關于siRNA表達框架的介紹
siRNA表達框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一種由PCR得到的siRNA表達模版，包括一個RNA pol Ⅲ啟動子，一段發夾結構siRNA，一個RNA pol Ⅲ終止位點，能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。和siRNA表達載體不同的是，SECs不需要載體克隆、測序等頗為費時的步驟，可以直接由PCR得到，不用一天的時間。因此，SECs成為篩選siRNA的最有效工具，甚至可以用來篩選在特定的研究體系中啟動子和siRNA的最適搭配。如果在PCR兩端添加酶切位點，那么通過SECs篩選出的最有效的siRNA后，可以直接克隆到載體中構建siRNA表達載體。構建好的載體可以用于穩定表達siRNA和長效抑制的研究。 這個方法的主要缺點是 ①PCR產物很難轉染到細胞中（晶賽公司的Protocol可以解決這一問題） ②不能進行序列測定，PCR和DNA合成時可能差生的誤讀不能被發現導致......閱讀全文
關于siRNA表達框架的介紹
siRNA表達框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一種由PCR得到的siRNA表達模版，包括一個RNA pol Ⅲ啟動子，一段發夾結構siRNA，一個RNA pol Ⅲ終止位點，能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。和siRNA表達載體不同的是，SE
siRNA表達框架
siRNA表達框架(siRNA expression cassettes，SECs)是一種由PCR得到的siRNA表達模版，能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。這個方法最早是由Castanotto和其同事采用，包括一個RNA polⅢ啟動子，一段發夾結構siRNA，一個RNA pol I
siRNA表達框架制備siRNA的方法介紹
siRNA表達框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一種由PCR得到的siRNA表達模版，包括一個RNA pol Ⅲ啟動子，一段發夾結構siRNA，一個RNA pol Ⅲ終止位點，能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。和siRNA表達載體不同的是，SECs
siRNA表達框架的技術特點
siRNA表達框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一種由PCR得到的siRNA表達模版，包括一個RNA pol Ⅲ啟動子，一段發夾結構siRNA，一個RNA pol Ⅲ終止位點，能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。和siRNA表達載體不同的是，SECs
siRNA表達框架制備方法的特點
siRNA表達框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一種由PCR得到的siRNA表達模版，包括一個RNA pol Ⅲ啟動子，一段發夾結構siRNA，一個RNA pol Ⅲ終止位點，能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。和siRNA表達載體不同的是，SECs
siRNA表達載體制備siRNA的方法介紹
多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶Ⅲ啟動子（pol Ⅲ）中的一種，操縱一段小的發夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol Ⅲ啟動子是由于它可以在哺乳動物細胞中表
siRNA表達載體
多數的siRNA表達載體依賴RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段45—50nt的發夾結構RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳動物細胞中的表達,shRNA在細胞內會自動被加工成為siRNA，從而引發基因沉默或者表達抑制。這一類啟動子包括大家熟悉的人
簡述siRNA表達載體
多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶Ⅲ啟動子（pol Ⅲ）中的一種，操縱一段小的發夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol Ⅲ啟動子是由于它可以在哺乳動物細胞
siRNA表達載體的構建
siRNA表達載體構建可應用于：（1）作為后基因組時代基因功能分析的有力工具；（2）基因組學、細胞信號傳導通路分析；（3）藥物靶點篩選、疾病治療。實驗方法原理多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RN
siRNA表達載體的構建
實驗方法原理 多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol
siRNA表達載體的構建
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U
siRNA表達載體的技術特點
多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶Ⅲ啟動子（pol Ⅲ）中的一種，操縱一段小的發夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol Ⅲ啟動子是由于它可以在哺乳動物細胞中表
關于siRNA機制的基本介紹
1.長dsRNA（可來自發夾，互補RNA和RNA依賴性RNA聚合酶）被稱為Dicer的內切核糖核酸酶切割。Dicer切割長dsRNA以形成短干擾RNA或siRNA；這使得分子能夠形成RNA誘導的沉默復合物（RISC）。 2.一旦siRNA進入細胞，它就會被整合到其他蛋白質中以形成RISC。
靶向－EGFR基因－siRNA表達載體的構建
實驗材料靶向EGFR基因siRNA試劑、試劑盒pSilencer2.1-U6載體EcoR IBamH IT4 DNA連接酶鼠抗人anti-EGFRFITC標記兔抗小鼠IgGCy3標記兔抗小鼠IgG甘油多聚甲醛二甲基亞砜儀器、耗材流式細胞儀熒光顯微鏡二氧化碳細胞培養箱酶標儀培養板蓋玻片載玻片利用Lip
siRNA表達載體制備方法的特點
多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶Ⅲ啟動子（pol Ⅲ）中的一種，操縱一段小的發夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol Ⅲ啟動子是由于它可以在哺乳動物細胞中表
關于siRNA的體外制備的介紹
1、化學合成siRNA 合成siRNA應用廣泛，這種方法的得率和純度都比較高。對合成siRNA還可以進行一系列化學修飾以提高siRNA的穩定性、降低脫靶效應，以及（或者）阻止激活天然免疫反應。多家公司，包括Ambion、Thermo Scientific Dharmacon、QIAGEN和Si
關于小干擾RNA的siRNA設計介紹
最初，siRNA序列的選擇是基于實驗經驗而獲得的（Elbashir et al. 2001，2002）。最近，生物信息學工具被用來設計siRNA（表18-1），目前多個數據庫收錄了經過實驗確證的siRNA和shRNA。值得推薦的是，在設計新的siRNA之前可以通過搜索已有的siRNA數據庫和科研
關于基因表達的介紹
基因的表達過程是將DNA上的遺傳信息傳遞給mRNA,然后再經過翻譯將其傳遞給蛋白質。在翻譯過程中tRNA負責與特定氨基酸結合，并將它們運送到核糖體，這些氨基酸在那里相互連接形成蛋白質。這一過程由tRNA合成酶介導，一旦出現問題就會生成錯誤的蛋白質，進而造成災難性的后果。值得慶幸的是，tRNA分子
關于瞬時表達的優點介紹
①簡單快速。轉化基因可在轉化的一周內進行分析，避免了組織培養等繁雜過程； ②表達水平高。當單鏈的T-DNA進入植物細胞后，許多未整合到植物基因組中的游離外源基因同樣可以表達。 ③安全有效。不受植物生長發育過程的影響，不產生可遺傳的后代，結果可靠直觀，不存在基因漂移的風險。常用基因槍轉化和農桿
關于表達載體的組成介紹
常用細菌質粒進行構建，構建過程中運用限制性核酸內切酶切割出與目的基因相合的末端（多為黏性末端，也有平末端），采用DNA連接酶連接，導入生物體實現表達。標記基因可幫助識別質粒并檢測是否成功整合到染色體DNA中。 表達載體（Expression vectors）就是在克隆載體基本骨架的基礎上增加表
siRNA的制備方法介紹
體外制備1.化學合成許多國外公司都可以根據用戶要求提供高質量的化學合成siRNA。主要的缺點包括價格高，定制周期長，特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高，為一個基因合成3—4對siRNAs 的成本就更高了，比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。最適用于：已經找到最有效的si
siRNA制備方法介紹
體外制備1.化學合成許多國外公司都可以根據用戶要求提供高質量的化學合成siRNA。主要的缺點包括價格高，定制周期長，特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高，為一個基因合成3―4對siRNAs 的成本就更高了，比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。最適用于：已經找到最有效的si
關于基因表達的折疊的介紹
剛從mRNA序列翻譯過來的蛋白質都是未折疊或無規卷曲的多肽,沒有任何的三維結構。氨基酸彼此相互作用使得多肽從無規卷曲折疊成其特征性和功能性三維結構。氨基酸序列決定l了蛋白質的三維結構,且正確的三維結構對于功能至關重要,盡管功能蛋白的某些部分可能仍未展開。伴侶蛋白的酶有助于新形成的蛋白質獲得折疊,
關于蛋白表達系統的基本介紹
蛋白表達系統是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系。通過這個體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。一般由以下幾個部分組成： 1、宿主。表達蛋白的生物體。可以為細菌、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性不同，適合表達蛋白的種類也不相同。 2、載體。載體的種類與宿主相匹配。根
關于慢病毒表達載體的介紹
慢病毒表達載體，即通常所說的穿梭載體，包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA 到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞，在細胞中進行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中
關于LacZ基因的時空表達介紹
轉基因小鼠實驗系統已被廣泛用于單一基因功能的研究，如組織特異表達和發育程序的調控。產生轉基因小鼠最普遍的方法是將DNA通過顯微注射注入受精卵的原核中。在研究小鼠胚胎發育過程中外源基因的時空表達方面，將融合基因注射進入小鼠受精卵原核中更是一條行之有效的途徑。 通過上述方法，將SV40早期啟動子和
關于基因表達反式作用的介紹
與“順式作用”相對，反式作用指的是其作用范圍可以影響到不同DNA鏈上的基因（順式作用的調控僅限于同一條鏈上的基因），故名。 反式作用的調控原理是借助產生有調控功能的蛋白質而進行的。由于蛋白質合成之后的選擇性結合不限于表達它的這條DNA鏈，所以相比于順勢作用，反式作用的調控范圍更廣。 例如，某
關于基因表達順式作用的介紹
順式作用是生物體進行基因表達調節的方式之一，與“反式作用”相對。順式作用指的是，調節因子是與被調節基因同處于一條DNA鏈上的另一端DNA片段而進行的調節。 以二倍體生物為例，對于某一位置的基因，兩條同源染色體上會有一對等位基因和一對相應的順式調節因子。如果其中一個順式調節因子發生突變而產生
關于苯的結構和表達的介紹
(1)苯的結構 近代物理方法證明：苯分子的六個碳原子和六個氫原子都在一個平面內，因此它是一個平面分子，六個碳原子組成一個正六邊形，碳鍵鍵長是均等的，約為140 pm，介于單鍵和雙鍵之間。碳氫鍵鍵長為108pm，所有的鍵角都為120°。 (2)苯的芳香性 從結構上看，苯具有平面的環狀結構，鍵
關于瞬時表達的基本信息介紹
瞬時表達，即瞬時轉染后的初期，質粒或DNA片段是游離在細胞中的，能夠進行表達，稱為瞬時轉染表達。隨后，游離在細胞中的質粒或DNA片段有兩種歸化，一種是被降解，還有一種是插入染色體中而能夠持續地穩定地表達。