PCR實驗操作程序
1. 在無菌的0.5ml或0.2ml離心管中按下列操作程序加樣： 反應物 加樣順序 體積(μl) 終濃度 去離子水 1 29.4 10×Buffer B 2 5 1× 4×dNTP混合物 3 5 各200μmol/L MgCl2 4 3 1.5mmol/L 有義引物 5 2.6 0.25μmol/L 反義引物 6 2.6 0.25μmol/L 模板 7 2 0.1μg TaqDNA聚合酶 8 0.4 1unit 2. 用微量可調加樣器和一次性Tip向每一管中加50μl礦物油。每加一管換一次Tip。 3. 振蕩每只管，然后短暫離心。 4. 將管放到預熱的熱循環中，按下列程序開始循環： 預變性 94℃ 4分鐘 1次 變性 94℃ 1分鐘 退火 37-65℃ 1分鐘 延伸 72℃ 1分鐘 循環30次 終延伸 72℃ 7分鐘 1次 保存 4℃ 5. 將PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳，分析結果。電......閱讀全文
PCR實驗操作程序
1. 在無菌的0.5ml或0.2ml離心管中按下列操作程序加樣：反應物 加樣順序 體積(μl) 終濃度去離子水 1 29.410×Buffer B 2 5 1×4×dNTP混合物 3 5 各200μmol/L?MgCl2 4 3 1.5mmol/L有義引物 5 2.6 0.25μmol/L反義引物
PCR實驗操作程序
1. 在無菌的0.5ml或0.2ml離心管中按下列操作程序加樣： 反應物 加樣順序 體積(μl) 終濃度 去離子水 1 29.4 10×Buffer B 2 5 1× 4×dNTP混合物 3 5 各200μmol/L MgCl2 4 3 1.5mmol/L 有義引物 5 2.6 0.
PCR實驗操作程序
1. 在無菌的0.5ml或0.2ml離心管中按下列操作程序加樣：反應物 加樣順序 體積(μl) 終濃度去離子水 1 29.410×Buffer B 2 5 1×4×dNTP混合物 3 5 各200μmol/L MgCl2 4 3 1.5mmol/L有義引物 5 2.6 0.25μmol/L反義引物
PCR技術操作程序與優化方法
作者：李愛麗等 來源：生物技術通報典型的PCR操作在此處僅列出—般PCR操作過程，具體影響因素的優化將在本章第二節討論，每一個具體操作前都需進行必要的優化。（一） 試劑（1）引物根據待擴增DNA不同，引物亦不同，引物的設計見本章第三節。（2）耐熱DNA聚合酶：此酶是從耐熱細菌中分離出來的，能耐受高溫
典型PCR操作程序與優化方法
一、 試劑(1)引物根據待擴增DNA不同，引物亦不同，引物的設計見(2)耐熱DNA聚合酶：此酶是從耐熱細菌中分離出來的，能耐受高溫(93—100c)，不同耐熱DNA聚合酶的特性詳見本章第4節。 Perkin—E1mer—cetus公司、N、F、Bio1ab、PharMacia公司、國內華美公司、復旦
典型PCR操作程序與優化方法
一、 試劑(1)引物根據待擴增DNA不同，引物亦不同，引物的設計見http://ask.bbioo.com/special/experiment/PrimerDesign.htm。(2)耐熱DNA聚合酶：此酶是從耐熱細菌中分離出來的，能耐受高溫(93—100c)，不同耐熱DNA聚合酶的特性詳見本章第
逆轉錄RTPCR實驗操作程序及注意事項
實驗操作過程中必須帶口罩、手套，實驗室盡量避免人員干擾。RT-PCR的試劑都應在冰上融化，等完全融化后再取；用過的試劑應瞬間離心后放回-20℃保存；試劑應按順序加，加完后再混勻離心。加入試劑前在管壁上做好標記，避免加錯試劑；加過一種試劑后將EP管蓋子的方向改變，避免重復和漏加；不同試劑和樣品要更換吸
PCR室間質量控制操作程序
1．目的：室間質評（EQA）是實驗室質量控制體系中重要部分，是保證患者檢驗結果和其報告的準確性和可靠性，以及各實驗室間結果的可比性的重要手段。2．適用范圍：衛生部或省臨檢中心下發的PCR室間質控血清檢測。3．負責人：??????? 操作人：4．程序：4.1質控標本的接收和驗收：收到質控血清后由相關人
實時熒光定量PCR擴增和結果分析的標準操作程序
1 目的:保證擴增及結果分析的標準化、規范化。?2 該SOP變動程序:本文件的變動，可由任一使用該文件的工作人員提出，報經室技術負責人，由季度組長會議決定。如通過則公布實行。?3 使用范圍:使用GeneAmp 5700型擴增儀的實時熒光定量PCR實驗室。 ? ??4 標準程序4.1 核酸擴增標準程序
ELISA試劑盒實驗操作程序總結
實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合elisa試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋
植物培養實驗的操作程序以及選用實驗儀器
培養基配制的操作程序：1、加瓊脂和無離子水至定容量的70%左右，加熱使瓊脂溶解；2、瓊脂溶解后，加入培養基母液、激素、糖等，稍加熱使糖溶解；3、糖溶解，加無離子水至定容量；4、充分攪拌后，測pH值至要求值；5、培養基分裝入瓶后滅菌。組培玻璃器皿的選擇和清洗1、玻璃器皿的選擇（1）試管—適合于初代培養
實時－PCR－實驗
試劑、試劑盒 PCR Super Mix-UDGROX 染料蒸餾水反向引物正向引物儀器、耗材 ABIPRISM7700 型號系列檢測系統實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑以 50ul 反應體系為例。Platinum Quantitative PCR Super Mix-UDG(Invitro
實時－PCR－實驗
本方法運用 PlatinumQuantitativePCRSuperMix-UDG。進行實時 PCR 時，應該有一套設備可以檢測每次 PCR 循環時釋放的熒光信號。并且還能檢測 FAM 和 JOE 激發后分別釋放出的 520mn 和 550nm 的發射波。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作
PCR實驗操作
PCR實驗操作???? PCR是極為重要的DNA增殖技術，應用層面非常廣，其中包括了核酸探針的制備。如果一段DNA已經被次選殖至載體上，要以PCR擴增這段DNA時，可根據質體multiple cloning sites兩邊的序列，選用適當的核酸引子 （universal primers） 進行擴增反
pcr實驗步驟
一、 樣品RNA的抽提1. 取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。2. 兩相分離 每1 ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12 000 rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以
實時－PCR－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PCR Super Mix-UDG ROX 染料 蒸餾水 反向引物 正向引物 儀器
免疫PCR實驗
實驗方法原理 免疫PCR主要由兩個部分組成，第一部分的免疫反應類似于普通的酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的測定過程；第二部分即通常的PCR檢測，抗原分子的量最終由PCR產物的多少來反映。第一步中，首先用待測抗原（如牛血清白蛋白（ESA））包被微滴板孔，再加入相應的特異抗體，于是抗體就與固相上的抗原結
雙重PCR實驗
隨著轉基因農作物的大量種植，其安全性問題也日益受到人們的重視。2002年我國要求對轉基因農作物實行標簽管理。抗草甘膦（glyphosate）大豆 （商品名，roundup ready soybean）是在傳統大豆株Variety A5403中轉入外源基因CAMV-35S啟動子、抗草甘膦基因CP4-E
PCR實驗技術
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? PCR實驗技術?PCR（聚合酶鏈式反應）?【原理】?PCR（polymerase?chain?reaction）用于在體外將微量的目標DNA大量擴增，以便進行分析。反應體系：①樣品DNA；②引物（primer），是人工合成的一對寡核苷酸
降落PCR實驗
實驗材料 基因樣品儀器、耗材 PCR實驗步驟 1. ?反應體積為50 μl。2. ?人CD137胞膜外區基因的PCR擴增體系：CD137-pCDNA3質粒4 μl，P1，P2各0.5 μmol/L，MgCl2 2 mmol/L，dNTP 0.4 mmol/L，Taq 5 U。3. ?hIgG1Fc片
誘變－PCR－實驗
試劑、試劑盒?氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Native Taq 或 AmpliTaq DNA 聚合酶高純度的脫氧核苷 5'-三磷酸dNTP 混合物模板 DNA引物瓊脂糖凝膠用溴化乙錠染色儀器、
定量PCR實驗
實驗材料?限制性內切核酸酶反轉錄酶熱穩定 DNA 聚合酶dCTP靶核酸試劑、試劑盒?擴增緩沖液dNTP 貯存液胎盤 RNase 抑制劑儀器、耗材?瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠屏蔽型槍頭離心管正向排液式移液器PCR 儀實驗步驟?一、材料1. 緩沖液與溶液10X 擴增緩沖液4 種 dNTP 貯存液（20
誘變－PCR－實驗
誘變 PCR 最大的優勢是以一種沒有偏好的方式引入了各種類型的突變，而不是獲得高水平的單一的擴增。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Nati
菌落PCR實驗
菌落PCR標簽： 菌落 PCR菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。
誘變－PCR－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 氯仿 異戊醇 乙醇 礦物油或者一個蠟珠 3mol L NaOAc 5 mmol L MnCl2 突變 PCR 緩沖液
PCR實驗操作
PCR是極為重要的DNA增殖技術，應用層面非常廣，其中包括了核酸探針的制備。如果一段DNA已經被次選殖至載體上，要以PCR擴增這段DNA時，可根據質體multiple cloning sites兩邊的序列，選用適當的核酸引子 （universal primers） 進行擴增反應；比較常用的引子包括S
實驗室儀器氮吹儀操作程序
1、將氮吹儀提升到最高位置,并鎖緊。 2、將樣品試管放置到樣品定位架上,用樣品定位架彈簧固定試管,試管底部處于支撐托盤上,記錄樣品所放位置。如果支撐托盤過低,則擰松支撐托盤中心環上的兩個定位螺釘。上升支撐托盤,直到試管底部位于托盤上,距定位架不低于15mm。調整支撐托盤,使狹縫對準試管。再次擰
定量PCR實驗技術－QPCR
Quantitative PCRJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwes
反向PCR－（inversePCR）實驗步驟
inverse-PCR是克隆插入片段側翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假陽性太多，而Inverse-PCR一般只要有特異條帶，基本上就是目的片段。基本步驟如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位點側翼DNA序列非常有效的方法。a. 選擇合適
反向PCR－（inversePCR）實驗步驟
inverse-PCR是克隆插入片段側翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假陽性太多，而Inverse-PCR一般只要有特異條帶，基本上就是目的片段。基本步驟如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位點側翼DNA序列非常有效的方法。a. 選擇合適