SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳會產生誤差的原因
不論標準品還是待測樣品的蛋白質,在形態上都不可能達到理想的剛性標準球狀,有的是棒狀,有的是橢球狀等等,這種形態上的差異導致即使分子質量相同的蛋白質在凝膠中的遷移率也會有所不同.......閱讀全文
使用SDS法提取DNA中SDS是什么作用
SDS中文名十二烷基硫酸鈉，是一種已知的能夠使蛋白質變性的去污劑，它可以用于核酸抽提操作中破壞細胞壁及裂解核酸：蛋白復合物。在較高溫度下，破壞蛋白質與DNA的結合，使DNA釋放出來。
SDS－Whole－Cell－Extracts
-Use sterile technique and sterile solutions in steps 1 to 3.-1. Using a saturated starter culture, inoculate 25 to 30 ml of appropriate media in a 12
SDS－Gel－Electrophoresis－of－Tubulin\MAPs
MaterialsStock Acrylamide: (30%T:0.8%C)30% by weight of acrylamide0.8% by weight of N,N'-bis-methylene acrylamideSeparation Gel (Final Concentrati
SDS法提取小麥DNA
在提取DNA的過程中SDS的主要作用裂解細胞以及是蛋白質與核酸分離。在提取核酸的過程中，經常會用到高溫（一般65-70攝氏度）加SDS一起裂解細胞，這樣會讓核酸釋放的更快，更徹底；高溫也是裂解細胞的一種方法。但加熱本身對SDS沒有任何輔助作用。但在低溫條件下SDS的溶解度沒有那么高，所以會有一定的沉
SDSPAGE常用參數
聚丙烯酰胺的特性，包括機械性能，彈性，透明度，孔徑大小取決于T，C，T是兩個單體(單體丙烯酰胺和N-N’-甲叉雙丙烯酰胺)的總百分濃度，C 是與總濃度有關的交聯百分比濃度。T=(a+b)/mC=b/(a+b)（a為單體丙烯酰胺的克數，b為N-N’-甲叉雙丙烯酰胺的克數，m為緩沖液終體積）a，b的比例
SDSPAGE膠制備
一. 實驗原理： SDS-PAGE是對蛋白質進行量化，比較及特性鑒定的一種經濟、快速、而且可重復的方法。該法是依據混合蛋白的分子量不同來進行分離的。 SDS是一種去垢劑，可與蛋白質的疏水部分相結合，破壞其折疊結構，并使其廣泛存在于一個廣泛均一的溶液中。SDS蛋白質復合物的長度與其分子量成正比。在樣
SDS法分離植物DNA
實驗概要Dellaporta，Wood?和?Hicks (1983)?法分離植物總基因組DNA，通過實驗掌握SDS法從植物葉片提取DNA?的原理和方法。主要試劑提取緩沖液?[?詳細信息：100mM Tris.Cl,；50mM EDTA； 500mM Nacl；40mmol/L?巰基乙醇，隨用隨加。]
酚/SDS法制備植物RNA
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 液氮 研磨緩沖液 TLE 緩沖液平衡酚) 氯仿 IiCl 溶液 (DEPC 處理） 乙酸鈉 (DEPC 處理）
SDSPAGE膠的干燥
凝膠干燥時遇到的主要問題是凝膠的變形和破裂。將凝膠放在Whatman 3MM濾紙上可防止干燥凝膠變形，但凝膠是否破裂取決于凝膠的厚度和干燥器的質量，因此，應盡量使用薄膠并使凝膠干燥器處于良好狀態，使其真空壓力波動極少。(1)試劑與配制：固定液：冰醋酸:甲醇:水（10:20:70）(2)電泳后的凝膠用
SDSPAGE的影響因素
1. 帶電顆粒的性質凈電荷多少、顆粒大小及形狀。一般凈電荷多，直徑小而且近于球狀，則泳動速度快，反之則慢。?2. 電場強度（電位梯度）指單位長度（cm）支持物體上的電位降，它對泳動度起著十分重要的作用。一般電場強度越高，帶電顆粒移動速度越快。根據電場強度可將電泳分為低壓（常壓）電泳100—500V，
SDSPAGE檢測蛋白表達
一、材料與儀器30%丙烯酰胺溶液；1.5mol/L Tris-HCl分離膠緩沖液，PH8.8；1.0mol/L Tris-HCl濃縮膠緩沖液，PH6.8；電泳緩沖液，PH8.3；10%SDS溶液；10%過硫酸銨溶液；樣品處理液；染色液；脫色液；電泳玻璃板，電泳電源架，電泳槽，電泳儀等；蛋白Mark。
SDSPAGE的影響因素
1. 帶電顆粒的性質凈電荷多少、顆粒大小及形狀。一般凈電荷多，直徑小而且近于球狀，則泳動速度快，反之則慢。2. 電場強度（電位梯度）指單位長度（cm）支持物體上的電位降，它對泳動度起著十分重要的作用。一般電場強度越高，帶電顆粒移動速度越快。根據電場強度可將電泳分為低壓（常壓）電泳100—500V，電
定量SDS凝膠染色與掃描
試劑、試劑盒 考馬斯亮藍（CBB) 染色液脫色液儀器、耗材 SDS-PAGE 電泳裝置凝膠掃描裝置實驗步驟 設備SDS-PAGE 電泳裝置凝膠掃描裝置試劑考馬斯亮藍（CBB) 染色液脫色液(配方，見“試劑的配制”，PP.184~189)操作程序1) 小心地在 SDS 凝膠泳道上加一組按量遞增為序的蛋
SDSPAGE的操作步驟
(1) SDS-PAGE凝膠配制SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻資料進行配制，也可以使用碧云天生產的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒(P0012A)。該試劑盒提供了除水和配膠器具外的所有試劑以及配制各種濃度SDS-PAGE的配方。(主要分為濃縮膠和分離膠，配方可自己上網查下)(2) 樣品處理在收集
定量SDS凝膠染色與掃描
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 考馬斯亮藍（CBB) 染色液 脫色液 儀器、耗材 SDS-PAGE 電泳裝置 凝膠掃
酚/SDS法制備植物RNA
試劑、試劑盒 液氮 研磨緩沖液TLE 緩沖液平衡酚)氯仿IiCl 溶液 (DEPC 處理）乙酸鈉 (DEPC 處理） 無水乙醇DEPC 處理水儀器、耗材 Folytron 勻漿器（BrinkmarmPT10 35)實驗步驟 一 材料與設備1) 液氮2) 研磨緩沖液 18mol/LTris，0.09m
SDSPAGE實驗方法
試劑：1. 5x樣品緩沖液（10ml）:0.6ml 1mol/l的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巰基乙醇，1ml 1%溴酚藍，0.9ml蒸餾水。可在4℃保存數周，或在－20℃保存數月。2. 凝膠貯液：在通風櫥中，稱取丙烯酰胺30g，甲叉雙丙烯酰
SDSPAGE的影響因素
1. 帶電顆粒的性質 凈電荷多少、顆粒大小及形狀。一般凈電荷多，直徑小而且近于球狀，則泳動速度快，反之則慢。 2. 電場強度（電位梯度） 指單位長度（cm）支持物體上的電位降，它對泳動度起著十分重要的作用。一般電場強度越高，帶電顆粒移動速度越快。根據電場強度可將電泳分為低壓
定量SDS凝膠染色與掃描
大多數蛋白質雖然每毫克能結合大致相同量的染料，但不同蛋白質之間結合染料的能力仍有 10% 或更大的差異。因此，本法所得的數值不是非常準確的，除非你能用相同的蛋白質作標準來測定蛋白濃度。不過，一般說來，CBB 染色要比銀染準確得多。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南，作者：朱厚礎。試劑、試劑盒考馬斯
Tricine－SDSPAGE實用方案
Tricine-SDS-PAGE是用于分離分子量在1-10kD的肽類用的。一、 試劑配制：1． Low Bis acrylamide（49.5% T, 3% C）Acylamide 48.0gBis 1.5gWater make up to 100ml2. High Bis acrylamide (
電泳液中加入SDS的作用
聚丙烯酰胺凝膠電泳具有較高分辨率，用它分離、檢測蛋白質混合樣品，主要是根據各蛋白質組分電泳遷移率的不同。這種差異就蛋白質分子本身而言，主要與其所帶電荷的差異以及分子大小不同有關。如果將電荷差異這一因素去除或減小到可以忽略不計的程度，分子在凝膠上遷移率的大小則完全取決于相對分子質量的大小。十二烷基硫酸
Preparation－of－Plasmid－DNA－by－Alkaline－Lysis－with－SDS:－Maxipreparation
實驗概要Plasmid DNA is isolated from large-scale (500 ml) bacterial cultures by treatment with alkali and SDS.主要試劑Buffers and SolutionsAlkaline lysis solu
電泳液中加入SDS的作用
如果你是做測量蛋白質相對分子質量大小的話：聚丙烯酰胺凝膠電泳具有較高分辨率，用它分離、檢測蛋白質混合樣品，主要是根據各蛋白質組分電泳遷移率的不同。這種差異就蛋白質分子本身而言，主要與其所帶電荷的差異以及分子大小不同有關。如果將電荷差異這一因素去除或減小到可以忽略不計的程度，分子在凝膠上遷移率的大小則
2.2.1－酚/SDS法制備植物RNA
酚/SDS法比較適合于從RNA含量較豐富.易提取的植物材料中制備RNA試劑、試劑盒液氮研磨緩沖液TLE 緩沖液平衡酚)氯仿IiCl 溶液 (DEPC 處理）乙酸鈉 (DEPC 處理）無水乙醇DEPC 處理水儀器、耗材Folytron 勻漿器（BrinkmarmPT10 35)實驗步驟一 材料與設備1
SDS－PAGE電泳的操作步驟
1、清洗玻璃板一只手扣緊玻璃板，另一只手蘸點洗衣粉輕輕擦洗。兩面都擦洗過后用自來水沖，再用蒸餾水沖洗干凈后立在筐里晾干。2、灌膠與上樣（1）玻璃板對齊后放入夾中卡緊。然后垂直卡在架子上準備灌膠（操作時要使兩玻璃對齊，以免漏膠）。垂直電泳槽（2） 按前面方法配10%分離膠，加入TEMED后立即搖勻即可
如何配制sdspage梯度膠
操作步驟（ 1 ）在制板支架上置一專用有機玻璃槽，將固定好的玻璃板下部插入槽內，中部用兩個文具夾固定在支架豎板上。在槽內倒入已充分溶化的瓊脂，冷凝后封閉膠腔底部。（ 2 ）用直徑約 2mm 的聚乙烯管連接好梯度混合器、恒流泵、凝膠模。（ 3 ） 30% 膠液的配制取 50ml 燒杯一只，加凝膠貯液①
SDS－PAGE電泳的操作步驟
1、清洗玻璃板一只手扣緊玻璃板，另一只手蘸點洗衣粉輕輕擦洗。兩面都擦洗過后用自來水沖，再用蒸餾水沖洗干凈后立在筐里晾干。2、灌膠與上樣（1）玻璃板對齊后放入夾中卡緊。然后垂直卡在架子上準備灌膠（操作時要使兩玻璃對齊，以免漏膠）。垂直電泳槽（2） 按前面方法配10%分離膠，加入TEMED后立即搖勻即可
SDS裂解法提取質粒DNA實驗
實驗方法原理 這種溫和的方法（改進自 Godson and Vapnek 1973 ) 在處理大質粒（>15 kb ) 時較堿裂解法和煮沸法好。但溫和的代價是產量低：有相當數量的質粒 DNA 混于細胞渣滓中，在操作的早期步驟中丟失。試劑、試劑盒 抗生素氯霉素氯仿EDTA乙醇NaClSDSSTETri
SDSPAGE膠的干燥方法
凝膠干燥時遇到的主要問題是凝膠的變形和破裂。將凝膠放在Whatman 3MM濾紙上可防止干燥凝膠變形，但凝膠是否破裂取決于凝膠的厚度和干燥器的質量，因此，應盡量使用薄膠并使凝膠干燥器處于良好狀態，使其真空壓力波動極少。(1)試劑與配制：固定液：冰醋酸:甲醇:水（10:20:70）(2)電泳后的凝膠用
SDS－PAGE電泳的免疫反應
1、將膜用TBS從下向上浸濕后，移至含有封閉液的平皿中，室溫下脫色搖床上搖動封閉1h。 2、將一抗用TBST稀釋至適當濃度（在1.5ml離心管中）；撕下適當大小的一塊兒保鮮膜鋪于實驗臺面上，四角用水浸濕以使保鮮膜保持平整；將抗體溶液加到保鮮膜上；從封閉液中取出膜，用濾紙吸去殘留液后，將膜蛋白面