當裂解物通過硅膠膜進行離心分離,現在所提取的 DNA 或 RNA 應該與柱子結合,雜質、細胞蛋白和多糖應該已經通過了。
但是,膜仍然被殘留的細胞蛋白質和鹽弄臟。如果樣品來自植物,仍然會有多糖,也許一些色素留在膜上,或者如果樣品是血液,膜可能會被染成棕色或黃色。
洗滌步驟用于去除這些雜質。
通常有兩次洗滌,盡管這可能因樣品類型而異。第一次洗滌通常會含有少量的離液鹽,以去除蛋白質和有色污染物。這之后總是用乙醇洗滌以除去鹽。
如果開始的準備工作沒有大量蛋白質,例如質粒準備或 PCR 清理,則只需要乙醇洗滌。去除離液鹽對于獲得高產量和高純度的 DNA 或 RNA 至關重要。一些試劑盒甚至會用乙醇清洗柱子兩次。如果殘留鹽分,核酸的洗脫會很差,A230讀數會很高,導致260/230的比率很低。對于無乙醇 DNA 和 RNA,需要進行干法離心,乙醇洗滌后,大多數方案都有一個離心步驟來干燥柱子。這是為了去除乙醇,對于清潔的洗脫液是必不可少的。 當將 10 mM Tris 緩沖液或水應用于膜進行洗脫時,核酸會水合并從膜中釋放出來。如果色譜柱上仍有乙醇,則核酸無法完全再水合。如果跳過干燥步驟會導致乙醇污染和低產量。很可能在 Nanodrop 上看不到乙醇吸光度,所以它不會出現在您的讀數中。