高GC比模板的PCR擴增
PCR條件的優化是一個麻煩耗時的過程，涉及到溫度、時間、鎂離子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多個因素的調整。一般來說利用熱啟動，比如Platinum Taq DNA聚合酶（Invitrogen）可以達到更高的特異性，降低對鎂離子濃度的依賴，并且有利于提高“問題模板”的產量。然而，傳統的PCR條件優化策略經常對含有穩定二級結構的DNA序列無效，因為這些序列難以變性，并且在退火過程中影響引物與模板的結合，還可能影響到DNA聚合酶的延伸。作為一種新的PCR添加成分，PCRx Enhancer Solution（Invitrogen）有助于擴增GC豐富序列，解決由于模板問題而造成的PCR擴增困難。該系統可以提高引物結合的特異性和Taq酶的熱穩定性，并且便于鎂離子濃度和退火溫度的優化選擇。譯者曾經擴增一段GC比70%的序列，可能還有二級結構，用了多個廠家的DNA聚合酶均擴不出條帶，改用Platinum Taq DNA聚合酶后......閱讀全文
高GC比模板的PCR擴增
PCR條件的優化是一個麻煩耗時的過程，涉及到溫度、時間、鎂離子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多個因素的調整。一般來說利用熱啟動，比如Platinum Taq?DNA聚合酶（Invitrogen）可以達到更高的特異性，降低對鎂離子濃度的依賴，并且有利于提高“問題模板”的產量。然而，傳統的PCR條件
高GC比模板的PCR擴增
PCR條件的優化是一個麻煩耗時的過程，涉及到溫度、時間、鎂離子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多個因素的調整。一般來說利用熱啟動，比如Platinum Taq DNA聚合酶（Invitrogen）可以達到更高的特異性，降低對鎂離子濃度的依賴，并且有利于提高“問題模板”的產量。然而，傳統的PCR條件
高GC比模板的PCR擴增
PCR條件的優化是一個麻煩耗時的過程，涉及到溫度、時間、鎂離子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多個因素的調整。一般來說利用熱啟動，比如Platinum Taq DNA聚合酶（Invitrogen）可以達到更高的特異性，降低對鎂離子濃度的依賴，并且有利于提高“問題模板”的產量。然而，傳統的PCR條件
高－GC－含量片段的－PCR－擴增實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 甜菜堿 dNTP 溶液 二甲基亞砜 四甲基砜 Taq 酶和酶緩沖引物 儀器、耗材
高－GC－含量片段的－PCR－擴增實驗
試劑、試劑盒 甜菜堿dNTP 溶液二甲基亞砜四甲基砜Taq 酶和酶緩沖引物儀器、耗材 PCR 儀實驗步驟 一、材料1. 試劑甜菜堿（Sigma 公司）dNTP 溶液（含四種 dNTP, 每種 25 mmol/L)二甲基亞砜（DMSO)(Sigma 公司）四甲基砜（Sigma 公司）2. 酶和酶緩沖液
高－GC－含量片段的－PCR－擴增實驗
試劑、試劑盒甜菜堿dNTP 溶液二甲基亞砜四甲基砜Taq 酶和酶緩沖引物儀器、耗材PCR 儀實驗步驟一、材料1. 試劑甜菜堿（Sigma 公司）dNTP 溶液（含四種 dNTP, 每種 25 mmol/L)二甲基亞砜（DMSO)(Sigma 公司）四甲基砜（Sigma 公司）2. 酶和酶緩沖液Taq
PCR擴增模板和抗體可變區基因的擴增
PCR?擴增模板和抗體可變區基因的擴增???? 如果構建Fab抗體庫,必需利用RT-PCR獲取抗體基因;構建ScFv抗體庫,既可以DNA作模板,也可以cDNA作模板。本室在構建小鼠ScFv抗體庫過程中,主要采用DNA作為擴增模板。?【材料和試劑】（1）PCR儀（2）Taq酶（3）氯仿（4）瓊脂糖?【
GC含量高的PCR小結
xjktony擴增模板的GC 含量為66％,也不算很高,我做過更高的GC 含量(80%)的PCR.對于 這種高GC含量的PCR,要加些DMSO等,以解除其二級結構的影響,當然現在也有專門這種PCR Buffer賣.vanny寶生物有這種做高GC含量的酶和buffer，稱為LA TAKARA酶，里面有
模板－DNA－的準備、實驗的組織和－PCR－擴增實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PCR 緩沖液 ddH20 基因組 DNA dNTP 寡核苷酸引物 儀器、耗材
模板－DNA－的準備、實驗的組織和－PCR－擴增實驗
試劑、試劑盒 PCR 緩沖液ddH20基因組 DNAdNTP寡核苷酸引物儀器、耗材 離心機和轉子丙烯酸防護板過濾阻擋吸頭多道移液器PCR 儀托盤 固定器裝置底座管蓋小管實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑含 15 mmol/LMgCl2 的 10XPCR 緩沖液 (GeneAmpPCR 緩沖液
模板－DNA－的準備、實驗的組織和－PCR－擴增實驗
可以用各種方法分離基因組 DNA, 主要決定于初始材料的種類（血液還是組織）和數量。所有制備的 DNA 都應該儲存于 pH8.0 的 TE 緩沖液中并裝在滅菌的 Eppendorf 管內。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒PCR 緩沖液ddH20基因組 DNA
利用血清篩選噬菌體文庫PCR擴增的模板
[器材和試劑] ●MicroAmp反應管（PerkinElmer） ●洗脫緩沖液（20mmol/LTris—ClpH8．5，2mmol/LEDTA，1％TritonX—100） ●GeneAmp9600PCR儀（PerkinElmer） ●正向引物：5’—AGAGATTA
PCR進階——GCRich片段的擴增策略
PCR早已是分子生物學實驗的常規技術，但是GC-rich擴增始終是有難度的應用。 以人基因組為例，大約3%的序列可劃為GC-rich序列，尤其是在啟動子，增強子等控制元件，GC-rich序列更為常見。因此，GC-rich片段的PCR擴增困難，也就阻礙了有關這類序列的科研進展。 GC-Rich
高GC含量PCR樣本的擴增困難與防止污染與降解的操作方法
? ? ? ?每天做實驗小心翼翼，時時擔心提取的DNA被污染、被降解。終于，廢了九牛二虎之力，好不容易提取到高質量的DNA，然而PCR仍然P不出來條帶。是試劑加漏了嗎？是酶失活了嗎？換上新試劑，冰上重來一次，然并卵，不僅P不出來，更重要的是也不知道為啥P不出來，貝多芬都彈不出我的悲傷！?? ?
PCR的模板制備
PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。 模板的取材主要依據PCR的擴增對象，可以是病原體標本如病毒、細菌、真菌等。也可以是病理生理標本如細胞、血液、羊水細胞等。法醫學標本有血斑、精斑、毛發等。 標本處理的基本要求是除去雜質，并部分純化標本中的核酸。多數樣品需要經過SDS和蛋白酶K處理。難
PCR技術（二）：PCR反應模板的制備
PCR反應的關鍵因素主要有引物的選擇與設計，酶的質量.模板的制備，在前二者都穩定可行的情況下，PCR模板的制備尤為重要.模板處理方法的選擇及操作人員的基 本技能，決定分離模板核酸(DNA或RNA)的質和量及PCR的成敗.而提高模板核酸質量的 關鍵是除去雜質(蛋白質、酶、脂肪等).除去抑制Taq DN
終點PCR中的頂配—熱啟動PCR聚合酶組合的使用方法（二）
? ? ? ?如果您需要熱啟動PCR預混液，這里有多功能熱啟動PCR預混液，因為篇幅有限，這里給大家列表展示:? 基于熱啟動酶的PCR類型 英文名稱 產品特色 MgCl2 濃度 *擴增片段范圍 貨號 高GC含量PC
PCR的模板最大是多少
長片段PCR擴增試劑盒所用的酶是Taq聚合酶和有校正功能的聚合酶的混合酶,這種混合酶可以染色體和其它細胞器的DNA為模板高效進行PCR反應。在人的染色體上可以擴增出27kb的DNA片段,而以DNA為模板則可以擴增出40 kb的片段.現在的那些試劑盒還是比較牛的
PCR疑難解答終點PCR及相關PCR反應的分類
? ? ? ?1.PCR的概念?? ? ? ?PCR，即聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR），主要由高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個步驟反復的熱循環構成：即模板DNA先經高溫變性為單鏈，在DNA聚合酶和適宜的溫度下，兩條引物分別與兩條模板DNA鏈上的一段互
如何提高PCR的擴增特異性？
? ? ? 疫情當下，最熱頻的詞匯莫過于核酸檢測了。而核酸檢測最核心的技術也越來越被大眾所熟知，就是我們高中就學過的聚合酶鏈式反應，又稱為PCR。?? ? ? ?自從1983年，Kary Mullis才發明出這個用于擴增目標DNA的研究工具—PCR技術后，其逐漸成為分子生物學研究必不可少的一部分
Takara推出PCR領域的全能酶
幸福的PCR都是相似的，不幸的PCR各有各的不幸。PCR雖說并不是個復雜的過程，但經常會遇到各種各樣的問題，比如GC含量過高、片段太長、保真度不夠等等。許多DNA聚合酶就是針對這些問題而設計的，以實現“更高更快更強”。然而，PCR擴增的模板千變萬化，每次都要換，這確實麻煩。若有一種全能酶，能解決
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗
酚-氯仿法提取石蠟組織中 DNA 改進的石蠟切片 DNA 提取方法 直接法（DNA 免提法） 冰凍片 含血標本 胸腹水或尿液 ? ? ? ? ? ?
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗
實驗方法原理 實驗步驟 1. 10 mm 厚石蠟切片 10～15 張，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脫蠟 二甲苯 1200 μl，9000 r/min，8 min×3。3. 脫水無水乙醇 1200 μl，9000 r/min，5 min×3。4. 打開 Eppendor
PCR擴增的步驟
PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：模板DNA的變性模板DNA經加 熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；模板DNA與引 物的退火(復性)模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模
PCR擴增的步驟
PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：模板DNA的變性模板DNA經加 熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；模板DNA與引 物的退火(復性)模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模
PCR擴增的步驟
PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：模板DNA的變性模板DNA經加 熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；模板DNA與引 物的退火(復性)模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模
PCR擴增的步驟
PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：模板DNA的變性模板DNA經加 熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；模板DNA與引 物的退火(復性)模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模
耐熱DNA聚合酶的選擇
耐熱DNA聚合酶特點：合理選擇耐熱DNA聚合酶是PCR成敗與否的一個關鍵因素，如何選擇最合適的耐熱聚合酶，是進行PCR實驗首先要考慮的問題。目前市面上有許多耐熱DNA聚合酶，雖然名稱各不相同，但主要區別在于特異性、保真性、耐熱性、擴增速率、擴增片段長度等幾個指標。TIANGEN公司生產的耐熱DNA聚
耐熱DNA聚合酶的選擇指南
一、耐熱DNA聚合酶特點合理選擇耐熱DNA聚合酶是PCR成敗與否的一個關鍵因素，如何選擇最合適的耐熱聚合酶，是進行PCR實驗首先要考慮的問題。目前市面上有許多耐熱 DNA聚合酶，雖然名稱各不相同，但主要區別在于特異性、保真性、耐熱性、擴增速率、擴增片段長度等幾個指標。TIANGEN公司生產的耐熱DN
耐熱DNA聚合酶的選擇指南
耐熱DNA聚合酶特點：合理選擇耐熱DNA聚合酶是PCR成敗與否的一個關鍵因素，如何選擇最合適的耐熱聚合酶，是進行PCR實驗首先要考慮的問題。目前市面上有許多耐熱DNA聚合酶，雖然名稱各不相同，但主要區別在于特異性、保真性、耐熱性、擴增速率、擴增片段長度等幾個指標。TIANGEN公司生產的耐熱DNA聚