1. 標本固定后，PBS洗滌；
2. 1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）阻斷內源性過氧化物，室溫10～20 分鐘；
3. PBS洗2×3 分鐘；
4. 正常血清（二抗的正常血清）孵育，室溫20 分鐘；
5. 滴加一抗，室溫1 小時或4 ℃過夜；
6. PBS洗3×3 分鐘；
7. 滴加二抗，室溫30 分鐘；
8. PBS洗3×3 分鐘；
9. 加PAP復合物，室溫60 分鐘；
10. PBS洗滌3×3 分鐘；
11. 二次加酶標二抗；
12. PBS洗；
13. 二次加PAP；
14. PBS洗；
15. 0.04 %DAB+0.03 %H2O2顯色5～10 分鐘；
16. 蘇木素復染核，封片，鏡檢。
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