的蛋白如果超過100kd建議時間更長一些,若是小蛋白就減少轉模時間,立春紅確定最適時間
Immunoblotting－(Western－Blotting)
實驗概要We provide a protocol for SDS-PAGE, Protein Blotting, Immuno-Detection.主要試劑1.?0.3 M TRIZMA? base (Product No. T1503), 20% methanol.2.?0.025 M TRIZ
Western－Blotting－Protocols
back to topProtocolStandard vs. Rapid Immunodetection ProceduresThere are two types of protocols for immunodetection: Standard and rapid.Standard vs.
Western－Blotting－Protocol
實驗概要The western blot ?(sometimes called the protein immunoblot) is a widely used analytical ?technique used to detect specific proteins in the given s
Western－不同轉膜方法的取舍
轉膜:小分子量的蛋白半干轉效果比較好，大分子量（100KD）以上建議濕轉。具體轉膜條件需要多摸一下。30-80KD半干轉恒流1mA/cm2，1-1.5h 都可以，大分子濕轉100V，2.5h以上應該可以，轉完膜麗春紅染出的條帶比較清楚的話，一般都能有結果。濕轉，Buffer一定要預冷，最好提前一天配
Western－blotting樣品準備
實驗概要Preparation of ?lysis buffers, protease and phosphatase inhibitors, lysate from cell ?culture, lysate from tissues, protein concentration, samples
western－blot－試驗中蛋白轉膜總轉不上去
當然，首先要考慮的問題是你轉過頭了，蛋白質跑出去了。其次你的電流有點大，你也沒說轉了多久？用的干轉還是濕轉？是不是拿出來的時候很熱？這種情況有可能使蛋白質降解。我們一般是濕轉用100mA轉2小時， 干轉所需電流更小。
western－blot－的轉膜緩沖液
目的是為了消除電荷對電泳的影響，western各步驟的緩沖液基本上都是要加的。
western轉膜后marker拖尾原因
western轉膜有時候marker深，有時候淺是很正常的事情因為不同批次轉膜的時候，電壓電流緩沖液溫度等等條件不可能完全保持一致，在各種條件變化的情況下，很容易造成批次間的差異，具體表現就是有時候marker深，有時候淺所以western轉膜有時候marker深，有時候淺是很正常的事情
做western轉膜，用濕轉電泳，還是半干轉電泳好
半干轉要用專門的半干轉膜儀，而濕轉用電泳儀配附件即可；半干轉所需時間較短，但控制不好，中間發熱比較大容易把膜和膠烘壞；而濕轉耗時較長，尤其對大分子量的蛋白轉膜效果較好。相對來講，還是濕法轉膜的實驗室多一些。
Western－轉膜時用干轉還是濕轉效果比較好
關鍵看效果怎么細分，干轉，速度快，效率稍低，濕轉，速度比較慢，轉移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量為主，干轉就挺好的，效率非常高，幾分鐘就做完了。分子量特別大，又沒有其他人的方案做參考，可以先試試濕轉。就是幾個小時等得比較痛苦。好幾個人做的話，真是等到花兒也謝了。至于說效果，不是
Western－轉膜時用干轉還是濕轉效果比較好？
關鍵看效果怎么細分，干轉，速度快，效率稍低，濕轉，速度比較慢，轉移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量為主，干轉就挺好的，效率非常高，幾分鐘就做完了。分子量特別大，又沒有其他人的方案做參考，可以先試試濕轉。就是幾個小時等得比較痛苦。好幾個人做的話，真是等到花兒也謝了。至于說效果，不是
western－blot轉膜－膜上有白點點怎么回事
封閉的時候才出現的白點，是不是奶粉沒有完全溶解啊。重新溶解下奶粉，然后用0.45或者0.21um的濾膜過濾一下，看情形能不能好轉。另外還得根據結果來看，如果白點最后顯影都變成黑點，奶粉沒有溶解的可能性就比較大了。
Western－blotting樣品準備－（一）
實驗概要Preparation of ?lysis buffers, protease and phosphatase inhibitors, lysate from cell ?culture, lysate from tissues, protein concentration, samples
Western－blotting樣品準備－（二）
Sodium orthovanadate preparationAll steps to be performed in a fume hood.????????? a. Prepare a 100 mM solution in double distilled water.????????? b.
請教western轉膜封閉后怎么辦
western blot中封閉主要是起去除非特異性吸附的作用在western blot轉膜時，PVDF膜在甲醇活化后是帶電的，因而在轉膜時會將蛋白吸附。封閉的目的就是要將PVDF膜上無蛋白的部分空隙用奶粉填滿，以免孵抗體的時候一抗二抗與之結合，產生非特異條帶或者是背景雜亂。所以western blo
western－blot轉膜是怎么做的
蛋白免疫印跡( Western Blot) 是將電泳分離后的細胞或組織總蛋白質從凝膠轉移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。目前主流方法是電轉印法，分為濕式轉印與半干轉印。濕式轉印是將膠塊垂直方向夾在濕式轉印槽內進行電轉印。以E-Blotter濕轉槽為例，一般使用垂直電泳槽的緩沖液槽體，將內部垂直電
western轉膜之后，封閉之前要不要洗
westernblot中封閉主要是起去除非特異性吸附的作用在westernblot轉膜時，pvdf膜在甲醇活化后是帶電的，因而在轉膜時會將蛋白吸附。封閉的目的就是要將pvdf膜上無蛋白的部分空隙用奶粉填滿，以免孵抗體的時候一抗二抗與之結合，產生非特異條帶或者是背景雜亂。所以westernblot中封
Western－Blotting,實驗標本處理
抗體和樣品要求1.為保證質量，抗體最好為進口單克隆抗體；2.樣本要求：盡可能新鮮；3.?樣本量：組織樣本，質量大于100mg；細胞樣本，細胞數大于1×106；注意事項：1.市內細胞樣品可直接常溫運送，運送時在培養瓶中裝滿培養液并以封口膜封口，建議凍存后運輸。2.取樣和存樣所用的凍存管、離心管、吸頭等
western－blotting操作手冊
Running Protein GelsSolutions10X Running Buffer (0.25 M Tris, 1.92 M glycine, 1% SDS)121 g Tris577 g glycine40 g SDSddh20 to 4 L (check pH at 1:10 dil
western－blotting－的過程和原理
什么理論過程？就是原理唄？WesternBlot原理、顯色分類及操作步驟一、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄
Western－Blot轉膜時膠和膜放反了有影響嗎
那蛋白就都轉到濾紙上去了，沒有到膜上。你找點麗春紅染染膜看看，估計膜上什么也沒有哇。不用往下做了。當然，如果你在膜上看到預染Marker了，還是值得再去嘗試一下的。
western轉膜后marker拖尾是怎么回事
western轉膜有時候marker深，有時候淺是很正常的事情因為不同批次轉膜的時候，電壓電流緩沖液溫度等等條件不可能完全保持一致，在各種條件變化的情況下，很容易造成批次間的差異，具體表現就是有時候marker深，有時候淺所以western轉膜有時候marker深，有時候淺是很正常的事情