醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白質實驗方法(二)
6、染色 通電完畢,立即取出薄膜直接浸入麗春紅S或氨基黑10B染色液中,染色5~10分鐘。7、漂洗 至少準備3~4個漂洗皿,裝入漂洗液。從染色液中取出薄膜條并盡量瀝去染色液,按順序投入漂洗液中反復漂洗,直至背景漂白為止。此時清晰可見5條色帶。待干。8、定量 (1)洗脫比色法 取六支試管,分別標明“A、α1、α2、β、γ、空白”。將漂洗凈的薄膜剪下各區帶放入相應的試管內,另從空白背景剪一塊平均大小的膜條置于空白管中,根據染色不同按以下方法洗脫。①氨基黑10B染色洗脫:6支試管于清蛋白管內加入0.4mmol/L NaOH溶液6ml,其余5管各加3ml,振搖數次,置37℃水浴20分鐘,使色澤完全浸出。用620nm波長,以空白管調零,讀取各管的吸光度,其中清蛋白管吸光度×2。②麗春紅S染色洗脫:洗脫液用0.1mmol/L氫氧化鈉溶液,加入量同上。10分鐘......閱讀全文
醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白質實驗方法(二)
6、染色??? 通電完畢,立即取出薄膜直接浸入麗春紅S或氨基黑10B染色液中,染色5~10分鐘。7、漂洗 至少準備3~4個漂洗皿,裝入漂洗液。從染色液中取出薄膜條并盡量瀝去染色液,按順序投入漂洗液中反復漂洗,直至背景漂白為止。此時清晰可見5條色帶。待干。8、定量??? (1)洗脫比色法? 取六支試管
醋酸纖維薄膜電泳分離血清的蛋白質(二)
實驗步驟1、電泳槽的準備 ? ?? ? ? 將巴比妥-巴比妥鈉緩沖液加入電泳槽中(兩側槽內注入等量的緩沖液),調節兩側內的緩沖液,使其在同一水平面,液面與支架的距離約為2~2.5cm。支架寬度到恰好適合CAM的長度,用3~4層濾紙或4層紗布搭橋。2、CAM準備 ??? ? ? 取醋纖薄膜(2
醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白質實驗方法(一)
實驗原理帶電荷的蛋白質,在電場中向著與其所帶電荷電性相反的電極泳動稱為電泳。血清中各種蛋白質的等電點不同,但大都在pH7以下,若將血清置于pH8.6的緩沖液中,則這些蛋白質均帶負電,在電場中都向陽極移動。由于各種蛋白質在同一pH環境中所帶負電荷多少及分子大小不同,所以在電場中向陽極泳動速度也不同。蛋
醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋的白質實驗(二)
4、平衡??將已點樣的薄膜加樣面朝下,點樣端置于陰極端,將膜條緊貼于電泳槽支架的鹽橋上并保持平直,橋的另一端垂入緩沖液中,鹽橋將膜的兩端與緩沖液連通,加上槽蓋平衡5min后通電電泳。5、電泳???正確聯接電泳槽與整流器對應的正負極,點樣側接負極,另一側接正極。開啟電源通電。調節電壓10V~15V/c
醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白質
實驗概要1.?掌握醋酸纖維素薄膜電泳的原理和操作方法;2.?了解醋酸纖維素薄膜電泳所分離的血清蛋白質的各帶譜及其臨床意義。實驗原理? ? ? ? ?帶電荷的蛋白質,在電場中向著與其所帶電荷電性相反的電極泳動稱為電泳。血清中各種蛋白質的等電點不同,但大都在pH7以下,若將血清置于pH8.6的緩沖液中,
醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白質
實驗原理? ? ? ? 帶電荷的蛋白質,在電場中向著與其所帶電荷電性相反的電極泳動稱為電泳。血清中各種蛋白質的等電點不同,但大都在pH7以下,若將血清置于pH8.6的緩沖液中,則這些蛋白質均帶負電,在電場中都向陽極移動。由于各種蛋白質在同一pH環境中所帶負電荷多少及分子大小不同,所以在電場中向陽
醋酸纖維薄膜電泳分離血清的蛋白質(一)
實驗原理? ? ? ? 帶電荷的蛋白質,在電場中向著與其所帶電荷電性相反的電極泳動稱為電泳。血清中各種蛋白質的等電點不同,但大都在pH7以下,若將血清置于pH8.6的緩沖液中,則這些蛋白質均帶負電,在電場中都向陽極移動。由于各種蛋白質在同一pH環境中所帶負電荷多少及分子大小不同,所以在電場中向陽
醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋的白質實驗(一)
實驗原理帶電荷的蛋白質,在電場中向著與其所帶電荷電性相反的電極泳動稱為電泳。血清中各種蛋白質的等電點不同,但大都在pH7以下,若將血清置于pH8.6的緩沖液中,則這些蛋白質均帶負電,在電場中都向陽極移動。由于各種蛋白質在同一pH環境中所帶負電荷多少及分子大小不同,所以在電場中向陽極泳動速度也不同。蛋
醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白原理和實驗方法
一、原理醋酸纖維薄膜電泳是用醋酸纖維素薄膜作為支持物的電泳方法。帶電顆粒在電場力作用下,向著與其電性相反的電極移動的現象稱為電泳。由于各種蛋白質都有特定的等電點,如將蛋白質置于pH值低于其等電點的溶液中,則蛋白質將帶正電荷而向負極移動。反之,則向正極移動。因為蛋白質分子在電場中移動的速度與其帶電量、
血清蛋白質的醋酸纖維薄膜電泳
【原理】以醋酸纖維薄膜為支持物,用緩沖液潤濕后,將微量血清樣品點于膜上,再在電泳槽中進行電泳,可將血清蛋白分離成清蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白五條區帶,將薄膜置于染色液中,使蛋白質固定并染色后,可看到清晰色帶,也可將色帶分別于堿溶液中進行定量測定,再計算血清中各種蛋白質的含量百分數。在正常情況下,
血清蛋白質的醋酸纖維薄膜電泳
【原理】以醋酸纖維薄膜為支持物,用緩沖液潤濕后,將微量血清樣品點于膜上,再在電泳槽中進行電泳,可將血清蛋白分離成清蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白五條區帶,將薄膜置于染色液中,使蛋白質固定并染色后,可看到清晰色帶,也可將色帶分別于堿溶液中進行定量測定,再計算血清中各種蛋白質的含量百分數。在正常情況下,
血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳實驗
由于各種蛋白質都有特定的等電點,如將蛋白質置于pH值低于其等電點的溶液中,則蛋白質將帶正電荷而向負極移動。反之則向正極移動。因為蛋白質分子在電場中移動的速度與其帶電量、分子的形狀及大小有關,所以可用電泳法將不同的蛋白質分離開來。血清中含有多種蛋白質,等電點都在pH 7.5以下。將血清置于pH 8.6
血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳實驗
由于各種蛋白質都有特定的等電點,如將蛋白質置于pH值低于其等電點的溶液中,則蛋白質將帶正電荷而向負極移動。反之則向正極移動。因為蛋白質分子在電場中移動的速度與其帶電量、分子的形狀及大小有關,所以可用電泳法將不同的蛋白質分離開來。血清中含有多種蛋白質,等電點都在pH 7.5以下。將血清置于pH 8.6
醋酸纖維素膜電泳分離鑒定蛋白質實驗
實驗方法原理 混合蛋白質樣品中各種蛋白質的等電點不同, 在pH8 . 6 的巴比妥緩沖液中, 各種蛋白質所帶的靜電荷量不同, 加上蛋白質分子大小不相同, 在電場中移動的速度也不等, 例如, 血清或卵清樣品中白蛋白等電點比其他蛋白質低, 在pH8 . 6 時帶的負電荷比其他蛋白質多, 加上白蛋
醋酸纖維素膜電泳分離鑒定蛋白質實驗
電泳法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 混合蛋白質樣品中各種蛋白質的等電點不同, 在pH8 . 6 的巴比妥緩沖液中, 各種蛋白質所帶的靜電荷量不同, 加上蛋白質分子大小不
醋酸纖維素膜電泳分離鑒定蛋白質實驗_電泳法
混合蛋白質樣品中各種蛋白質的等電點不同, 在pH8 . 6 的巴比妥緩沖液中, 各種蛋白質所帶的靜電荷量不同, 加上蛋白質分子大小不相同, 在電場中移動的速度也不等, 例如, 血清或卵清樣品中白蛋白等電點比其他蛋白質低, 在pH8 . 6 時帶的負電荷比其他蛋白質多, 加上白蛋白的分子較小, 因此在
血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳
原 理以醋酸纖維薄膜為支撐物,浸入pH8.6的緩沖液后吸去多余液體。將微量血清點于膜上,電泳后,將薄膜置染色液中使蛋白質固定并染色,洗去多余染料。操 作1.準備與點樣(1)將薄膜切成2.5×8cm的小片。在薄膜無光澤面(正面)的一端約2cm處用鉛筆劃一線,以標明點樣位置。同時在一端邊沿寫上實驗者的學
血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳
原理以醋酸纖維薄膜為支撐物,浸入pH8.6的緩沖液后吸去多余液體。將微量血清點于膜上,電泳后,將薄膜置染色液中使蛋白質固定并染色,洗去多余染料。操作1. ?準備與點樣(1)將薄膜切成2.5×8 cm 的小片。在薄膜無光澤面(正面)的一端約2 cm 處用鉛筆劃一線,以標明點樣位置。(2)將薄膜無光澤面
血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳
實驗概要血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳技術實驗原理? ? ? 帶電粒子在電場中移動的現象稱為電泳。電泳技術被廣泛用于蛋白質、核酸和氨基酸等物質的分離和鑒定,電泳過程中帶電粒子的移動速度與粒子荷電量、電場強度、粒子重量與半徑及介質的粘度等有關。其中粒子荷電量又受周圍介質的pH和離子強度的影響;電場強度
醋酸纖維薄膜電泳法分離血清蛋白質的原理和操作步驟1
一、目的:學習醋酸纖維薄膜電泳的操作,了解電泳技術的一般原理。二、原理:帶電質點在電場中移動的現象稱為電泳。電泳現象早在19世紀初期就被人們發現了,并用于膠體化學中,但是電泳技術的廣泛應用則在20世紀40年代左右。近年來各種類型的電泳技術發展十分迅速。例如,紙電泳、醋酸纖維薄膜電泳、纖維素或淀粉粉末
醋酸纖維素薄膜電泳測定血清蛋白質有什么臨床意義
血清蛋白電泳是用電泳的方法,測定血清中各類蛋白占總蛋白量的百分比。血清中的蛋白按照電泳時候的電泳速度不同,可以區分開來,分子量越小帶電荷越多、泳動速度就會越快。一般可以粗略的分為清蛋白,α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白和γ球蛋白。正常情況下白蛋白的數量是最多的,其次是γ球蛋白和β球蛋白。在骨髓瘤的用
醋酸纖維薄膜電泳法分離血清蛋白質的原理和操作步驟2
因此,在電泳時應盡量避免使用具有高電滲作用的支持物。醋酸纖維薄膜電泳是用醋酸纖維薄膜作為支持物的電泳方法。醋酸纖維薄膜由二乙酸纖維素制成,它具有均一的泡沫樣的結構,厚度僅120微米,有強滲透性,對分子移動無阻力,作為區帶電泳的支持物進行蛋白電泳有簡便、快速、樣品用量少、應用范圍廣、分離清晰、沒有吸附
醋酸纖維素薄膜電泳測定血清蛋白質有什么臨床意義
血清蛋白電泳是用電泳的方法,測定血清中各類蛋白占總蛋白量的百分比。血清中的蛋白按照電泳時候的電泳速度不同,可以區分開來,分子量越小帶電荷越多、泳動速度就會越快。一般可以粗略的分為清蛋白,α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白和γ球蛋白。正常情況下白蛋白的數量是最多的,其次是γ球蛋白和β球蛋白。在骨髓瘤的用
醋酸纖維素薄膜(cellulose-acetate-film)分離血清蛋白
原理 采用醋酸纖維素薄膜為支持物的電泳方法,叫做醋酸纖維素薄膜電泳。醋酸纖維素,是纖維素的羥基乙酰化所形成的纖維素醋酸酯。將它溶于有機溶劑(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均勻的薄膜則成為醋酸纖維素薄膜。該膜具有均一的泡沫狀的結構,有強滲透性,厚度約為120微米。 醋酸纖
關于醋酸纖維素薄膜電泳—加樣量的基本介紹
醋酸纖維素薄膜電泳—加樣量:加樣品的多少與電泳條件、樣品的性質、染色方法與檢測手段靈敏度密切相關。作為一般原則,檢測方法越靈敏,加樣量則越少,對分離更有利。如加樣量過大,則電泳后區帶分離不清楚,甚至互相干擾,染色也較費時。如電泳后用洗脫法定量時,每厘米加樣線上需加樣品0.1μl—0.5μl約相當
關于醋酸纖維素薄膜電泳—醋酸纖維薄膜的預處理的介紹
市售醋酸纖維薄膜均為干膜片,薄膜的浸潤與選膜是電泳成敗的重要關鍵之一。將干膜片漂浮于電極緩沖液表面,其目的是選擇膜片厚薄及均勻度,如漂浮15s—30s時,膜片吸水不均勻,則有白斑點或條紋,這提示膜片厚薄不勻,應舍去不用,以免造成電泳后區帶扭曲,界線不清,背景脫色困難,結果難以重復。由于醋酸纖維薄
臨床蛋白電泳及進展
分散介質中的帶電粒子在直流電場的作用下,向著與其電性相反的電極移動的現象稱為電泳(electrophoresis)。蛋白質為兩性電解質,在不同pH溶液中帶不同的電荷,從而在直流電場中能夠泳動,這就是蛋白質的電泳現象。1937年瑞典化學家Tiselius首先建立了蛋白質的界面電泳技術,并成功地將血清蛋
臨床蛋白電泳及進展/基本知識/概述
分散介質中的帶電粒子在直流電場的作用下,向著與其電性相反的電極移動的現象稱為電泳(electrophoresis)。蛋白質為兩性電解質,在不同pH溶液中帶不同的電荷,從而在直流電場中能夠泳動,這就是蛋白質的電泳現象。1937年瑞典化學家Tiselius首先建立了蛋白質的界面電泳技術,并成功地將血清蛋
臨床蛋白電泳及進展/基本知識/概述
分散介質中的帶電粒子在直流電場的作用下,向著與其電性相反的電極移動的現象稱為電泳(electrophoresis)。蛋白質為兩性電解質,在不同pH溶液中帶不同的電荷,從而在直流電場中能夠泳動,這就是蛋白質的電泳現象。1937年瑞典化學家Tiselius首先建立了蛋白質的界面電泳技術,并成功地將血清
醋酸纖維素薄膜電泳
6、定量(1)浸泡 將膜片上的各蛋白質分離區帶分段剪下,分別置于相應的標有編號的試管內,然后各加入0.4mol/L的氫氧化鈉溶液進行浸泡。浸泡淡色帶所加入的0.4mol/L氫氧化鈉溶液的量為4ml,深色帶為8ml(此時的稀釋倍數是淡色帶的2倍)。室溫下的浸泡時間為 30min~60min