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    發布時間:2022-05-24 11:43 原文鏈接: siRNA表達框架制備siRNA的方法介紹


    siRNA表達框架(siRNA expression cassettes,SECs)是一種由PCR得到的siRNA表達模版,包括一個RNA pol Ⅲ啟動子,一段發夾結構siRNA,一個RNA pol Ⅲ終止位點,能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。和siRNA表達載體不同的是,SECs不需要載體克隆、測序等頗為費時的步驟,可以直接由PCR得到,不用一天的時間。因此,SECs成為篩選siRNA的最有效工具,甚至可以用來篩選在特定的研究體系中啟動子和siRNA的最適搭配。如果在PCR兩端添加酶切位點,那么通過SECs篩選出的最有效的siRNA后,可以直接克隆到載體中構建siRNA表達載體。構建好的載體可以用于穩定表達siRNA和長效抑制的研究。

    這個方法的主要缺點是①PCR產物很難轉染到細胞中(晶賽公司的Protocol可以解決這一問題)②不能進行序列測定,PCR和DNA合成時可能差生的誤讀不能被發現導致結果不理想。

    最適用于:篩選siRNA序列,在克隆到載體前篩選最佳啟動子

    不適用于:長期抑制研究。(如果克隆到載體后就可以了)


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