為什么SDSPAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳中樣品跑不進膠
溴酚藍指示劑跑進去沒有，有沒有在合適的位置？染料配制的有無問題，最好找別的膠試一試。另外脫色液也很重要，加熱（55度）脫色。可以同時上一個預染Marker看一看。......閱讀全文
SDSPAGE常用參數
聚丙烯酰胺的特性，包括機械性能，彈性，透明度，孔徑大小取決于T，C，T是兩個單體(單體丙烯酰胺和N-N’-甲叉雙丙烯酰胺)的總百分濃度，C 是與總濃度有關的交聯百分比濃度。T=(a+b)/mC=b/(a+b)（a為單體丙烯酰胺的克數，b為N-N’-甲叉雙丙烯酰胺的克數，m為緩沖液終體積）a，b的比例
SDSPAGE膠制備
一. 實驗原理： SDS-PAGE是對蛋白質進行量化，比較及特性鑒定的一種經濟、快速、而且可重復的方法。該法是依據混合蛋白的分子量不同來進行分離的。 SDS是一種去垢劑，可與蛋白質的疏水部分相結合，破壞其折疊結構，并使其廣泛存在于一個廣泛均一的溶液中。SDS蛋白質復合物的長度與其分子量成正比。在樣
SDSPAGE檢測蛋白表達
一、材料與儀器30%丙烯酰胺溶液；1.5mol/L Tris-HCl分離膠緩沖液，PH8.8；1.0mol/L Tris-HCl濃縮膠緩沖液，PH6.8；電泳緩沖液，PH8.3；10%SDS溶液；10%過硫酸銨溶液；樣品處理液；染色液；脫色液；電泳玻璃板，電泳電源架，電泳槽，電泳儀等；蛋白Mark。
SDSPAGE膠的干燥
凝膠干燥時遇到的主要問題是凝膠的變形和破裂。將凝膠放在Whatman 3MM濾紙上可防止干燥凝膠變形，但凝膠是否破裂取決于凝膠的厚度和干燥器的質量，因此，應盡量使用薄膠并使凝膠干燥器處于良好狀態，使其真空壓力波動極少。(1)試劑與配制：固定液：冰醋酸:甲醇:水（10:20:70）(2)電泳后的凝膠用
SDSPAGE的影響因素
1. 帶電顆粒的性質凈電荷多少、顆粒大小及形狀。一般凈電荷多，直徑小而且近于球狀，則泳動速度快，反之則慢。?2. 電場強度（電位梯度）指單位長度（cm）支持物體上的電位降，它對泳動度起著十分重要的作用。一般電場強度越高，帶電顆粒移動速度越快。根據電場強度可將電泳分為低壓（常壓）電泳100—500V，
SDSPAGE的影響因素
1. 帶電顆粒的性質凈電荷多少、顆粒大小及形狀。一般凈電荷多，直徑小而且近于球狀，則泳動速度快，反之則慢。2. 電場強度（電位梯度）指單位長度（cm）支持物體上的電位降，它對泳動度起著十分重要的作用。一般電場強度越高，帶電顆粒移動速度越快。根據電場強度可將電泳分為低壓（常壓）電泳100—500V，電
SDSPAGE的影響因素
1. 帶電顆粒的性質 凈電荷多少、顆粒大小及形狀。一般凈電荷多，直徑小而且近于球狀，則泳動速度快，反之則慢。 2. 電場強度（電位梯度） 指單位長度（cm）支持物體上的電位降，它對泳動度起著十分重要的作用。一般電場強度越高，帶電顆粒移動速度越快。根據電場強度可將電泳分為低壓
Tricine－SDSPAGE實用方案
Tricine-SDS-PAGE是用于分離分子量在1-10kD的肽類用的。一、 試劑配制：1． Low Bis acrylamide（49.5% T, 3% C）Acylamide 48.0gBis 1.5gWater make up to 100ml2. High Bis acrylamide (
SDSPAGE實驗方法
試劑：1. 5x樣品緩沖液（10ml）:0.6ml 1mol/l的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巰基乙醇，1ml 1%溴酚藍，0.9ml蒸餾水。可在4℃保存數周，或在－20℃保存數月。2. 凝膠貯液：在通風櫥中，稱取丙烯酰胺30g，甲叉雙丙烯酰
SDSPAGE的操作步驟
(1) SDS-PAGE凝膠配制SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻資料進行配制，也可以使用碧云天生產的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒(P0012A)。該試劑盒提供了除水和配膠器具外的所有試劑以及配制各種濃度SDS-PAGE的配方。(主要分為濃縮膠和分離膠，配方可自己上網查下)(2) 樣品處理在收集
SDS－PAGE電泳的操作步驟
1、清洗玻璃板一只手扣緊玻璃板，另一只手蘸點洗衣粉輕輕擦洗。兩面都擦洗過后用自來水沖，再用蒸餾水沖洗干凈后立在筐里晾干。2、灌膠與上樣（1）玻璃板對齊后放入夾中卡緊。然后垂直卡在架子上準備灌膠（操作時要使兩玻璃對齊，以免漏膠）。垂直電泳槽（2） 按前面方法配10%分離膠，加入TEMED后立即搖勻即可
如何配制sdspage梯度膠
操作步驟（ 1 ）在制板支架上置一專用有機玻璃槽，將固定好的玻璃板下部插入槽內，中部用兩個文具夾固定在支架豎板上。在槽內倒入已充分溶化的瓊脂，冷凝后封閉膠腔底部。（ 2 ）用直徑約 2mm 的聚乙烯管連接好梯度混合器、恒流泵、凝膠模。（ 3 ） 30% 膠液的配制取 50ml 燒杯一只，加凝膠貯液①
SDSPAGE梯度膠怎么配置
操作步驟（ 1 ）在制板支架上置一專用有機玻璃槽，將固定好的玻璃板下部插入槽內，中部用兩個文具夾固定在支架豎板上。在槽內倒入已充分溶化的瓊脂，冷凝后封閉膠腔底部。（ 2 ）用直徑約 2mm 的聚乙烯管連接好梯度混合器、恒流泵、凝膠模。（ 3 ） 30% 膠液的配制取 50ml 燒杯一只，加凝膠貯液①
SDS－PAGE電泳的免疫反應
1、將膜用TBS從下向上浸濕后，移至含有封閉液的平皿中，室溫下脫色搖床上搖動封閉1h。 2、將一抗用TBST稀釋至適當濃度（在1.5ml離心管中）；撕下適當大小的一塊兒保鮮膜鋪于實驗臺面上，四角用水浸濕以使保鮮膜保持平整；將抗體溶液加到保鮮膜上；從封閉液中取出膜，用濾紙吸去殘留液后，將膜蛋白面
SDS－PAGE樣品如何處理？
根據樣品分離目的不同，主要有三種處理方法：還原SDS處理、非還原SDS處理、帶有烷基化作用的還原SDS處理。1）還原SDS處理：在上樣buffer中加入SDS和DTT（或Beta巰基乙醇）后，蛋白質構象被解離，電荷被中和，形成SDS與蛋白相結合的分子，在電泳中，只根據分子量來分離。一般電泳均按這種方
SDSPAGE常見問題分析
1. 配膠緩沖液系統對電泳的影響？ 在SDS－PAGE不連續電泳中，制膠緩沖液使用的是Tris－HCL緩沖系統，濃縮膠是pH6.7，分離膠pH8.9；而電泳緩沖液使用的Tris－甘氨酸緩沖系統。在濃縮膠中，其pH環境呈弱酸性，因此甘氨酸解離很少，其在電場的作用下，泳動效率低；而CL離子卻很
SDSPAGE膠的干燥方法
凝膠干燥時遇到的主要問題是凝膠的變形和破裂。將凝膠放在Whatman 3MM濾紙上可防止干燥凝膠變形，但凝膠是否破裂取決于凝膠的厚度和干燥器的質量，因此，應盡量使用薄膠并使凝膠干燥器處于良好狀態，使其真空壓力波動極少。(1)試劑與配制：固定液：冰醋酸:甲醇:水（10:20:70）(2)電泳后的凝膠用
SDS－PAGE電泳的操作步驟
1、清洗玻璃板一只手扣緊玻璃板，另一只手蘸點洗衣粉輕輕擦洗。兩面都擦洗過后用自來水沖，再用蒸餾水沖洗干凈后立在筐里晾干。2、灌膠與上樣（1）玻璃板對齊后放入夾中卡緊。然后垂直卡在架子上準備灌膠（操作時要使兩玻璃對齊，以免漏膠）。垂直電泳槽（2） 按前面方法配10%分離膠，加入TEMED后立即搖勻即可
蛋白質的SDSPAGE實驗
實驗材料蛋白質溶液團粒狀細胞蛋白試劑、試劑盒4X濃縮膠緩沖4X分離膠緩沖10X電泳緩沖液2XSDS-PAGE上樣緩沖液正丁醇甲醇SDS儲存液儀器、耗材離心機電泳裝置凝膠上樣吸頭玻璃板加熱器實驗步驟一、灌制平板膠1.清洗玻璃板。a.將玻璃板放人 2%PCC-54 清洗液中浸泡 3?24 h。b.自來水
SDSPAGE的個人經驗總結
前些日子做SDSPAGE，做了兩天，犯了一大堆錯誤，寫出來供大家借鑒：1。聽有人說瓊脂粉可以做封底膠，一試，漏了，還是用瓊脂糖吧。2 AP用別人舊的，結果膠不干?3 A液，B液用舊的，不干。結論：不要用別人的，一定要自已配，別怕浪費。4 前后Tris 的PH值搞錯，結果不凝5 電泳時長板接負極，反了
Yeast－Ethanol－Lysates－for－SDSPAGE－and－Western－Blotting
Procedurepick one colonyinoculate in 3 ml of the appropriate mediagrow at 30° overnightpellet the cells (5 min, 5000g)wash 1X in sterile ddH2Ore- susp
sdspage凝膠電泳怎么制備
SDS-PAGE電泳可用于分離蛋白質和核苷酸，這里綜述了SDS-PAGE實驗原理、試劑和器材、以及實驗操作步驟。一.實驗原理：SDS-PAGE是對蛋白質進行量化，比較及特性鑒定的一種經濟、快速、而且可重復的方法。該法是依據混合蛋白的分子量不同來進行分離的。SDS是一種去垢劑，可與蛋白質的疏水部分相結
IEF/SDSPAGE雙向電泳法
1975年O′Farrall等人根據不同組份之間的等電點差異和分子量差異建立了IEF/SD S-PAGE雙向電泳。其中IEF電泳（管柱狀）為第一向，SDS-PAGE為第二向（平板）。在進行第一向IEF電泳時，電泳體系中應加入高濃度尿素、適量非離子型去污劑NP-40。蛋白質樣品中除含有這兩種物質外
蛋白質的SDSPAGE電泳
試劑、試劑盒 過硫酸銨含 2-巰基乙醇的樣品緩沖液樣品緩沖液 (2X) 儲液電泳緩沖液電極緩沖液壓縮膠緩沖液分離膠緩沖液實驗步驟 鑄分離膠（下層膠)裝置的清洗為使角蛋白的污染減至最少，將玻板、梳子和隔條浸泡在含強堿性去垢劑〔2%RBS 35 液（Pierce Chemical Co.)〕提濃物的
sdspage蛋白條帶怎么分析
bandscan比較專業哦，可以用的。1.因為其他地方也有一定的灰度，所以條帶所在區域灰度之和會小于100%。歸一化嘛，就是把這四個值乘以一個系數，使它們之和等于100%就是了。2.這四個條帶是斜的，分析起來很麻煩，要作較正的。普通的分析軟件不知有沒有這個校正功能。即使有，作起來也麻煩。
sdspage蛋白條帶怎么分析
bandscan比較專業哦，可以用的。1.因為其他地方也有一定的灰度，所以條帶所在區域灰度之和會小于100%。歸一化嘛，就是把這四個值乘以一個系數，使它們之和等于100%就是了。2.這四個條帶是斜的，分析起來很麻煩，要作較正的。普通的分析軟件不知有沒有這個校正功能。即使有，作起來也麻煩。
SDSPAGE的配制及電泳實驗
實驗原理SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳技術首先在1967年由Shapir0建立，其原理：聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(簡稱Acr)和交聯劑N，N’一亞甲基雙丙烯酰胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(APS)，N，N，N’，N’四甲基乙二胺(TEMED)作用下，聚合交聯形成的具有網狀立體結構的凝膠，并以此為支持
蛋白質的SDSPAGE電泳
蛋白質的SDS-PAGE電泳 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 過硫酸銨 含 2-巰基乙醇的樣品緩沖液
電泳跑膠SDSPAGE的定義
SDS-PAGE即聚丙烯酰氨凝膠電泳詳細資料如下：聚丙烯酰胺凝膠電泳是網狀結構，具有分子篩效應，它有兩種形式，一種是非變性聚丙烯酰胺凝膠，蛋白質在電泳中保持完整的狀態，蛋白在其中依三種因素分開：蛋白大小，形狀和電荷。而SDS-PAGE僅根據蛋白分子量亞基的不同而分離蛋白。這個技術首先是1967年由s
電泳跑膠SDSPAGE的定義
聚丙烯酰胺凝膠電泳是網狀結構，具有分子篩效應，它有兩種形式，一種是非變性聚丙烯酰胺凝膠，蛋白質在電泳中保持完整的狀態，蛋白在其中依三種因素分開：蛋白大小，形狀和電荷。而SDS-PAGE僅根據蛋白分子量亞基的不同而分離蛋白。這個技術首先是1967年由shapiro建立，他們發現在樣品介質和丙烯酰胺凝膠