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    發布時間:2019-04-11 15:08 原文鏈接: 農桿菌介導的小麥新鮮離體幼胚的轉化實驗2

    根癌農桿菌接種外植體的準備(見注 6)

    實驗材料

    面包小麥硬粒小麥

    試劑、試劑盒

    乙醇

    儀器、耗材

    層流罩超凈臺

    實驗步驟

    1. 面包小麥和硬粒小麥開花后 12~16 天剪下幼穗,將種子幼體用 70% ( V/V)的乙醇浸泡 1 min,再換用 10% 乙醇(V/V)輕輕晃動 10 min 進行表面消毒,最后用足量的滅菌蒸餾水沖洗三次以上(見注 7) 。

    2. 在層流罩超凈臺上,借助體視顯微鏡從種子幼體中分離出幼胚(見注 8) 。用鋒利的手術刀除去胚軸。

    3. 將幼胚盾片朝上接入直徑 55 mm 或 60 mm、盛有侵染培養基的培養皿,以確保盾片與農桿菌細胞充分接觸,與 3.3 節的步驟 2 銜接。為防止添加農桿菌菌液時幼胚漂浮,要確保幼胚同培養基接觸良好,每皿最佳約接 50 個幼胚。

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