RNA和DNA提取的降解問題
降解問題是RNA制備中常常到的問題。因為在 RNA 提取過程中,樣品儲存不當或裂解效率低等情況都會導致降解。對于 DNA 提取,降解不是一個大問題,因為對于 PCR,DNA 可以被剪切并且工作正常,如果不希望有較多剪切的 DNA,可以使用弱裂解的方法。......閱讀全文
RNA－和－DNA－提取的降解問題
降解問題是RNA制備中常常到的問題。因為在 RNA 提取過程中,樣品儲存不當或裂解效率低等情況都會導致降解。對于 DNA 提取,降解不是一個大問題,因為對于 PCR,DNA 可以被剪切并且工作正常,如果不希望有較多剪切的 DNA,可以使用弱裂解的方法。
RNA－和－DNA－提取：洗脫
DNA 提取方案的還剩余IDE步驟步就是從硅膠中釋放純 DNA 或 RNA。對于 DNA 制備,通常使用 pH 值為 8-9 的 10 mM Tris。DNA 在弱堿性 pH 值下更穩定,在緩沖液中溶解得更快。即使對于 DNA 顆粒也是如此。水的 pH 值往往較低,低至 4-5,并且高分子量 DNA
DNA和RNA提取原理
TRIzol試劑有多組分分離作用,與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚／SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特點是可同時分離一個樣品的RNA\DNA\蛋白質．TRIzol使樣品勻漿化，細胞裂解，溶解細胞內含物，同時因含有RNase抑制劑可保持RNA的完整性。在加入氯仿離心后，溶液分為水相和有機相，R
RNA提取時RNA降解原因
1 ) 新鮮細胞： 裂解液的量不足，使得裂解不充分。 2 ) 新鮮組織： 某些含有內源性核酸酶的樣品，很難避免RNA酶的降解，建議采用的方法為在液氮條件下將組織研碎，并且，勻漿時采用更多的裂解液。 3 ) 冷凍樣品： 樣品取材后應該迅速置于液氮中冷凍存放，然后轉移到-70℃冰箱存
真菌DNA和RNA提取方法
真菌DNA和RNA提取方法一、真菌DNA的提取(方法一)實驗試劑(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1％SDS(2)3M NaAc(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA(4)酚(p
真菌的DNA和RNA提取方法
一、真菌DNA的提取(方法一)1.實驗試劑(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1％SDS(2)3M NaAc(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA(4)酚(pH8.0):氯仿:異戊
真菌的DNA和RNA提取方法
一、真菌DNA的提取(方法一)1.實驗試劑(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1％SDS(2)3M NaAc(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA(4)酚(pH8.0):氯仿:異戊
真菌的DNA和RNA提取方法
搞真菌基因功能研究的不可避免的總要涉及到DNA和RNA提取，由于真菌中有較多的多糖成分影響到所提DNA和RNA的質量和后續的分析。因此一個高質量的、實惠的提取方法是我們的優先選擇，在此分享一下我一直在用的提取方法，供大家參考。真菌DNA的提取（方法一）1.取真菌菌絲0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉2
真菌的DNA和RNA提取方法
搞真菌基因功能研究的不可避免的總要涉及到DNA和RNA提取，由于真菌中有較多的多糖成分影響到所提DNA和RNA的質量和后續的分析。因此一個高質量的、實惠的提取方法是我們的優先選擇，在此分享一下我一直在用的提取方法，供大家參考。真菌DNA的提取（方法一）1.取真菌菌絲0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉2
RNA和DNA提取產量低的原因
如果您遇到的 DNA/RNA 產量低于您對樣品的預期,則需要考慮許多因素。通常,這是一個裂解問題。不完全裂解是產量低的主要原因。它也可能是由不正確的綁定條件引起的。確保使用新鮮的優質乙醇(100% 200 標準)稀釋緩沖液或添加到結合的步驟。劣質乙醇或舊庫存可能已經吸收了水分,并且濃度不正確。如果洗
核酸提取——RNA提取與DNA的提取
核酸分為兩大類：一類為核糖核酸（RNA），另一類為脫氧核糖核酸（DNA）。核酸的分子量極大，從數萬到億萬。核酸是兩性化合物，在一定的等電點溶于水，其水溶液呈酸性，不溶于乙醇等有機溶劑。細胞內的核酸常和蛋白質結合成核蛋白。核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白在不同濃度的電解質溶液中 的溶解度有顯著區別，在一定濃
核酸提取——RNA提取與DNA的提取
核酸分為兩大類：一類為核糖核酸（RNA），另一類為脫氧核糖核酸（DNA）。核酸的分子量極大，從數萬到億萬。核酸是兩性化合物，在一定的等電點溶于水，其水溶液呈酸性，不溶于乙醇等有機溶劑。細胞內的核酸常和蛋白質結合成核蛋白。核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白在不同濃度的電解質溶液中 的溶解度有顯著區別，在一定濃
RNA－和－DNA－提取的純度低的原因
如果提取的 DNA 被蛋白質污染(低 260/280),那么您可能開始時樣品過多,而蛋白質沒有完全去除或溶解。如果 DNA 的 260/230 比率不佳,則問題通常是結合或洗滌緩沖液中的鹽分。確保使用最高質量的乙醇來制備洗滌緩沖液,如果問題仍然存在,請再次洗滌色譜柱。與其他樣品相比,一些樣品含有更多
DNA提取方法洗滌－DNA（或－RNA）
當裂解物通過硅膠膜進行離心分離,現在所提取的 DNA 或 RNA 應該與柱子結合,雜質、細胞蛋白和多糖應該已經通過了。?但是,膜仍然被殘留的細胞蛋白質和鹽弄臟。如果樣品來自植物,仍然會有多糖,也許一些色素留在膜上,或者如果樣品是血液,膜可能會被染成棕色或黃色。洗滌步驟用于去除這些雜質。通常有兩次洗滌
RNA提取心得（組織RNA提取和培養細胞的RNA提取）
一.組織RNA提取 1.最好新鮮組織，這樣RNA提取的效果比較好，這是肯定的。 2. 如果不是新鮮的（最好在半年之內，-80℃或者液氮中凍存的）組織，注意不要反復凍融，從冰凍狀態拿到0-4℃，注意不要拿到常溫，待組織解凍后，用 DEPC泡過的剪刀剪一小塊組織，稱重后，放到預冷的勻漿器中，然后
福爾馬林：保存標本－幫助DNA和RNA的提取
在歷史上人們使用了各種固定液（各種濃度的乙醇和福爾馬林，目前公認的固定液是10%的中性福爾馬林溶液）。馬爾福林基本的固定能力是通過蛋白質交聯，從而使固定物質更加牢固。福爾馬林還可以作為適合基因組研究的培養基，比如DNA和RNA的提取研究。 DNA和RNA的恢復，對于許多科學領域和醫學專業都非常
生物薄膜DNA、RNA提取要點
?早前的文章我們討論過了生物薄膜（biofilm）樣品的基本特性以及影響樣品制備和處理方法的因素。今天我們與你分享提取生物薄膜樣品DNA或RNA的幾個要點。下面列是我們處理了大量各種類型生物薄膜和微生物墊（biomats）總結出來的，以及與我們聯合共同開發PowerBiofilm Kit的科學家的經
提取的DNA中含有蛋白質和RNA污染
提取的時候飽和酚，氯仿需要定量，這些可以去蛋白。去除RNA污染，RNA酶活性，定量。凝膠電泳，試劑最好是即用型的，因為有些東西放久了會長菌。然后是染料的熱穩定性和靈敏度。
RNA提取得率低問題
該組織或者細胞中RNA含量偏低：不同細胞和組織中RNA的豐度不同，如肝臟，胰腺，心臟等是高豐度組織(總RNA含量2-4μg/mg)，腦，胚胎，腎臟，肺，胸腺，卵巢等是中豐度組織(總RNA含量0.05-2μg/mg)，膀胱，骨，脂肪等是低豐度組織(總RNA含量
RNA降解
新鮮細胞：如果試劑沒有問題，且外源性污染也可以排除，那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如? 果將裂解液直接加入培養皿中裂解細胞，一定要使裂解液能覆蓋住細胞。 2. 新鮮組織：某些富含內源核酸酶的樣品(如肝臟，胸腺等)，即使使用電動勻漿器勻漿也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是：在液氮條件下將組織
如何說明DNA提取中有RNA污染
測OD的方法是測不出RNA污染的,因為RNA的260/280的值和DNA近似.電泳檢測的話,主要是看RNA的含量.換而言之,實際上最相關的是你提取的時候的組織的生長狀況.一般來說,如果是分生組織等提取的DNA,會有較大的RNA污染.這時候你做電泳可以明確看到RNA的條帶,而且有時候會比DNA帶更為明
如何說明DNA提取中有RNA污染
測OD的方法是測不出RNA污染的,因為RNA的260/280的值和DNA近似.電泳檢測的話,主要是看RNA的含量.換而言之,實際上最相關的是你提取的時候的組織的生長狀況.一般來說,如果是分生組織等提取的DNA,會有較大的RNA污染.這時候你做電泳可以明確看到RNA的條帶,而且有時候會比DNA帶更為明
提取RNA時如何去除DNA的污染
提取RNA時如何去除DNA的污染的方法：注意實驗室的標準化問題，注意污染的存在，同時嚴格按照說明書上的操作應該沒有問題。發現DNA污染，用DNAse I 消化1小時，37度離心取上清的時候，一定要小心不要取到中間的膜和下面的液體。直接加NaOH溶液與提取液混合攪拌,然后離心就可以了.因為RNA可溶于
如何檢測、評價提取的DNA、RNA質量
4.如何檢測、評價提取的DNA、RNA質量，計算提取的DNA、RNA濃度：一般通過OD260/OD280來判斷他們的含量，純DNA的比值一般在1.8，大于1.8，小于2時可能有RNA污染，在1.9到2.0時RNA純度高，小于1.8時可能有蛋白質污染，大于2.0時可能在提取過程中的化學物質殘留。提取原
總RNA提取常見問題分析
Q：RNA降解? ?A：1. 新鮮細胞：如果試劑沒有問題，且外源性污染也可以排除，那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如??果將裂解液直接加入培養皿中裂解細胞，一定要使裂解液能覆蓋住細胞。?2. 新鮮組織：某些富含內源核酸酶的樣品(如肝臟，胸腺等)，即使使用電動勻漿器勻漿也不能避免RNA的降解。更可
多位專家指導：如何提取和研究血液DNA，RNA與蛋白
血液是唯一與所有器官都有接觸的組織，攜帶著有關機體的大量寶貴信息。在理論上，檢測血液攜帶的 DNA、RNA、囊泡和細胞殘骸可以幫助人們診斷和監控各種疾病。 產前基因篩查是血液檢測的一個重要應用，通過分析孕婦血液中的胎兒DNA來鑒定染色體異常（比如唐氏綜合癥）。此外，越來越多的研究者開始關注血液
提取RNA的時候總是有DNA污染
不管RNA還是RT之后做pcr，RNA都要變成cDNA之后才能做pcr。確定用DNase I處理過，電泳沒有DNA條帶了。一般RT用oligo dt或者隨機引物做擴增。也有用你想的目的片段的擴增引物做RT的。你看看你現在用的是什么引物，換oligo試試，不行換成你的基因特異性引物做了RT之后，再來p
提取的基因組DNA有降解如何解決
選取的材料不新鮮或反復凍融，采集材料后未及時處理或未低溫保存：陳舊血液或不新鮮的材料中，細胞凋亡導致DNA降解，或者低溫保存的樣品經反復凍融導致細胞破碎，內源性核酸酶降解DNA，因此應該選用新鮮的材料樣品，不能及時處理則低溫保存，運輸過程中應該使用干冰： 1 ) 未能有效的抑制內源性核酸酶的作用
提取RNA中老混有DNA怎樣去除
先用酚：氯仿：異戊醇（25：24：1）抽提,這時候經常在樣品中會有酚殘留,所以之后再用氯仿：異戊醇（24：1）抽提,將酚抽干凈,以免影響后續的實驗.在抽提前還要在DNA樣品中加入1/10體積的PH5.2的3M醋酸鈉,增加鹽濃度,以免DNA沉淀出來的量太少,都被抽走了.還有最好在抽提之前要把DNA樣品
常規組織樣本核酸（DNA/RNA）提取純化
20 分鐘內快速純化高品質，高產量，即用型 DNA（見圖 20）多種規格可選擇：Mini Kit 可處理 25 mg 組織，Micro Kit 可處理小于 10 mg 組織完全去除污染物和抑制劑可在 QIAcube 上進行自動化純化表1 QIAamp DNA Mini Kit純化各類樣本的核酸產量樣