1. 面包小麥和硬粒小麥開花后 12~16 天剪下幼穗,將種子幼體用 70% ( V/V)的乙醇浸泡 1 min,再換用 10% 乙醇(V/V)輕輕晃動 10 min 進行表面消毒,最后用足量的滅菌蒸餾水沖洗三次以上(見注 7) 。
2. 在層流罩超凈臺上,借助體視顯微鏡從種子幼體中分離出幼胚(見注 8) 。用鋒利的手術刀除去胚軸。
3. 將幼胚盾片朝上接入直徑 55 mm 或 60 mm、盛有侵染培養基的培養皿,以確保盾片與農桿菌細胞充分接觸,與 3.3 節的步驟 2 銜接。為防止添加農桿菌菌液時幼胚漂浮,要確保幼胚同培養基接觸良好,每皿最佳約接 50 個幼胚。 展開 |