wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白轉移，所用緩沖液少。電泳現象在確定的條件下，帶電粒子在單位電場強度作用下，單位時間內移動的距離（即遷移率）為常數，是該帶電粒子的物化特征性常數。不同帶電粒子因所帶電荷不同，或雖所帶電荷相同但荷質比不同，在同一電場中電泳，經一定時間后，由于移動距離不同而相互分離。分開的距離與外加電場的電壓與電泳時間成正比。......閱讀全文
轉肽反應需要哪些條件？
底物：轉肽反應需要兩個底物，一個是帶有羧基(-COOH)的多肽鏈，另一個是帶有氨基(-NH2)的多肽鏈。 酶：轉肽反應需要轉肽酶作為催化劑。轉肽酶是一種專門催化轉肽反應的酶，它能夠將一個多肽鏈上的羧基與另一個多肽鏈上的氨基連接起來，形成一個新的肽鍵。 pH值：轉肽反應的最佳pH值通常在7.0
westernblotting轉膜是根據什么原理
western blot中封閉主要是起去除非特異性吸附的作用在western blot轉膜時，PVDF膜在甲醇活化后是帶電的，因而在轉膜時會將蛋白吸附。封閉的目的就是要將PVDF膜上無蛋白的部分空隙用奶粉填滿，以免孵抗體的時候一抗二抗與之結合，產生非特異條帶或者是背景雜亂。所以western blo
轉膜后為什么要電泳
、轉膜后的mark非常歪的原因是膠、膜以及濾紙（三明治組合）之間氣泡沒趕干凈導致的。2、而條帶特別不清晰就得看你的轉膜時間了：轉膜時間不夠會導致膠上的蛋白包括mark沒有完全轉到膜上，轉膜時間長了會導致膠上的蛋白包括mark已經穿過膜到濾紙上了。建議電泳后膠進行考馬斯亮藍染色、轉膜后的膜進行麗春紅染
半干轉膜儀如何使用
以WEALTEC的YRDIMES半干轉膜儀為例，首先確認是轉蛋白質還是核酸。蛋白質可參考Bjerrum and Schafer-Nielsen或Towbin或Dunn緩沖液系統配置緩沖液，電泳后將凝膠浸入緩沖液平衡5分鐘，將轉印膜和濾紙裁切并浸入緩沖液，合上上蓋，按說明書墊上BP-C紙，普通轉印1或
轉膜實驗原理與操作步驟
轉膜是把DNA從瓊脂糖凝膠中轉移到固相支持物(一般是尼龍膜)上固定，是進行各種后續研究(如 RFLP 分析，陽性克隆的篩選驗證等所有涉及分子雜交的研究)的前提。 實驗目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步驟 實驗原理： 1. ?轉膜的方式： 向上的毛細管
Western－不同轉膜方法的取舍
轉膜:小分子量的蛋白半干轉效果比較好，大分子量（100KD）以上建議濕轉。具體轉膜條件需要多摸一下。30-80KD半干轉恒流1mA/cm2，1-1.5h 都可以，大分子濕轉100V，2.5h以上應該可以，轉完膜麗春紅染出的條帶比較清楚的話，一般都能有結果。濕轉，Buffer一定要預冷，最好提前一天配
RNA的電泳，轉膜和雜交
實驗原理：基本同 Southern Blotting，但因RNA 是單鏈分子，必須消除局部區域形成的二級結構，在電場中泳動的距離才能反映它本身的大小，因而需使用變性膠進行電泳；另應特別注意防止RNA 的降解。實驗材料：經檢測質量好的 RNA實驗步驟：1．制膠：Agarose 1%-1.2% ， 1×
western－blot轉膜－膜上有白點點怎么回事
封閉的時候才出現的白點，是不是奶粉沒有完全溶解啊。重新溶解下奶粉，然后用0.45或者0.21um的濾膜過濾一下，看情形能不能好轉。另外還得根據結果來看，如果白點最后顯影都變成黑點，奶粉沒有溶解的可能性就比較大了。
wb蛋白分子量60左右轉膜多久
濕轉的話，60KDa的蛋白轉膜60分鐘~90分鐘一般就足夠了轉膜完成后可以將SDS-PAGE膠片去做一下考染，看看是否有未完全轉膜的條帶。如果有的話，可以下次適當延長專膜時間。
wb蛋白分子量60左右轉膜多久
濕轉的話，60KDa的蛋白轉膜60分鐘~90分鐘一般就足夠了轉膜完成后可以將SDS-PAGE膠片去做一下考染，看看是否有未完全轉膜的條帶。如果有的話，可以下次適當延長專膜時間。
wb蛋白分子量60左右轉膜多久
濕轉的話，60KDa的蛋白轉膜60分鐘~90分鐘一般就足夠了轉膜完成后可以將SDS-PAGE膠片去做一下考染，看看是否有未完全轉膜的條帶。如果有的話，可以下次適當延長專膜時間。
轉膜時間太長，小蛋白會不會從膜中穿過
影響因素應該有很多；一、首先需確定目的蛋白是否在膠上：跑完電泳可以先考馬斯亮藍染膠，如果在marker的指示下看到了目的蛋白的清晰條帶，基本可以確定蛋白已經在膠上跑開。二、膜的準備：1.根據被轉移的蛋白分子量大小，選擇不同孔徑的pvdf膜。因為隨著膜孔徑的不斷減小，膜對低分子量蛋白的結合就越牢固。通
轉膜時間太長，小蛋白會不會從膜中穿過
影響因素應該有很多；一、首先需確定目的蛋白是否在膠上：跑完電泳可以先考馬斯亮藍染膠，如果在marker的指示下看到了目的蛋白的清晰條帶，基本可以確定蛋白已經在膠上跑開。二、膜的準備：1.根據被轉移的蛋白分子量大小，選擇不同孔徑的pvdf膜。因為隨著膜孔徑的不斷減小，膜對低分子量蛋白的結合就越牢固。通
轉膜時間太長，小蛋白會不會從膜中穿過
影響因素應該有很多；一、首先需確定目的蛋白是否在膠上：跑完電泳可以先考馬斯亮藍染膠，如果在marker的指示下看到了目的蛋白的清晰條帶，基本可以確定蛋白已經在膠上跑開。二、膜的準備：1.根據被轉移的蛋白分子量大小，選擇不同孔徑的pvdf膜。因為隨著膜孔徑的不斷減小，膜對低分子量蛋白的結合就越牢固。通
western－blot－的轉膜緩沖液
目的是為了消除電荷對電泳的影響，western各步驟的緩沖液基本上都是要加的。
western轉膜后marker拖尾原因
western轉膜有時候marker深，有時候淺是很正常的事情因為不同批次轉膜的時候，電壓電流緩沖液溫度等等條件不可能完全保持一致，在各種條件變化的情況下，很容易造成批次間的差異，具體表現就是有時候marker深，有時候淺所以western轉膜有時候marker深，有時候淺是很正常的事情
western－blotting轉膜是根據什么原理
原理：westernblotting轉膜一般采用“濾紙-凝膠-膜-濾紙”夾心法，凝膠靠近負極，膜靠近正極。因為蛋白上結合有sds，因而帶負電，在電流的作用下會從負極向正極運動，從而轉移到膜上。
關于Southern雜交的轉膜的介紹
即將凝膠中的單鏈DNA片段轉移到固相支持物上。而此過程最重要的是保持各DNA片段的相對位置不變。DNA是沿與凝膠平面垂直的方向移出并轉移到膜上，因此，凝膠中的DNA片段雖然在堿變性過程已經變性成單鏈并已斷裂，轉移后各個DNA片段在膜上的相對位置與在凝膠中的相對位置仍然一樣，故而稱為印跡（blot
western－blotting轉膜是根據什么原理
原理：westernblotting轉膜一般采用“濾紙-凝膠-膜-濾紙”夾心法，凝膠靠近負極，膜靠近正極。因為蛋白上結合有sds，因而帶負電，在電流的作用下會從負極向正極運動，從而轉移到膜上。
RNA樣品的轉膜（虹吸印跡法）
實驗概要本實驗介紹了RNA樣品的轉膜（即虹吸印跡法）的操作步驟等。主要試劑1. 20×SSC：175.3g NaCl，88.2g檸檬酸鈉，DEPC水定容1000ml ???????????????????? NaOH調pH至7.0，高壓后備用。 2. 6×SSC：用20×SSC稀釋。主要設備1. 紫
PVDF膜活化處理完后不轉膜能保存嗎
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride）是蛋白質印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔徑有大有小，隨著膜孔徑的不斷減小，膜對低分子量的蛋白結合就越牢固。大于20000的蛋白選用0.45um的膜，小于20000的蛋白選用0.2um的膜。PVDF膜在
PVDF膜活化處理完后不轉膜能保存嗎
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride）是蛋白質印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔徑有大有小，隨著膜孔徑的不斷減小，膜對低分子量的蛋白結合就越牢固。大于20000的蛋白選用0.45um的膜，小于20000的蛋白選用0.2um的膜。PVDF膜在
Western－Blot轉膜時膠和膜放反了有影響嗎
那蛋白就都轉到濾紙上去了，沒有到膜上。你找點麗春紅染染膜看看，估計膜上什么也沒有哇。不用往下做了。當然，如果你在膜上看到預染Marker了，還是值得再去嘗試一下的。
請教western轉膜封閉后怎么辦
western blot中封閉主要是起去除非特異性吸附的作用在western blot轉膜時，PVDF膜在甲醇活化后是帶電的，因而在轉膜時會將蛋白吸附。封閉的目的就是要將PVDF膜上無蛋白的部分空隙用奶粉填滿，以免孵抗體的時候一抗二抗與之結合，產生非特異條帶或者是背景雜亂。所以western blo
170KD蛋白轉膜用多大電壓
電流通過導體（或用電器）的時候，會受到一定的阻力，但在電壓的作用下，電流能夠克服這種阻力順利通過導體（或用電器），但遺憾的是，流過串聯電阻（或用電器）后，電位（電勢）再也沒有以前那么高了，它的電位（電勢）下降了。而且電阻越大，它兩端電位（電勢）的變化就越大。所以，把電流流過電阻（或用電器）時，在電阻
western－blot轉膜是怎么做的
蛋白免疫印跡( Western Blot) 是將電泳分離后的細胞或組織總蛋白質從凝膠轉移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。目前主流方法是電轉印法，分為濕式轉印與半干轉印。濕式轉印是將膠塊垂直方向夾在濕式轉印槽內進行電轉印。以E-Blotter濕轉槽為例，一般使用垂直電泳槽的緩沖液槽體，將內部垂直電
wb中pvdf膜活化時間長有影響嗎
有影響。用甲醇活化不能超過15秒，時間太久會對pvdf膜造成損傷。pvdf膜用甲醇泡的目的是為了活化pvdf膜上面的正電基團，使它更容易跟帶負電的蛋白質結合，做小分子的蛋白轉移時多加甲醇也是這個目的。
wb中pvdf膜活化時間長有影響嗎
有影響。用甲醇活化不能超過15秒，時間太久會對pvdf膜造成損傷。pvdf膜用甲醇泡的目的是為了活化pvdf膜上面的正電基團，使它更容易跟帶負電的蛋白質結合，做小分子的蛋白轉移時多加甲醇也是這個目的。
wb中pvdf膜活化時間長有影響嗎
有影響。用甲醇活化不能超過15秒，時間太久會對pvdf膜造成損傷。pvdf膜用甲醇泡的目的是為了活化pvdf膜上面的正電基團，使它更容易跟帶負電的蛋白質結合，做小分子的蛋白轉移時多加甲醇也是這個目的。
western轉膜之后，封閉之前要不要洗
westernblot中封閉主要是起去除非特異性吸附的作用在westernblot轉膜時，pvdf膜在甲醇活化后是帶電的，因而在轉膜時會將蛋白吸附。封閉的目的就是要將pvdf膜上無蛋白的部分空隙用奶粉填滿，以免孵抗體的時候一抗二抗與之結合，產生非特異條帶或者是背景雜亂。所以westernblot中封