免疫酶標技術——雙PAP法
實驗方法原理這種方法可在復合物體系中連接更多的PAP復合物，對抗原可進一步放大，因此靈敏度更為增強，適用于微量抗原的檢測。實驗材料抗體試劑、試劑盒PBSH2O2血清DAB蘇木精儀器、耗材顯微鏡實驗步驟1. 標本固定后，PBS洗滌；2. 1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）阻斷內源性過氧化物，室溫10～20 分鐘；3. PBS洗2×3 分鐘；4. 正常血清（二抗的正常血清）孵育，室溫20 分鐘；5. 滴加一抗，室溫1 小時或4 ℃過夜；6. PBS洗3×3 分鐘；7. 滴加二抗，室溫30 分鐘；8. PBS洗3×3 分鐘；9. 加PAP復合物，室溫60 分鐘；10. PBS洗滌3×3 分鐘；11. 二次加酶標二抗；12. PBS洗；13. 二次加PAP；14. P......閱讀全文
免疫酶標技術——雙PAP法
實驗方法原理這種方法可在復合物體系中連接更多的PAP復合物，對抗原可進一步放大，因此靈敏度更為增強，適用于微量抗原的檢測。實驗材料抗體試劑、試劑盒PBSH2O2血清DAB蘇木精儀器、耗材顯微鏡實驗步驟1. ?標本固定后，PBS洗滌；2. ?1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）阻斷內源性過氧化物，室
免疫酶標方法(直接法、間接法、PAP法和雙PAP法)
一、直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1% H2O2（或1% H2O2 甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1:10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色結
免疫酶細胞化學技術中的雙PAP法檢測微量抗原
在復合物體系中連接更多的PAP復合物，來進一步放大抗原，從而使靈敏度更為增強，適用于檢測微量抗原。實驗方法：?將固定后的標本用PBS漂洗；2.?于室溫下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min，用來密封內源性過氧化物酶；3.?PBS漂洗2次，每次3min；4.?在室溫下用二抗的正常血
非標記抗體免疫酶組織化學實驗——雙－PAP－法
實驗方法原理在 PAP 法的基礎上重復第二抗體和 PAP 復合物，重復的連接抗體和 PAP 復合物可能有以下兩種連接方式（圖 4-10）。第一種（A）重復連接抗體可與一個 PAP 中的抗 HRP 抗體上未飽和的 Fc 段結合，再與后加的 PAP 復合物相結合；第二種（B）重復連接抗體與特異性一抗分子
免疫酶標技術
免疫酶標技術1）??直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1％?H2O2（或1％?H2O2?甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘
免疫酶標技術
中文名稱免疫酶標技術英文名稱immunoenzymatic technique定 義以酶標記抗體（或抗原），通過相應底物被酶解后的顯色反應，對細胞和組織標本中的抗原-抗體復合體進行定位、定性分析和鑒定的方法。也可根據酶催化底物顯色的深淺程度，定量測定體液標本中待測抗原或抗體的含量。應用學科細胞生物
免疫酶標技術
實驗方法原理 先將酶與抗體結合形成酶標抗體，然后和相應的抗原反應，使抗原抗體復合物上帶有酶分子，再與酶的底物H2O2—DAB（3’3—二胺荃聯苯胺）發生顯色反應，在顯微鏡下觀察，根據顏色產物檢測相應抗原。實驗材料 抗體試劑、試劑盒 PBSH2O2血清儀器、耗材 顯微鏡實驗步驟 1. ?標本固定；2.
免疫酶標技術
1） 直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色
免疫酶標技術的技術特點
中文名稱免疫酶標技術英文名稱immunoenzymatic technique定 義以酶標記抗體（或抗原），通過相應底物被酶解后的顯色反應，對細胞和組織標本中的抗原-抗體復合體進行定位、定性分析和鑒定的方法。也可根據酶催化底物顯色的深淺程度，定量測定體液標本中待測抗原或抗體的含量。應用學科細胞生物
免疫酶標技術——直接法
實驗方法原理先將酶與抗體結合形成酶標抗體，然后和相應的抗原反應，使抗原抗體復合物上帶有酶分子，再與酶的底物H2O2—DAB（3’3—二胺荃聯苯胺）發生顯色反應，在顯微鏡下觀察，根據顏色產物檢測相應抗原。實驗材料抗體試劑、試劑盒PBSH2O2血清儀器、耗材顯微鏡實驗步驟1. ?標本固定；2. ?PBS
免疫酶標技術——間接法
實驗方法原理將酶標記在第二抗體上，再與已形成的抗原抗體復合物中的第一抗體反應。目前廣泛應用的PAP法、ABC法是在間接法的原理和技術的基礎上發展起來的。實驗材料抗體試劑、試劑盒PBSH2O2血清儀器、耗材顯微鏡實驗步驟1. ?標本固定；2. ?PBS洗滌2×3 分鐘；3. ?1 %H2O2（或1 %
非標記抗體酶法PAP法
PAP復合物是離體制備的HRP抗HRP復合物，它的制備方法較多，現簡介其中之一。（1）制備抗HRP血清：健康雄性家兔（2．Okg以上），可先于足趾皮下注射滅活的卡介苗（共lOmg），2周后重復1次，刺激機體免疫系統功能，1周后于背部脊柱兩旁皮內多點注射1．Oral乳劑[福氏完全佐劑，含HRP3。3m
細胞免疫化學：免疫酶標技術
1） 直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1％?H2O2（或1％?H2O2?甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色
非標記抗體免疫酶組織化學實驗——PAP－法
實驗方法原理與酶橋法相似，不同的是酶橋法分四步，而 PAP 法分三步。PAP 法將酶橋法的步驟（3）、步驟（4）合二并為一，用 PAP 復合物替代，故稱 PAP 法（圖 4-9）。PAP 復合物中的抗 HRP 抗體和第一抗體必須為同一種屬動物的 IgG，這樣橋抗體才能作為「橋」將 PAP 復合物連接
免疫酶標技術—PAP法過氧化物酶抗過氧化物酶抗體復合物
實驗方法原理PAP 的基本原量是在間接法的基礎上，即在加完酶標二抗以后，再加一個PAP 復合物（過氧化物酶一抗過氧化物酶抗體復合物）。PAP 復合物為由3 個酶分子和2個抗酶抗體亞單位構成的復環形復合物，其穩定性很強，沖洗時不會脫落。在這種方法中，PAP 復合物中的抗酶抗體與特異性一抗必須來自同一種
免疫熒光雙標技術中操作要點和經驗
一、免疫熒光技術中標本制作的基本程序近似于酶免疫組化，不同點如下：?1、免疫熒光不需要使用雙氧水處理，封閉和一抗孵育與其相同。?2、免疫熒光的二抗使用不同熒光標記的二抗孵育，孵育時間根據抗體的工作濃度確定。?3、二抗孵育之后充分洗片后即可貼片、封片和觀察。?4、免疫熒光在封片時常使用專用封片劑或甘油
什么是酶標法？
酶聯免疫吸附試驗方法簡稱酶標法，是標記技術中的一種，是從熒光抗體技術，同位素免疫技術發展而來的一種敏感，特異，快速并且能自動化的現代技術。 酶標法的基本原理是將抗原或抗體與酶用膠聯劑結合為酶標抗原或抗體，此酶標抗原或抗體可與固相載體上或組織內相應抗原或抗體發生特異反應，并牢固地結合形成仍保持活
酶標儀酶標法介紹
酶聯免疫吸附試驗方法簡稱酶標法，是標記技術中的一種，是從熒光抗體技術，同位素免疫技術發展而來的一種敏感，特異，快速并且能自動化的現代技術。酶標法的基本原理是將抗原或抗體與酶用膠聯劑結合為酶標抗原或抗體，此酶標抗原或抗體可與固相載體上或組織內相應抗原或抗體發生特異反應，并牢固地結合形成仍保持活性的免疫
SPA－在免疫組化中的應用——PAP－法
SPA 可為多種示蹤物（如熒光素、酶、膠體金、鐵蛋白）所標記，應用較廣泛的為酶標記 SPA 和金標記 SPA 技術。標記 SPA 常用的酶為 HRP，可應用于間接法染色，SPA 在 PAP 法中可代替橋抗體。實驗方法原理SPA 除與標記物結合后用于代替第二抗體外，其本身可作為橋抗體用于 PAP 染色
金標免疫層析法簡介
金標免疫層析法(goldimmunochromatographicas say，GICA)是20世紀90年代初發展起來的快速免疫分析技術，是一種建立在免疫層析技術、單克隆抗體技術和金納米晶標記技術基礎上的一種固相檢測技術。 金納米晶標記技術是以金納米晶作為示蹤標記物或顯色劑，應用于抗原抗體反應
酶標法的相關介紹
酶標法是指使用 酶聯免疫吸附試驗（ ELISA）來檢測HIV抗體。這種方法是根據酶免疫測定原理發展的一種技術，其基本方法分三類：間接法、雙抗原夾心法和抗體競爭法。 目前國內外主要使用的是第三代（雙抗原夾心法）試劑。血源篩查以第三代 ELISA為主，國際上有些國家和地區已經將第四代 ELISA試劑
免疫熒光雙標技術中操作要點和注意事項
一、免疫熒光技術中標本制作的基本程序近似于酶免疫組化，不同點如下：?1、免疫熒光不需要使用雙氧水處理，封閉和一抗孵育與其相同。?2、免疫熒光的二抗使用不同熒光標記的二抗孵育，孵育時間根據抗體的工作濃度確定。?3、二抗孵育之后充分洗片后即可貼片、封片和觀察。?4、免疫熒光在封片時常使用專用封片劑或甘油
免疫熒光雙標技術中操作要點和注意事項
一、免疫熒光的標本制作的基本程序同DAB顯色的免疫組化，不同點如下：1、免疫熒光不需要使用雙氧水處理，封閉和一抗孵育與其它相同。2、免疫熒光的二抗使用不同熒光標記的二抗孵育，孵育時間根據抗體的工作濃度確定。3、二抗孵育之后充分洗片后即可貼片、封片和觀察。4、免疫熒光在封片使用專用封片劑或甘油：0.0
免疫酶標方法的方法原理
免疫酶標方法是繼免疫熒光后，于60年代發展起來的技術。基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是最常用的技術。本方法與免疫熒光技術相比的主要優點是：定位準確，
PAP－elisa酶聯免疫試劑盒檢測中樣品的處理
1．細胞培養物上清：細胞培養物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標本保存于-20℃，且應避免反復凍融。2．血清：標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。3．血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑標本采集后3
金標免疫層析法和熒光免疫層析法的區別
酶免法是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。用酶與指示劑的反應來放大信號便于檢測。就是用酶標記抗原或抗體，抗原抗體反應后加入酶的指示劑(酶的底物反應后會顯色)，顏色的深淺與抗
金標免疫層析法和熒光免疫層析法的區別
酶免法是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。用酶與指示劑的反應來放大信號便于檢測。就是用酶標記抗原或抗體，抗原抗體反應后加入酶的指示劑(酶的底物反應后會顯色)，顏色的深淺與抗
金標免疫層析法和熒光免疫層析法的區別
酶免法是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。用酶與指示劑的反應來放大信號便于檢測。就是用酶標記抗原或抗體，抗原抗體反應后加入酶的指示劑(酶的底物反應后會顯色)，顏色的深淺與抗
金標免疫層析法和熒光免疫層析法的區別
酶免法是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。用酶與指示劑的反應來放大信號便于檢測。就是用酶標記抗原或抗體，抗原抗體反應后加入酶的指示劑(酶的底物反應后會顯色)，顏色的深淺與抗
金標免疫層析法和熒光免疫層析法的區別
酶免法是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。用酶與指示劑的反應來放大信號便于檢測。就是用酶標記抗原或抗體，抗原抗體反應后加入酶的指示劑(酶的底物反應后會顯色)，顏色的深淺與抗