蛋白質的性質實驗原理和操作步驟1
【目的和要求】1. 學習幾種常用的鑒定蛋白質和氨基酸的方法及其原理。2. 了解蛋白質的兩性解離性質。初步學會測定蛋白質等電點的方法。3. 加深對蛋白質膠體分子穩定因素的認識，了解蛋白質的沉淀反應、變性作用的原理及其相互關系。【實驗原理】（一） 蛋白質及氨基酸的呈色反應蛋白質所含有的某些氨基酸具有特殊結構，可以與某些試劑反應，生成有色物質。1. 雙縮脲反應尿素被加熱至 180℃左右時，兩分子尿素縮合放出一分子氨而形成雙縮脲。雙縮脲在堿性條件下可與Cu2+結合生成復雜的紫紅色化合物。此反應稱為雙縮脲反應。所有含有兩個或兩個以上肽鍵的化合物均有此反應。蛋白質或二肽以上的多肽分子中，含有多個與雙縮脲結構相似的肽鍵，因此也有雙縮脲反應，可用此法鑒定蛋白質的存在或測定其含量。2. 茚三酮反應蛋白質、多肽和各種氨基酸具有茚三酮反應。除無α-氨基的脯氨酸和羥脯氨酸呈黃色外，其他氨基酸生成紫紅色，最終為藍色化合物。除蛋白質、多肽和各種氨基酸能進行......閱讀全文
蛋白質的性質實驗原理和操作步驟1
【目的和要求】1. 學習幾種常用的鑒定蛋白質和氨基酸的方法及其原理。2. 了解蛋白質的兩性解離性質。初步學會測定蛋白質等電點的方法。3. 加深對蛋白質膠體分子穩定因素的認識，了解蛋白質的沉淀反應、變性作用的原理及其相互關系。【實驗原理】（一） 蛋白質及氨基酸的呈色反應蛋白質所含有的某些氨基酸具有特殊
蛋白質的性質實驗原理和操作步驟12
2. 不可逆的沉淀反應在發生沉淀反應時，蛋白質的分子內部結構，空間構象遭到破壞，失去其天然蛋白質的性質，這時蛋白質已發生變性。變性后的蛋白質沉淀不能再溶解于原來的溶液中，這種沉淀反應稱為不可逆沉淀反應。重金屬鹽、生物堿試劑、過酸、過堿、加熱、震蕩、超生波、有機溶劑等都能使蛋白質發生不可逆沉淀反應。重
溶菌酶（lysozyme）的制備及其性質實驗原理和操作(1)
【實驗內容】 1.溶菌酶Y活性檢測 ⑴ 酶活力測定方法 ⑵ 酶活力單位定義 ⑶ 比活力定義 ⑷ 蛋白含量測定方法 2. 蛋清溶菌酶的提取 ⑴ 每組4～5個新鮮雞蛋 ⑵ 利用等電點沉淀及樹脂層析等方法進行溶菌酶提取 3. 溶菌酶的分離、純化 ⑴ 利用
Southern－Blotting實驗原理、操作步驟和注意事項1
對于大的基因組，DNA酶切圖譜憑肉眼是分辨不開的（EB染色），因為大小不等的分子呈現彌散分布，只有借助靈敏的放射性同位素（或其他化學發光物質），將靶DNA在凝膠上（膜上）的帶型通過特定的探針與之雜交，轉換成X光片上直觀的帶型，才能進行相關分析。另外如果需要鑒定或尋找與已知DNA同源的 DNA片段
聚合酶鏈反應[PCR]實驗原理和操作步驟(1)
【實驗原理】聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術是美國Cetus公司人類遺傳研究所的科學家K.B.Mullis于1983年發明的一種體外擴增特定基因或DNA序列的方法。PCR具有很高的特異性、靈敏度，在分子生物學、基因工程研究、某些疾病的診斷以及臨床標
cDNA的合成實驗原理和操作步驟
一、實驗目的掌握植物cDNA合成的原理和方法二、實驗原理反轉錄酶主要用于體外cDNA的合成。目前最常用的反轉錄酶(reverse transcriptase) 有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它們具有依賴于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性，可以以RNA分子
RTPCR原理與實驗操作步驟1
一、知識背景：1、基因表達：DNA RNA Protein單拷貝基因表達存在逐步放大機制，如一個蠶絲心蛋白基因 104個絲心蛋白mRNA（每個mRNA存活4d，可以合成105個絲心蛋白） 共合成109個絲心蛋白 。因此單拷貝基因的mRNA表達水平對于其功能水平的調控是非常重要的。2、PCR技術(ol
DNA測序原理、儀器試劑和操作步驟1
DNA序列測定分手工測序和自動測序，手工測序包括Sanger雙脫氧鏈終止法和Maxam-Gilbert化學降解法。自動化測序實際上已成為當今DNA序列分析的主流。美國PE ABI公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA測序儀，其中310型是臨床檢測實驗室中使用最
線蟲unc22突變基因的克隆實驗原理和操作步驟1
【實驗原理】 外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA 連接酶的作用下，有Mg2+ 、ATP存在的連接緩沖系統中，將載體分子與外源DNA分子進行連接。Taq DNA聚合酶擴增的PCR產物，其DNA雙鏈前后末端都有一
PCRDGGE實驗原理和操作步驟
【實驗目的】 1．了解PCR-DGGE技術的原理。 2．了解并熟悉PCR-DGGE技術的步驟。 【實驗原理】 變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據DNA片段的熔解性質而使之分離的凝膠系統。核酸的雙螺旋結構在一定條件下可以解鏈，稱之為變性。核酸50%發生變性時的溫度稱為熔解溫度（Tm
PCRSSCP實驗原理和操作步驟
【實驗目的】1．了解PCR-SSCP技術的原理。2．了解并熟悉PCR-SSCP技術的步驟。 【實驗原理】 PCR-SSCP是1989年日本Orita等創建的篩查突變的新技術。它是一種簡單、快速、經濟的點突變篩查手段。PCR-SSCP技術的基本原理是PCR擴增后的DNA片段經變性成單鏈DNA，
重組DNA的轉化實驗原理和操作步驟
實驗目的制備出感受態細胞，把體外重組的DNA引入受體細胞，使受體菌具有新遺傳性，并從中選擇出轉化子。實驗原理感受態就是細菌吸收轉化因子的生理狀態，只有發展為感受態的細胞才能穩定攝取外來的DNA分子。pUC18的LacZ基因區域當有DNA片段插入時，LacZ基因失活，轉化進入大腸桿菌并在含有IPTG和
DNA的酶切實驗原理和操作步驟
一、實驗目的 本實驗學習、了解限制性內切酶的特性，學習根據具體目的設計適當的酶切體系并實施之。 二、實驗原理 利用限制性內切酶切割DNA是DNA重組過程中的關鍵步驟之一。成功的酶切為后續工作提供了有效的實驗材料。限制性內切酶是細菌體內限制修
霉菌的形態觀察實驗原理和操作步驟
一、實驗目的1、學習自制水浸片觀察微生物的形態；2、學習并掌握觀察霉菌形態的基本方法，了解四類常見霉菌的基本形態特征。二、基本原理霉菌可產生復什分枝的菌絲體，分基內菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態特征是識別不同種類霉
基因的PCR擴增實驗原理、實驗材料和操作步驟
實驗原理單鏈DNA在互補寡聚核苷酸片段的引導下，可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向復制出互補DNA。這時單鏈DNA稱為模板DNA，寡聚核苷酸片段稱為引物（Primer），合成的互補DNA稱為產物DNA。雙鏈DNA分子經高溫變性后成為兩條單鏈DNA，它們都可作為單鏈模板DNA，在相應的引物引導下，用
Northern－blot實驗操作步驟（1）
一、經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael（1977）。含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳，因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H+梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Miller
腫瘤細胞侵襲試驗原理和實驗步驟1
一、原理Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養基中重建形成膜結構，這種膜結構與天然基質膜結構極為相似。濾膜孔徑一般為8um，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細胞不能自由穿過，必須分泌
Western－免疫印跡實驗原理和操作步驟
[實驗原理]Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠
植物總RNA的提取實驗原理和操作步驟
一、實驗目的通過本實驗學習從植物組織中提取RNA的方法二、實驗原理RNA是一類極易降解的分子，要得到完整的RNA，必須最大限度地抑制提取過程中內源性及外源性核糖核酸酶對RNA的降解。高濃度強變性劑異硫氰酸胍，可溶解蛋白質，破壞細胞結構，使核蛋白與核酸分離，失活RNA酶，所以RNA從細胞中釋放出來時不
雙脫氧鏈終止法測定DNA序列實驗原理、操作步驟和儀器...1
[目的]掌握雙脫氧鏈終止法測定DNA序列的原理與方法[原理]DNA聚合酶催化的DNA鏈延伸是在3’-OH末端上進行的。由于2’，3’-雙脫氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3’-位脫氧而失去游離-OH，當它參入到DNA鏈后，3’-OH末端消失，使DNA鏈的延伸終止。本實驗根據此原理，將待測DNA片段插入
溶菌酶（lysozyme）的制備及其性質實驗原理和操作(2)
2.雞蛋清粗分離 按過濾好的蛋清量邊緩慢攪拌邊加入等體積的去離子水，均勻后在不斷攪拌下用1mol/L HCl調pH值至7左右，用脫脂棉過濾收濾液。 3.D152大孔弱酸性陽離子交換樹脂層析 ⑴ D152樹脂處理：將D152樹脂先用蒸餾水洗去雜物，濾出，用1mol/L NaOH攪拌浸泡并攪拌4～8小時
醋酸纖維薄膜電泳法分離血清蛋白質的原理和操作步驟1
一、目的：學習醋酸纖維薄膜電泳的操作，了解電泳技術的一般原理。二、原理：帶電質點在電場中移動的現象稱為電泳。電泳現象早在19世紀初期就被人們發現了，并用于膠體化學中，但是電泳技術的廣泛應用則在20世紀40年代左右。近年來各種類型的電泳技術發展十分迅速。例如，紙電泳、醋酸纖維薄膜電泳、纖維素或淀粉粉末
RNAi的實驗原理和操作實用技術(1)
幾十年來生物學上最重要的進展，也許是關于RNA分子能調節基因表達的發現。RNA干涉（RNAi）是指雙鏈RNA分子使基因表達沉寂的現象，是在線蟲中發現的，在 1998年的一篇Nature論文中被公諸于眾。此后，科學家們明白，RNAi還有其他形式，它既是一種了解基因功能的強大工具，又是很多生物的基因組所
苯酚法提取酵母RNA實驗原理和操作步驟
（一）原理細胞內大部分RNA 均與蛋白質結合在一起，以核蛋白的形式存在。因此，提取RNA時要把RNA與蛋白質分離并除去。將細胞置于含有十二烷基磺酸鈉（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的緩沖液中，加等體積水飽和酚，通過劇裂振蕩，然后離心形成上層水相和下層酚相。核酸溶于
免疫沉淀實驗原理、儀器試劑和操作步驟
（一）原理免疫沉淀是利用抗原抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法。抗體與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后，再與蛋白 A／G（Protein A／G）或二抗偶聯的agaose或Sepharose珠子孵育，通過離心得到珠子－蛋白A／G或二抗－抗體－目的蛋白復合物，沉淀經洗滌后，重懸于電泳上
酵母RNA的提制實驗原理、儀器試劑和操作步驟
一、目的：學習和掌握從酵母中提制RNA 的原理和方法，從而加深對核酸性質的認識。二、原理：提取和制備RNA 的首要問題是選RNA 含量高的材料。微生物是工業上大量生產核酸的原料，其中RNA 的提制以酵母最為理想，因為酵母核酸中主要是RNA（2.67～10.0%），DNA 很少（0.03～0.51
間接法的原理和操作步驟
間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：⑴將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。⑵加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他抗體
MTT實驗原理和實驗步驟
MTT原理：MTT全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，是一種黃顏色的染料。活細胞線粒體中琥珀酸脫氫酶能夠代謝還原MTT，同時在細胞色素C的作用下，生成藍色（或藍紫色）不溶于水的甲臜（Formaza
氨基酸單向紙層析實驗原理和步驟(1)
一、實驗目的：1、通過氨基酸的分離，學習并掌握紙層析的原理和操作技術；2、掌握分配層析法；3、掌握影響分配系數的因素。層析分離技術是利用被分離的混合物中各組分物理化學的性質（分子的形狀和大小、分子極性、吸附力、分子親和力、分配系數等）的不同，使各組分以不同程度分布在兩相（流動相和固定相）中，當流動相
elisa的原理和實驗步驟
ELISA的原理ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與