關于單克隆抗體技術的細胞篩選的介紹
雜交瘤細胞在融合后2周左右即可篩選，即把分泌所需抗體的雜交瘤孔從眾多的孔中選出來，通常也稱為抗體檢測。抗體檢測的方法很多，通常根據所研究的抗原和 實驗室的條件而定。但作為雜交瘤篩選的抗體檢測方法必須具有快速、準備、簡便，便于一次處理大量樣品等特點。因為往往有幾百個樣品需要在短短幾個小時就報 告結果，以便決定雜交瘤細胞的取舍。所以選用抗體檢測方法的原則是快速、敏感、特異、可靠、花費小和節省人力。一般說來，在融合之前就必須建立好抗體檢測 方法，并克服可能存在的問題。另一個重要問題是抗體檢測方法所需要的“動力學范圍”，即檢出背景以上的最強與最弱信號之比，依所用的檢測抗原是否純凈而 定。如雜交瘤抗體是針對純化的蛋白質抗原的，100%的抗原參與反應，一個陽性/陰性判別系統就夠了。另一方面，如果雜交瘤抗體是針對細胞表面微量的蛋白 抗原，檢測系統可能需要能測出微弱信號，則動力學范圍至少應為10：1，最好為100：1。另外，檢測方法的選擇還......閱讀全文
關于單克隆抗體技術的細胞篩選的介紹
雜交瘤細胞在融合后2周左右即可篩選，即把分泌所需抗體的雜交瘤孔從眾多的孔中選出來，通常也稱為抗體檢測。抗體檢測的方法很多，通常根據所研究的抗原和 實驗室的條件而定。但作為雜交瘤篩選的抗體檢測方法必須具有快速、準備、簡便，便于一次處理大量樣品等特點。因為往往有幾百個樣品需要在短短幾個小時就報 告結
單克隆抗體雜交瘤細胞篩選技術介紹
1986年，美國FDA批準了第一個單克隆抗體藥物上市，距今已快30年。目前，全世界共有超過40個治療用抗體藥物被批準上市，每年實現超過600億美元的銷售額。在國際及國內形成了抗體藥物開發熱潮。巨大的市場前景和現存的技術問題及壁壘并存的現實不可避免地引發抗體藥物新一輪技術革命。而其結果又將毫無疑問地改
單克隆抗體技術的方法細胞篩選操作過程
雜交瘤細胞在融合后2周左右即可篩選,即把分泌所需抗體的雜交瘤孔從眾多的孔中選出來,通常也稱為抗體檢測。抗體檢測的方法很多,通常根據所研究的抗原和 實驗室的條件而定。但作為雜交瘤篩選的抗體檢測方法必須具有快速、準備、簡便,便于一次處理大量樣品等特點。因為往往有幾百個樣品需要在短短幾個小時就報 告結果,
關于單克隆抗體技術的細胞融合的介紹
首先制備細胞培養基、 氨基喋呤（A）貯存液、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷（HT）貯存液等各種細胞生長所需的營養物質。然后制備髓瘤細胞和脾淋巴細胞，之后進行細胞融合。在細胞融合后選擇性培養過程中，由于大量骨髓瘤細胞和脾細胞相繼死亡，此時單個或少數分散的雜交瘤細胞多半不易存活，通常必須加入其他活細胞使之繁
關于轉染細胞篩選的介紹
1、確定抗生素作用的最佳濃度： 不同的細胞株對各種抗生素有不同的敏感性，因此在篩選前要做預試驗，確定抗生素對所選擇細胞的最低作用濃度。 1) 提前24 小時在96 孔板或24 孔板中接種細胞8 孔，接種量以第二天長成25%單層為宜，置CO2 孵箱中37℃培養過夜。 2) 將培養液換成含抗生
關于單克隆抗體技術的介紹
一種免疫學技術，將產生抗體的單個B淋巴細胞同骨髓腫瘤細胞進行細胞融合， 獲得既能產生抗體， 又能無限增殖的雜種細胞，并以此生產抗體。是僅由一種類型的細胞制造出來的抗體，對應于多克隆抗體、多株抗體——由多種類型的細胞制造出來的一種抗體。 單克隆抗體技術(monoclonal antibody t
單克隆抗體技術：細胞的選擇
脾細胞?1．材料?(1) 免疫過的血清抗體滴度高的Balb/c鼠。?(2) 1640培養液?(3) 2.5％FCS－1640營養液?2．操作方法?(1) 拉頸或用CO2處死小白鼠。?(2) 將小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在無菌條件下取脾。?(3) 把脾放入5ml含有2.5％FCS的
關于單克隆抗體技術的重要意義介紹
單克隆抗體（monoclonal antibody，Mab）技術是20世紀免疫學技術的一項里程碑式突破。該技術將免疫小鼠的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合生成雜交瘤細胞，這種雜交瘤細胞核內含有雙親細胞的染色體，繼承了親代細胞的特征。它既具有瘤細胞在體外培養中迅速增殖的能力，又具備免疫脾細胞合成和分
單克隆抗體技術的介紹
單克隆抗體技術(monoclonal antibody technique) 1975年英國科學家Milstein和Kohler所發明，并獲得1984年諾貝爾醫學獎。 1984 德國人G. J. F.Kohler、阿根廷人C. Milstein[3]和丹麥科學家N. K. Jerne由于發展了單
如何篩選動物單克隆抗體
單克隆抗體制備過程中,總共有兩次篩選,第一次篩選出雜交瘤細胞,第二次篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞,兩次篩選的原理和方法是不相同的.第一次篩選的原理與方法：細胞融合后,雜交瘤細胞的選擇性培養是第一次篩選的關鍵.普遍采用的HAT選擇性培養液是在普通的動物細胞培養液中加入次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A
如何篩選動物單克隆抗體
單克隆抗體制備過程中,總共有兩次篩選,第一次篩選出雜交瘤細胞,第二次篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞,兩次篩選的原理和方法是不相同的.第一次篩選的原理與方法：細胞融合后,雜交瘤細胞的選擇性培養是第一次篩選的關鍵.普遍采用的HAT選擇性培養液是在普通的動物細胞培養液中加入次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A
關于單克隆抗體細胞融合的過程介紹
融合的方法很多，常用的有轉動法和離心法。融合時脾細胞和骨髓瘤細胞的比例為1:1至10:1不等。3:1或5:1最為常用。 1．試劑與材料 (1)供融合用的脾細胞及骨髓瘤細胞。 (2)1640培養液100ml。 (3)完全1640液100ml。 (4)2.5%FCS－1640液50ml。
關于單克隆抗體制備脾細胞的選擇介紹
1．材料 (1)免疫過的血清抗體滴度高的Balb/c鼠。 單克隆抗體制備流程 單克隆抗體制備流程 (2)1640培養液(3)2.5%FCS－1640營養液 2．操作方法 (1)拉頸或用CO2處死小白鼠。 (2)將小鼠放于70%酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在無菌條件下取脾。 (
關于高通量篩選系統的技術指標介紹
高通量篩選系統是一種用于生物學領域的分析儀器，于2010年9月21日啟用。 一、高通量篩選系統的技術指標： 1、配備高端品牌的5X（或4X）、10X和20X等至少4組鏡頭； 2、多組自動濾光片套件：10位激發光濾光片，10組二色相濾鏡及發射光濾光片等自動濾光片套件，可進行6個熒光通道的同時
細胞－SELEX(CellSELEX)技術篩選適配體的方法介紹
該方法的主要靶標物質是細胞、細菌或病毒等，操作過程中采用離心、沉淀的方法分離去除未結合適配體，再通過熱解離或酶切作用獲得特異性適配體序列。Liang 等針對感染狂犬病毒的活細胞，應用 Cell-SELEX 經過35 輪重復篩選獲得了 5 條 DNA 適配體。病毒效價測定與實時定量反轉錄 PCR
關于重組子篩選的介紹
根據載體的遺傳特征篩選重組子，如α-互補、抗生素基因等。至今使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的DNA的短區段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的調控序列和前146個氨基酸的編碼信息。在這個編碼區中插入了一個多克隆位點（MCS），它并不破壞讀框，但可使少數幾個氨基酸插入到β -半乳糖苷酶的氨基
關于單克隆抗體制備骨髓瘤細胞的介紹
骨髓瘤細胞能產生并分泌大量的免疫球蛋白，這樣的瘤細胞融合后，可能影響或降低所分泌抗體的滴度，所以必須選育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤細胞。 選擇骨髓瘤細胞的條件： ①該瘤細胞系的來源應與制備脾細胞小鼠為同一品系，以便兩者的組織相容性抗原一致； ②骨髓瘤細胞必須是靜息狀態，不產生γ球蛋白
關于單克隆抗體技術的類型鼠源性抗體的介紹
雜交瘤單克隆抗體制備技術的基本原理是利用聚乙二醇作為細胞融合劑，使免疫的小鼠脾細胞與具有不斷繁殖能力的小鼠骨髓瘤細胞在體外進行融合，在HAT選擇性培養基的作用下，只讓融合成功的雜交瘤細胞生長，經過反復的免疫學檢測篩選和單個細胞培養(克隆化)，最終獲得既能產生所需單克隆抗體，又能不斷繁殖的雜交瘤細
關于釀酒酵母的篩選的介紹
釀酒酵母的無性繁殖方式篩選。對液體培養基培養48h的酵母菌株，在16×40倍顯微鏡鏡檢，篩選出以多端出芽繁殖的菌株。 WL瓊脂培養基篩選釀酒酵母。將分離出來的酵母菌株，接種液體培養基活化24h后接種到WL瓊脂培養基，27℃培養Sd后觀察，篩選出菌落顏色為奶油色（淺黃色）至綠色，表面為球形突起，
關于單克隆抗體的基本介紹
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。 用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群，
關于單克隆抗體的內容介紹
解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識別單一表位特異性的抗體。如果能獲得僅針對單一表位的漿細胞克隆，并使其在體外擴增分泌抗體，就有可能獲得單一表位特異性的抗體。然而，漿細胞在體外的壽命較短，難以培養。為克服這一缺點，Kohler和Milstein將可產生特異性抗體但短壽的B細胞與不產生抗體但
關于單克隆抗體的定義介紹
單克隆抗體是人工制備的雜交瘤細胞生產的，雜交瘤細胞是由一個經抗原激活后的B細胞與一個骨髓瘤細胞融合形成。單克隆抗體優點：純度高，靈敏度高，特異性強，交叉反應少，制備的成本低。缺點：對技術有一定的要求，而且通過抗原的化學處理很容易丟失表位 [1] ?。
單克隆抗體技術：細胞融合
實驗概要本文介紹了單克隆抗體技術——細胞融合實驗的操作流程。實驗原理細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1 000時，呈乳
單克隆抗體技術：細胞融合
實驗概要本文介紹了單克隆抗體技術——細胞融合實驗的操作流程。實驗原理細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1 000時，呈乳
單克隆抗體技術：細胞融合
融合劑?細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。?聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1 000時，呈乳白色蠟狀固體，能溶于水、乙醇及其他許多有機溶劑，對熱穩定，與
單克隆抗體技術：飼養層細胞
在體外的細胞培養中，單個的或數量很少的細胞不易生存與繁殖，必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖，加入的細胞稱之為飼養細胞（Feeder cell）。在細胞融合和單克隆的選擇過程中，就是在少量的或單個細胞的基礎上使其生長繁殖成群體，因此在這一過程中必須使用飼養細胞。許多種類的動物細胞都可以做飼養細
單克隆抗體技術：細胞融合
實驗概要本文介紹了單克隆抗體技術——細胞融合實驗的操作流程。實驗原理細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1 000時，呈乳
關于細胞轉染的技術介紹
國際上推出了一些陽離子聚合物基因轉染技術，以其適用宿主范圍廣，操作簡便，對細胞毒性小，轉染效率高受到研究者們的青睞。其中樹枝狀聚合物（Dendrimers）和聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的轉染性能最佳，但樹枝狀聚合物的結構不易于進一步改性，且其合成工藝復雜。聚乙烯亞胺是
單細胞技術在藥物篩選中的應用
單細胞的異質性會被組織等高通量細胞樣本的均質化生信數據覆蓋以致難以凸顯，尤其是在臨床診斷中。所以開發應用單細胞技術在發現甚至篩選藥物靶點成為了有力的手段之一。蘇州系統醫學研究所李貴登課題組、加州理工學院的David Baltimore課題組和西雅圖系統醫學研究院的James Heath課題組在綜合性
單克隆抗體技術的臨床應用介紹
疾病診斷 利用單抗進行疾病的診斷目前主要表現在人類疾病和畜禽傳染病的診斷方面，尤其在一些感染性疾病和腫瘤的診斷方面。主要通過鑒定病原體或腫瘤抗原來診斷人是否感染相應疾病。 疾病治療 目前利用單抗對疾病進行治療已取得了很大的成果，主要是將單抗同藥物耦聯，再與病原體或腫瘤的特異抗原結合后發揮作