免疫酶標技術——直接法

抗體

PBSH2O2血清

顯微鏡

1.  標本固定；

2.  PBS洗滌2×3 分鐘；

3.  1 %H₂O₂（或1 %H₂O₂甲醇）抑制內源性過氧化物酶，室溫10～20 分鐘；

4.  正常血清（1：10）孵育，室溫20 分鐘；

5.  滴加酶標記的抗體37 ℃1 小時或4 ℃過夜；

6.  PBS洗3×3 分鐘；

7.  DAB+H₂O₂顯色5～10 分鐘，鏡下控制染色結果。DAB+H₂O₂應于用前15 分鐘配制。

8.  充分水洗后，復染、脫水、透明、封片、鏡檢。

直接法的優點是特異性高，非特異性染色輕，缺點是敏感性低，必須對第一種抗體都進行標記，操作不便，目前只用于單克隆抗體的篩選及酶聯免疫吸附試驗。