基因槍法轉化小麥實驗——轟擊后未成熟盾片培養
實驗材料幼胚盾片試劑、試劑盒新霉素磷酸轉移酶草胺膦乙酰轉移酶基因儀器、耗材基因槍誘導培養基分化培養基實驗步驟1. 誘導愈傷( 1 ) 基因槍轟擊后，將盾片分散轉移，每個重復分到 2~3 個含誘導培養基（MS9% 0.5 Dag) 的平皿中，大約 10 個盾片一皿（見注 48)。( 2 ) 用封口膜封好平皿，放在 22℃ 黑暗培養誘導愈傷 [見注 4 9 和注 50 ，圖 4.1(c) ]。2. 分化和選擇( 1 ) 在誘導培養基上生長 3~5 周后，將含有體細胞胚的愈傷組織轉移到含有分化培養基（RZDCu) 的 9 cm 培養皿中，22℃ 光照培養 3~4 周（見注 49 和注 51)。( 2 ) 在分化培養基上生長 3~4 周后，將愈傷組織轉移到含有 RZ+ 選擇培養基的 9 cm 高蓋培養皿上（見注 52 和注 53 ) [根據轉化的質粒所帶的選擇標記基因選擇適合的選擇培養基：草胺膦乙酰轉移酶基因（ba......閱讀全文
基因槍法轉化小麥實驗——轟擊后未成熟盾片培養
實驗材料幼胚盾片試劑、試劑盒新霉素磷酸轉移酶草胺膦乙酰轉移酶基因儀器、耗材基因槍誘導培養基分化培養基實驗步驟1. 誘導愈傷( 1 ) 基因槍轟擊后，將盾片分散轉移，每個重復分到 2~3 個含誘導培養基（MS9%? 0.5 Dag) 的平皿中，大約 10 個盾片一皿（見注 48)。( 2 ) 用封口膜
基因槍法轉化小麥實驗
實驗材料幼胚盾片 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒乙醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?漂白消毒劑 ? ?
基因槍法轉化小麥實驗——使用－PDS1000/He－基因槍轟擊
實驗材料金粉試劑、試劑盒乙醇消毒液實驗步驟注意：由于基因槍通過高壓使粒子加速到極高的速度，故操作基因槍時應采取適當的安全措施并且佩戴安全眼鏡。在任何使用基因槍轉化的實驗中，必須設置對照檢測分化和選擇效率（見注 40) 。( 1 )? 根據 PDS-1000/He (見圖 4.2 ) 基因槍操作指南操
基因槍法轉化小麥實驗（二）
實驗材料?BIO-RAD 亞微米金粉試劑、試劑盒?無水乙醇TE 緩沖液亞精胺儀器、耗材?離心管實驗步驟 1. 準備金粉顆粒( 1 ) 稱取 20 m BIO-RAD 亞微米金粉（0.6 μm) 至 1.5 ml 離心管中，加入 1 ml 無水乙醇。超聲波處理 2 min，短暫離心 3s，然后棄上清。
基因槍法轉化小麥實驗（一）
實驗材料?幼胚盾片試劑、試劑盒?乙醇漂白消毒劑儀器、耗材?誘導培養基實驗步驟 下面介紹的是經過優化的針對幼胚盾片轉化的方法，幼穗可以代替幼胚盾片使用。對某些特定的品種，幼穗轉化比幼胚盾片轉化更有效，如普通小麥品種 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier，以及其他小
基因槍法轉化小麥實驗——準備供體材料
實驗材料幼胚盾片試劑、試劑盒乙醇漂白消毒劑儀器、耗材誘導培養基實驗步驟下面介紹的是經過優化的針對幼胚盾片轉化的方法，幼穗可以代替幼胚盾片使用。對某些特定的品種，幼穗轉化比幼胚盾片轉化更有效，如普通小麥品種 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier，以及其他小麥亞族 Tr
基因槍法轉化小麥實驗——DNA包裹金粉顆粒
實驗材料BIO-RAD 亞微米金粉試劑、試劑盒無水乙醇TE 緩沖液亞精胺儀器、耗材離心管實驗步驟1. 準備金粉顆粒( 1 ) 稱取 20 m BIO-RAD 亞微米金粉（0.6 μm) 至 1.5 ml 離心管中，加入 1 ml 無水乙醇。超聲波處理 2 min，短暫離心 3s，然后棄上清。重復用乙
基因槍法轉化大麥實驗
實驗材料麥穗 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒植物凝膠 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? 乙醇 ? ? ? ?
基因槍法轉化大麥實驗
實驗材料麥穗試劑、試劑盒植物凝膠乙醇次氯酸鈉蒸餾水亞精胺儀器、耗材EP 管移液槍實驗步驟1. 組織培養基的準備( 1 ) 首先準備所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 2 ) 。( 2 )? 所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻，調到合適
基因槍法轉化大麥實驗（二）
4. 粒子轟擊幼胚(1) 幼胚滲透處理轟擊前，取分離 1 天后的幼胚，放在高滲培養基中處理 4 h。每皿 20~30 枚幼胚，置于培養皿中心 1.6 cm2 范圍內，盾片朝上。胚可以放得緊密一些，但相互之間不要碰到。轟擊之后幼胚繼續高滲處理 16 h。(2) 基因槍準備① 基因槍所有組件和內部的槍體
基因槍法轉化大麥實驗（一）
實驗材料?麥穗試劑、試劑盒?植物凝膠乙醇次氯酸鈉蒸餾水亞精胺儀器、耗材?EP 管移液槍實驗步驟 1. 組織培養基的準備( 1 ) 首先準備所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 2 ) 。( 2 )? 所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻，
小麥花器官轉化實驗
實驗材料小麥種子 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒壯觀霉素 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?利福平 ? ?
小麥花器官轉化實驗
實驗材料小麥種子試劑、試劑盒壯觀霉素利福平儀器、耗材溫室或走入式生長箱奧綠肥塑料盆LB 培養基MS 培養基解剖鏡巴龍霉素實驗步驟一、材料1. 植物材料Crocus 或 Chinese Spring 小麥種子由美國農業部國家種質資源信息中心提供（http: // www .?? ars- grin .
小麥花器官轉化實驗
實驗材料 小麥種子試劑、試劑盒 壯觀霉素利福平儀器、耗材 溫室或走入式生長箱奧綠肥塑料盆LB 培養基MS 培養基解剖鏡巴龍霉素實驗步驟 一、材料1. 植物材料Crocus 或 Chinese Spring 小麥種子由美國農業部國家種質資源信息中心提供（http: // www . ? ars-
基因槍（顆粒轟擊法）相比傳統的轉化優勢？
簡單快速功能靈活，各類細胞類型通用只需要少量的DNA和細胞能進行多質粒共同導入能輸送大片段DNA沒有無光的基因或蛋白被轉導
基因槍法介紹
基因槍法，又稱粒子轟擊(particle bombardment)，高速粒子噴射技術(High-velocity particle microprojection)或基因槍轟擊技術(gene gun bombardment)，是由美國Cornell大學生物化學系John.C.Sanford等于198
農桿菌介導的小麥新鮮離體幼胚的轉化實驗4
胚性愈傷的誘導和再生實驗材料胚儀器、耗材誘導培養基再生培養基實驗步驟1. 共培養 2~3 天后，將胚轉移至誘導培養基以誘導胚性愈傷（表 5.1，誘導培養基 a 適用于面包小麥，誘導培養基 b 適用于硬粒小麥）。記錄下轉移的胚的個數以便計算轉化效率，轉移時確保胚的盾片仍朝上。22~23℃ 避光培養。2
基因槍法的作用
基因槍法，又叫粒子轟擊細胞法或微彈技術。基因槍的作用是用壓縮氣體(氦或氮等) 動力產生一種冷的氣體沖擊波進入轟擊室(因此可免遭由“熱”氣體沖擊波引起的細胞損傷)，把粘有DNA?的細微金粉打向細胞，穿過細胞壁、細胞膜、細胞質等層層構造到達細胞核，完成基因轉移。只有很少部分的細胞符合這樣的要求，大多數會
什么是基因槍法？
基因槍法，又叫粒子轟擊細胞法或微彈技術。基因槍的作用是用壓縮氣體(氦或氮等) 動力產生一種冷的氣體沖擊波進入轟擊室(因此可免遭由“熱”氣體沖擊波引起的細胞損傷)，把粘有DNA?的細微金粉打向細胞，穿過細胞壁、細胞膜、細胞質等層層構造到達細胞核，完成基因轉移。只有很少部分的細胞符合這樣的要求，大多數會
轉基因技術基因槍法簡介
利用火藥爆炸或高壓氣體加速（這一加速設備被稱為基因槍），將包裹了帶目的基因的DNA溶液的高速微彈直接送入完整的植物組織和細胞中，然后通過細胞和組織培養技術，再生出植株，選出其中轉基因陽性植株即為轉基因植株。與農桿菌轉化相比，基因槍法轉化的一個主要優點是不受受體植物范圍的限制。而且其載體質粒的構建
農桿菌介導的小麥新鮮離體幼胚的轉化實驗2
根癌農桿菌接種外植體的準備（見注 6)實驗材料面包小麥硬粒小麥試劑、試劑盒乙醇儀器、耗材層流罩超凈臺實驗步驟1. 面包小麥和硬粒小麥開花后 12~16 天剪下幼穗，將種子幼體用 70% ( V/V）的乙醇浸泡 1 min，再換用 10% 乙醇（V/V）輕輕晃動 10 min 進行表面消毒，最后用足量
基因槍應用技術問答解疑
1.?基因槍轉化法對受體有啥要求？基因槍對動物：任何可暴露于基因槍口外的組織（皮膚、器官）細胞、外植體和器官培養；植物：田間和溫室使用、植物培養細胞和外植體；酵母、細菌、其它微生物細胞器、葉綠體、線粒體；受體廣泛。2.?基因槍（顆粒轟擊法）相比傳統的轉化那些優勢？簡單快速功能靈活，各類細胞類型通用只
基因槍法的定義和原理簡介
基因槍法是一種基因導入儀技術，它把遺傳物質或其他物質附著于高速微彈直接射入細胞、組織和細胞器，是目前國際上最先進的基因導入技術。氣體基因槍以壓縮氣體（氦或氮）轉換成的氣體沖擊波為動力，使氣體基因槍槍產生一種“冷”的氣體沖擊波進入轟擊室，因此可免遭由“熱”氣體沖擊波引起的細胞損傷。氣體基因槍可在廣泛的
基因槍的定義與原理
基因槍法是一種基因導入儀技術，它把遺傳物質或其他物質附著于高速微彈直接射入細胞、組織和細胞器，是目前國際上最先進的基因導入技術。氣體基因槍以壓縮氣體（氦或氮）轉換成的氣體沖擊波為動力，使氣體基因槍槍產生一種“冷”的氣體沖擊波進入轟擊室，因此可免遭由“熱”氣體沖擊波引起的細胞損傷。氣體基因槍可在廣泛的
基因槍技術定義與原理
基因槍法是一種基因導入儀技術，它把遺傳物質或其他物質附著于高速微彈直接射入細胞、組織和細胞器，是目前國際上最先進的基因導入技術。氣體基因槍以壓縮氣體（氦或氮）轉換成的氣體沖擊波為動力，使氣體基因槍槍產生一種“冷”的氣體沖擊波進入轟擊室，因此可免遭由“熱”氣體沖擊波引起的細胞損傷。氣體基因槍可在廣泛的
植物轉基因技術
1)農桿菌介導轉化法 將外植體放入含有外源基因的農桿菌(Agrobacteriumtume／ociens)菌液中浸泡，然后轉入共培養基，再轉入篩選培養基誘導抗性愈傷組織和抗性芽，生根后的抗性植株移栽至營養缽生長。(2)基因槍法 又稱微彈轟擊法。其基本原理是將外源DNA黏附在微小的金粒或鎢粒表面，然后
基因槍法可以得到永久轉基因植株嗎？
基因槍法注入基因后，該植物原則上一直都是轉基因植物，無性繁殖的后代也一直是轉基因植物，而其種子繁殖的下一代則不一定，有可能種子繁殖的下一代含有目標基因，也可能沒有。
植物原位接種介導的小麥高效農桿菌轉化方法實驗
試劑、試劑盒：緩釋肥 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?乙酰丁香酮? 儀器、耗材：盆缽 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
植物原位接種介導的小麥高效農桿菌轉化方法實驗
試劑、試劑盒緩釋肥乙酰丁香酮儀器、耗材盆缽植物支撐器LB 培養基通用型試管YEP 固體培養基TSIM 培養基實驗步驟一、材料1. 母體植株的生長( 1 ) 將母體植株種植于 12 , 7F ( 直徑為 13 cm) 的盆缽中，每盆 4 株。( 2 ) 用 Levingtons? M2 培養土，并施用
基因槍法的操作過程
基因槍法： 將直徑4um的鎢粉或金粉在供體DNA中浸泡，然后用基因槍將這些粒子打入細胞、組織或器官中，具有一次處理多個細胞的優點，但轉化效率較低。另外這種方法也用于基因治療和抗體制備，并已取得初步成效。