蛋白質SDSPAGE電泳與WesternBlot
一、蛋白質SDS-PAGE電泳1、安裝垂直板電泳裝置用洗潔精、清水和無水乙醇清洗兩塊玻璃板，晾干后安裝。2、制備SDS-聚丙烯酰胺凝膠（1）配制9%分離膠（15ml）：雙蒸水 6.55ml，1.5M Tris-HCl（pH8.8）3.75ml，30%丙烯酰胺儲存液（Acry/Bis）4.5ml，10%SDS 150ml，10%過硫酸銨（APS）50ml，混勻后加入3.75ml TEMED，立即混勻，灌入裝好的垂直板中，至距離短玻璃頂端約2cm處。檢查是否有氣泡，如果有，用濾紙條吸出。在膠液上面加一層雙蒸水，靜置，待凝膠與水的界面清晰時，說明分離膠已聚合（約30分鐘），去除水相，用濾紙吸干殘存的液體。（2）配制4%濃縮膠（10ml）：雙蒸水 6.1ml，0.5M Tris-HCl（pH6.8）2.5ml，30%丙烯酰胺儲存液（Acry/Bis）1.3ml，10%SDS 100ml，10%過硫酸銨（APS）50m......閱讀全文
蛋白質SDSPAGE電泳與Western－Blot
一、蛋白質SDS-PAGE電泳1、安裝垂直板電泳裝置用洗潔精、清水和無水乙醇清洗兩塊玻璃板，晾干后安裝。2、制備SDS-聚丙烯酰胺凝膠（1）配制9%分離膠（15ml）：雙蒸水 6.55ml，1.5M Tris-HCl（pH8.8）3.75ml，30%丙烯酰胺儲存液（Acry/Bis）4.5ml，
蛋白質檢測－Western－Blot
蛋白質檢測－Western Blot1.?把聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質電泳轉移到硝酸纖維膜上。1）轉移緩沖液洗滌凝膠和硝酸纖維素膜，將硝酸纖維素膜鋪在凝膠上，用5ml移液管在凝膠上來回滾動去除所有的氣泡。2）在凝膠/濾膜外再包一張3mm濾紙（預先用轉移緩沖液浸濕），將凝膠夾在中間，保持濕潤和沒有氣泡。
蛋白質電泳槽－Western－Blot－垂直電泳制膠器漏膠問題分析
Western Blot轉膜之前免不了要在蛋白質垂直電泳槽中跑膠分離蛋白質。關于制膠，大多數用戶還是喜歡用電泳槽配套的制膠器來自己制膠跑電泳，經濟實惠。但是很多實驗室因為設備已經使用多年，常會發現垂直電泳槽的制膠器沒有原來好用了，經常會有“漏膠”或者“漏液”的現象，也就是說，凝膠溶液還沒有來
western－blot電泳的膠怎么放平？
最近實驗室western blot電泳的膠做出來不夠平整，仔細思考一下實驗步驟，總結有一下幾個方面原因供大家參考1)實驗用的玻璃板必須洗干凈2)過硫酸銨和TEMED的加量不合適，加量較多時，凝膠凝固過快也會膠不平，最多按照分子克隆加倍3)加完試劑以后沒有很好的搖勻，導致有些部位的聚合劑濃度過高，聚合
電泳做Western－Blot實驗的方法技巧
電泳做western blot的時候，大家往往會摸索一抗、二抗的濃度，封閉時間，曝光時間等等，而每次變換其中的一個條件就需要從新跑膠、轉膜，甚至重新提蛋白，這樣會浪費大量的時間。其實完全沒有必要這樣。一次轉膜后，將PVDF膜晾干，裁減成小塊，保存起來，用的時候取出一塊，沒有任何影響。這對于摸索條
蛋白質印跡(westernblot)
實驗原理印跡法一般由凝膠電泳；樣品的印跡和固定化；各種靈敏的檢測手段如抗體、抗原反應等三大實驗部分組成。生物大分子凝膠電泳分離 蛋白質印跡法的第一步一般是將蛋白質進行SDS聚丙烯酰胺平板凝膠電泳，使待測蛋白質在電泳中按相對分子質量大小在板狀膠上排列。2.分子區帶的轉移和固定 第二步就是反凝膠電泳已分
蛋白質的Western－blot印跡分析
一、原理 一個基因表達的最終產物是產生相應的蛋白，因此檢測蛋白是測定基因表達的主要標志。?? ?原理：Western Blotting 是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙稀酰胺凝膠電泳，對不同分子量的蛋白質進行分離；并通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印至固相支持物上，用抗靶蛋白的非標記抗體（
蛋白分析鑒定整體解決方案
蛋白分析鑒定整體解決方案目前對于蛋白的分析和鑒定，常用的經典方法有聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），蛋白免疫印跡（Western Blot）Elisa等。聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）經常用于提純過程中純度的檢測，純化的蛋白通常在SDS電泳上應只有一條帶，但如果蛋白質是由于不同的亞基組
什么是蛋白質印跡測試？
Western blot測試,也稱為免疫印跡,是對蛋白質混合物中特定蛋白質的測試。蛋白質印跡試驗是在凝膠電泳或酶聯免疫吸附測定(ELISA)試驗后進行的,它使用抗體來鑒定特定的蛋白質。SDS頁面十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是用于分離蛋白質以進行蛋白質印跡的常用測試。當蛋白質通
蛋白質印跡（western－blot）技術實驗步驟
免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質印跡（western blot），它是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。western blot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡（western blot）具有SDS-
免疫共沉淀與Western－Blot
免疫共沉淀與Western Blot實驗步驟:1．以60mm 細胞培養皿為例，細胞轉染后24－36 小時后，吸凈培養液（可用PBS小心漂洗一次）。2．加入500μl 預冷的1×lysis buffer, 于4℃或冰上放置裂解細胞5 分鐘。3．將細胞裂解液轉移到1.5 ml eppondorf 管內，
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）——Western印跡法
實驗材料蛋白質樣品試劑、試劑盒裂解液PBSG 250考馬斯亮藍溶液NaClSDS上樣緩沖液電泳緩沖液轉移緩沖液麗春紅染液封閉液TBSTTBS洗脫抗體緩沖液顯影液定影液抗體化學發光試劑儀器、耗材高壓鍋玻璃勻漿器高速離心機分光光度儀-20℃低溫冰箱垂直板電泳轉移裝置恒溫水浴搖床多用脫色搖床實驗步驟一、操
蛋白質的SDSPAGE電泳
試劑、試劑盒 過硫酸銨含 2-巰基乙醇的樣品緩沖液樣品緩沖液 (2X) 儲液電泳緩沖液電極緩沖液壓縮膠緩沖液分離膠緩沖液實驗步驟 鑄分離膠（下層膠)裝置的清洗為使角蛋白的污染減至最少，將玻板、梳子和隔條浸泡在含強堿性去垢劑〔2%RBS 35 液（Pierce Chemical Co.)〕提濃物的
蛋白質的SDSPAGE電泳
蛋白質的SDS-PAGE電泳 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 過硫酸銨 含 2-巰基乙醇的樣品緩沖液
蛋白質的SDSPAGE電泳
按所用小型平板凝膠裝置調整溶液體積，膠板大小約在 8X10X0.15 cm。在此大小范圍內有幾種形式可以利用。制膠的裝置有玻璃板、塑料隔條（通常厚度為 0.1~0.2 cm) 和鑄膠時成孔用的 Teflon 梳子。下面逐步示教 SDS-PAGE 的操作程序。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南，作者
Western－blot實驗電泳時－Marker條帶不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr沒煮好，或者降解了。重新換一個新marker，嚴格按配方煮。如果所有條帶都這樣那就是膠的問題。膠的前沿跑的齊嗎？速度如何？如果跑的時候就不正常那也可能是電泳緩沖液配錯了。
Western－blot實驗電泳時－Marker條帶不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr沒煮好，或者降解了。重新換一個新marker，嚴格按配方煮。如果所有條帶都這樣那就是膠的問題。膠的前沿跑的齊嗎？速度如何？如果跑的時候就不正常那也可能是電泳緩沖液配錯了。
Western－blot實驗電泳時－Marker條帶不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr沒煮好，或者降解了。重新換一個新marker，嚴格按配方煮。如果所有條帶都這樣那就是膠的問題。膠的前沿跑的齊嗎？速度如何？如果跑的時候就不正常那也可能是電泳緩沖液配錯了。
Western－blot實驗電泳時－Marker條帶不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr沒煮好，或者降解了。重新換一個新marker，嚴格按配方煮。如果所有條帶都這樣那就是膠的問題。膠的前沿跑的齊嗎？速度如何？如果跑的時候就不正常那也可能是電泳緩沖液配錯了。
Western－blot實驗電泳時－Marker條帶不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr沒煮好，或者降解了。重新換一個新marker，嚴格按配方煮。如果所有條帶都這樣那就是膠的問題。膠的前沿跑的齊嗎？速度如何？如果跑的時候就不正常那也可能是電泳緩沖液配錯了。
Western－blot實驗電泳時－Marker條帶不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr沒煮好，或者降解了。重新換一個新marker，嚴格按配方煮。如果所有條帶都這樣那就是膠的問題。膠的前沿跑的齊嗎？速度如何？如果跑的時候就不正常那也可能是電泳緩沖液配錯了。
Western－blot實驗電泳時－Marker條帶不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr沒煮好，或者降解了。重新換一個新marker，嚴格按配方煮。如果所有條帶都這樣那就是膠的問題。膠的前沿跑的齊嗎？速度如何？如果跑的時候就不正常那也可能是電泳緩沖液配錯了。
蛋白質免疫印跡（Western－Blot－）（二）
二、蛋白樣品制備?1. ? 單層貼壁細胞總蛋白的提取?（1） 倒掉培養液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液（或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然后再用移液器將其吸走）。?（2）?每瓶細胞加3 ml 4℃預冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放輕輕搖動1 min洗滌細胞，然后棄
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）
實驗方法原理 Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Western免疫印跡，是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 與Southern或Northern雜交方法類似，但We
蛋白質免疫印跡（Western－Blot－）（一）
蛋白質免疫印跡（Western Blot ）可以：（1）從蛋白質混合物中檢出目標蛋白質；（2）定量或定性確定細胞或組織中蛋白質的表達情況；（3）用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA相互作用后續分析。實驗方法底物化學發光ECL法Western印跡法圖解實驗方法原理Western免疫印跡（
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）
蛋白質免疫印跡（Western Blot ）?? ?可以：（1）從蛋白質混合物中檢出目標蛋白質；（2）定量或定性確定細胞或組織中蛋白質的表達情況；（3）用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA相互作用后續分析。實驗方法原理：? ? Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白
蛋白質免疫印跡（Western－Blot－）（三）
四、SDS－PAGE電泳?1. ?清洗玻璃板?一只手扣緊玻璃板，另一只手蘸點洗衣粉輕輕擦洗。兩面都擦洗過后用自來水沖，再用蒸餾水沖洗干凈后立在筐里晾干。?2. ?灌膠與上樣?（1）玻璃板對齊后放入夾中卡緊。然后垂直卡在架子上準備灌膠。（操作時要使兩玻璃對齊，以免漏膠。）?（2）按前面方法配10%分離
western－blotting的原理、操作步驟及意義
一。免疫印跡法????免疫印跡法（immunoblotting?test，IBT）亦稱酶聯免疫電轉移印斑法（enzyme?linked?immunoelectrotransfer?blot，EITB），因與Southen早先建立的檢測核酸的印跡方法Southen?blot相類似，亦被稱為Wester
western－blotting的原理、操作步驟及意義
一。免疫印跡法????免疫印跡法（immunoblotting?test，IBT）亦稱酶聯免疫電轉移印斑法（enzyme?linked?immunoelectrotransfer?blot，EITB），因與Southen早先建立的檢測核酸的印跡方法Southen?blot相類似，亦被稱為Wester