關于核酸雜交的步驟介紹
(1)制備樣品:首先需要從待檢測組織樣品提取DNA或RNA。DNA應先用限制性內切酶消化以產生特定長度的片段,然后通過凝膠電泳將消化產物按分子大小進行分離。一般來說DNA分子有其獨特的限制性內切酶圖譜,所以經酶切消化和電泳分離后可在凝膠上形成特定的區帶。再將含有DNA片段的凝膠進行變性處理后,直接轉印到支持膜上并使其牢固結合。這樣等檢測片段在凝膠上的位置就直接反映在了轉印在膜上。RNA樣品則可直接在變性條件下電泳分離,然后轉印并交聯固定。 (2)制備探針:探針是指一段能和待檢測核酸分子依堿基配對原則而結合的核酸片段。它可以是一段DNA、RNA或合成的寡核苷酸。在核酸雜交實驗中,探針需要被標記上可直接檢測的元素或分子。這樣,通過檢疫與恩印膜上的核酸分子結合上的探針分子,既可知道被檢測的核酸片段在膜上的位置,也就是在電泳凝膠上的位置,也就知道了它的分子大小。 (3)雜交:首先要進行預雜交,即用非特異的核酸溶液封閉膜上......閱讀全文
關于核酸雜交的步驟介紹
(1)制備樣品:首先需要從待檢測組織樣品提取DNA或RNA。DNA應先用限制性內切酶消化以產生特定長度的片段,然后通過凝膠電泳將消化產物按分子大小進行分離。一般來說DNA分子有其獨特的限制性內切酶圖譜,所以經酶切消化和電泳分離后可在凝膠上形成特定的區帶。再將含有DNA片段的凝膠進行變性處理后,直
核酸雜交的步驟
(1)制備樣品:首先需要從待檢測組織樣品提取DNA或RNA。DNA應先用限制性內切酶消化以產生特定長度的片段,然后通過凝膠電泳將消化產物按分子大小進行分離。一般來說DNA分子有其獨特的限制性內切酶圖譜,所以經酶切消化和電泳分離后可在凝膠上形成特定的區帶。再將含有DNA片段的凝膠進行變性處理后,直接轉
關于核酸的雜交介紹
具有互補序列的不同來源的單鏈核酸分子,按堿基配對原則結合在一起稱為核酸雜交(hybridization)。雜交可發生在DNA-DNA、RNA-RNA和DNA-RNA之間。雜交是分子生物學研究中常用的技術之一,利用它可以分析基因組織的結構,定位和基因表達等,常用的雜交方法有Southern印跡法,
簡述核酸雜交的步驟
(1)制備樣品:首先需要從待檢測組織樣品提取DNA或RNA。DNA應先用限制性內切酶消化以產生特定長度的片段,然后通過凝膠電泳將消化產物按分子大小進行分離。一般來說DNA分子有其獨特的限制性內切酶圖譜,所以經酶切消化和電泳分離后可在凝膠上形成特定的區帶。再將含有DNA片段的凝膠進行變性處理后,直
核酸雜交的技術操作步驟
(1)制備樣品:首先需要從待檢測組織樣品提取DNA或RNA。DNA應先用限制性內切酶消化以產生特定長度的片段,然后通過凝膠電泳將消化產物按分子大小進行分離。一般來說DNA分子有其獨特的限制性內切酶圖譜,所以經酶切消化和電泳分離后可在凝膠上形成特定的區帶。再將含有DNA片段的凝膠進行變性處理后,直接轉
關于核酸分子雜交的基本介紹
雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總RNA。根據使用的方法被檢測的核酸可以是提純的,也可以在細胞內雜交,即細胞原位雜交。探針必須經過標記,以便示蹤和檢測。使用最普遍的探針標記物是同位素,但由于同位素的安全性,近年來發展了許多非同位素
關于Southern雜交的步驟介紹
1.將標記的DNA探針置沸水浴10min,迅速置冰上冷卻1-2min,使DNA變性。 2.從水浴中取出含有濾膜和預雜交液的塑料袋,剪開一角,將變性的DNA探針加到預雜交液中。 3.盡可能除取袋中的空氣,封住袋口,滯留在袋中的氣泡要盡可能地少,為避免同位素污染水浴,將封好的雜交袋再封入另一個未
關于核酸雜交的基本信息介紹
核酸雜交(Hybridization): 互補的核苷酸序列(DNA與DNA、DNA與RNA、RNA與RNA等)通過Watson-Crick堿基配對形成非共價鍵,從而形成穩定的同源或異源雙鏈分子的過程,稱為核酸分子雜交技術,又稱核酸雜交。
關于核酸分子雜交技術的基本介紹
由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。
關于核酸雜交的基本原理介紹
其原理是核酸變性和復性理論。即雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開,而在條件恢復后又可依堿基配對規律形成雙鏈結構。雜交通常在一支持膜上進行,因此又稱為核酸印跡雜交。根據檢測樣品的不同又被分為DNA印跡雜交(Southern blot hybridization )和RNA印跡雜交(Nort
關于核酸分子雜交的應用
核酸分子雜交作為一項基本技術,已應用于核酸結構與功能研究的各個方面。核酸分子雜交具有很高的靈敏度和高度的特異性,因而該技術在分子生物學領域中已廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的定性、定量檢測和疾病的診斷等方面。因而它不僅在分子生物學領域中具有廣泛地應用,而且在臨床
關于核酸的分子雜交的檢查過程介紹
(1) rRNA-DNA雜交:變性rRNA與變性DNA混合時,rRNA與其互補的DNA鏈形成雜交雙鏈,rRNA分子與異源DNA雜交時,也能在其同源區形成互補雙鏈,這種雜交雙鏈的穩定性與其同源性成正相關,適于細菌屬及屬上水平的分類研究。現最常用的是硝酸纖維膜結合法。 (2) 核酸探針技術 應用
核酸分子雜交探針的介紹
若雜交的目的是識別靶DNA中的特異核苷酸序列,這需要牽涉到另一項核酸操作的基本技術─探針(probe)的制備。探針是指帶有某些標記物(如放射性同位素32P,熒光物質異硫氰酸熒光素等)的特異性核酸序列片段。若我們設法使一個核酸序列帶上32P,那么它與靶序列互補形成的雜交雙鏈,就會帶有放射性。以適當
核酸分子雜交法介紹
這是最早用于性病診斷的重組DNA技術。基本原理是具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下(適宜的溫度及離子強度等)可按堿基互補原則形成雙鏈,此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。待測核酸序列為性病病原體基因組或質粒DNA。探針以放射核素或非放射性核素標記,以利于雜交信號的檢測。 所謂
關于核酸的分子雜交的簡介
核酸的分子雜交是定性或定量檢測特異RNA或DNA序列片段的有力工具。它是利用核酸分子的堿基互補原則而發展起來的。在堿性環境中加熱或加入變性劑等條件下,雙鏈DNA之間的氫鍵被破壞(變性),雙鏈解開成兩條單鏈。這時加入異源的DNA或RNA(單鏈)并在一定離子強度和溫度下保溫(復性),若異源DNA或R
關于核酸分子雜交技術的特點和技術介紹
1、特點 (1)靈敏度高、特異性強; (2)用于 DNADNA和RNARNA的定性、定量檢測。 2、用途 (1)檢測特異 DNADNA序列的拷貝數、特定DNADNA區域的限制性內切酶圖譜,判定基因的缺失、插入、重排現象; (2)特異基因克隆的篩選; (3)核酸序列的初略分析; (4
核酸分子雜交技術的基本介紹
由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。 (1)靈敏度高、特異性強; (2)用于 DNADNA和RNARNA的定性、定量檢測。
核酸分子雜交的主要類型介紹
核酸分子雜交可分為液相雜交和固相雜交。1.液相雜交液相雜交是讓DNA探針和待測核酸在溶液中進行反應。在溶液中,待測核酸和探針均自由運動,增加了兩者結合的機會,因此液相雜交要比固相雜交快5~10倍。但液相雜交不易分離雜交體和游離核酸探針,常規應用不易。2.固相雜交固相雜交是先將待測核酸樣本結合到固相載
核酸探針雜交檢測技術介紹
一、核酸探針預雜交預雜交的目的是用非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其他高分子化合物(Denhart’s溶液)將待測核酸分子中的非特異性位點封閉,以避免這些位點與探針的非特異性結合。雜交反應是使單鏈核酸探針與固定在膜上的待測核酸單鏈在一定溫度和條件下進行復性反應的過程。雜交
雜交核酸的定義
中文名稱雜交核酸英文名稱hybrid nucleic acid定 義來源不同的單鏈DNA或單鏈RNA,通過堿基配對所形成的異質雙鏈的核酸分子。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與基因(二級學科)
核酸雜交的原理
其原理是核酸變性和復性理論。即雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開,而在條件恢復后又可依堿基配對規律形成雙鏈結構。雜交通常在一支持膜上進行,因此又稱為核酸印跡雜交。根據檢測樣品的不同又被分為DNA印跡雜交(Southern blot hybridization )和RNA印跡雜交(Northe
什么核酸雜交?
具有互補序列的不同來源的單鏈核酸分子,按堿基配對原則結合在一起稱為核酸雜交(hybridization)。雜交可發生在DNA-DNA、RNA-RNA和DNA-RNA之間。雜交是分子生物學研究中常用的技術之一,利用它可以分析基因組織的結構,定位和基因表達等,常用的雜交方法有Southern印跡法,No
基因診斷技術核酸雜交的相關介紹
是從核酸分子混合液中檢測特定大小的核酸分子的傳統方法。核酸雜交反應是一對一的反應,即膜上有一個被檢測分子時,相應就有一個標記的探針分子與它雜交。其原理是核酸變性和復性理論。即雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開,而在條件恢復后又可依堿基配對規律形成雙鏈結構。雜交通常在一支持膜上進行,因此又
四維核酸雜交技術介紹
定義 四維核酸雜交技術[ 1 ](4DH),即在傳統核酸雜交三維空間(XYZ:表征DNA片段的長度、堿基組成和堿基的排列)的基礎上引入溫度作為第四位參數所構成的四維溫度空間平臺上建立的核酸雜交技術。 背景 基因組(genome)是指人類細胞中所有遺傳信息的總和。基因組信息
四維核酸雜交技術介紹
四維核酸雜交技術[?1?](4DH),即在傳統核酸雜交三維空間(XYZ:表征DNA片段的長度、堿基組成和堿基的排列)的基礎上引入溫度作為第四位參數所構成的四維溫度空間平臺上建立的核酸雜交技術。背景 基因組(genome)是指人類細胞中所有遺傳信息的總和。基因組信息是由脫氧核糖核酸(又稱為DNA)攜帶
四維核酸雜交技術介紹
定義 四維核酸雜交技術[ 1 ](4DH),即在傳統核酸雜交三維空間(XYZ:表征DNA片段的長度、堿基組成和堿基的排列)的基礎上引入溫度作為第四位參數所構成的四維溫度空間平臺上建立的核酸雜交技術。 背景 基因組(genome)是指人類細胞中所有遺傳信息的總和。基因組信息
核酸電泳的步驟方法介紹
?核酸電泳是進行核算研究的重要手段,常用于和瓊脂糖凝膠聚丙烯酰胺凝膠兩種,凝膠電泳操作簡單,是分離鑒定和純化核算的一種常用方法,那么核酸電泳的步驟有哪些的呢?瓊脂糖凝膠電泳的步驟:用透明膠將玻璃板或電泳裝置所配備的塑料盤的邊緣圈封,制成膠模,置水平工作臺上;(2) 稱取適量瓊脂糖,置電泳緩沖液中,加
核酸分子雜交的概念
核酸分子雜交(簡稱雜交,hybridization)是核酸研究中一項最基本的實驗技術。互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈DNA或RNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。
核酸雜交的技術原理
其原理是核酸變性和復性理論。即雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開,而在條件恢復后又可依堿基配對規律形成雙鏈結構。雜交通常在一支持膜上進行,因此又稱為核酸印跡雜交。根據檢測樣品的不同又被分為DNA印跡雜交(Southern blot hybridization )和RNA印跡雜交(Northe
核酸分子雜交的簡介
核酸分子雜交(簡稱雜交,hybridization)是核酸研究中一項最基本的實驗技術。互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈DNA或RNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。 雜交過程是高度特異性的,可