聚合酶鏈反應[PCR]實驗原理和操作步驟(1)
【實驗原理】聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術是美國Cetus公司人類遺傳研究所的科學家K.B.Mullis于1983年發明的一種體外擴增特定基因或DNA序列的方法。PCR具有很高的特異性、靈敏度，在分子生物學、基因工程研究、某些疾病的診斷以及臨床標本中病原體檢測等方面具有極為重要的應用價值。雙鏈DNA分子在接近沸點的溫度下解鏈，形成兩條單鏈DNA分子（變性），與待擴增片段兩端互補的寡核苷酸（引物）分別與兩條單鏈DNA分子兩側的序列特異性結合（退火、復性），在適宜的條件下，DNA聚合聚利用反應混合物中的4種脫氧核苷酸（dNTP），在引物的引導下，按5’-----3’的方向合成互補鏈，即引物的延伸。這種熱變性、復性、延伸的過程就是一個PCR循環。隨著循環的進行，前一個循環的產物又可以作為下一個循環的模板，使產物的數量按2n方式增長。從理論上講，經過25-30個循環后DNA可擴增10......閱讀全文
聚合酶鏈反應[PCR]實驗原理和操作步驟(1)
【實驗原理】聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術是美國Cetus公司人類遺傳研究所的科學家K.B.Mullis于1983年發明的一種體外擴增特定基因或DNA序列的方法。PCR具有很高的特異性、靈敏度，在分子生物學、基因工程研究、某些疾病的診斷以及臨床標
聚合酶鏈反應[PCR]實驗原理和操作步驟(2)
【實驗目的】了解聚合酶鏈反應（PCR）的基本原理及其影響因素，掌握PCR的基本操作過程。[儀器]PCR儀、臺式離心機、電泳儀、電泳槽、紫外檢測儀[試劑]1、引物：用去離子水配成10 μmol /μL。2、Taq聚合酶3、10×PCR反應緩沖液（加鎂離子）4、dNTPs：四種核苷酸混合物，濃度為10m
聚合酶鏈反應(PCR)詳細實驗操作步驟
一、實驗原理 聚合酶鏈反應(PCR)技術是在體外進行的由引物介導的酶促DNA擴增反應。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四種脫氧核糖核苷酸(dNTP)及適當濃度的Mg2+存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的體外酶促合成反應。兩個引物分別位于靶序列兩端，同兩條模板的3’端互補，由此限定擴增片
聚合酶鏈反應（PCR）技術的發展和應用1
第一節 概述 聚合酶鏈反應或多聚酶鏈反應（Polymerase Chain Reaction, PCR），又稱無細胞克隆技術(“free bacteria”cloning technique)，是一種對特定的DNA片段在體外進行快速擴增的新方法。該方法一改傳統分子克隆技術的模式，不通過活細胞，操作
RTPCR原理與實驗操作步驟1
一、知識背景：1、基因表達：DNA RNA Protein單拷貝基因表達存在逐步放大機制，如一個蠶絲心蛋白基因 104個絲心蛋白mRNA（每個mRNA存活4d，可以合成105個絲心蛋白） 共合成109個絲心蛋白 。因此單拷貝基因的mRNA表達水平對于其功能水平的調控是非常重要的。2、PCR技術(ol
PCRDGGE實驗原理和操作步驟
【實驗目的】 1．了解PCR-DGGE技術的原理。 2．了解并熟悉PCR-DGGE技術的步驟。 【實驗原理】 變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據DNA片段的熔解性質而使之分離的凝膠系統。核酸的雙螺旋結構在一定條件下可以解鏈，稱之為變性。核酸50%發生變性時的溫度稱為熔解溫度（Tm
PCRSSCP實驗原理和操作步驟
【實驗目的】1．了解PCR-SSCP技術的原理。2．了解并熟悉PCR-SSCP技術的步驟。 【實驗原理】 PCR-SSCP是1989年日本Orita等創建的篩查突變的新技術。它是一種簡單、快速、經濟的點突變篩查手段。PCR-SSCP技術的基本原理是PCR擴增后的DNA片段經變性成單鏈DNA，
PCRSSCP（聚合酶鏈反應單鏈構象多態）實驗步驟
一. 樣品的制備1. 設計引物。用Oliga6.0對目的基因進行分析，設定引物，引物長度18-21個堿基，擴增片段以200-300bp最為合適。2. PCR擴增并檢測。根據不同的引物挑選適合的退火溫度進行PCR擴增。擴增產物用2-2.5%的瓊脂糖膠跑水平電泳檢測，上樣量3-5ul。PCR產物為 10
反轉錄聚合酶鏈反應的操作步驟
1、從RNA（或mRNA）反轉錄合成cDNA第一鏈：2、于95℃加熱5～10min，滅活反轉錄酶，使RNA—cDNA雜交體變性，然后迅速冰浴冷卻：3、PCR擴增：方法基本同PCR。cDNA第一鏈合成方法：20ul反應液中含10xPCR擴增緩沖液，2ul；四種dNTP（10 mmol/L）2ul；RN
PCR(多聚酶鏈反應)實驗原理、方法步驟和注意事項
【實驗對象】特定的DNA序列。【試劑與器材】 引物(primer)，根據需擴增的DNA設計相應的引物；TagDNA聚合酶； 10×PCR緩沖液(隨酶一起購買)；5mmol/L dNTP貯備液(商品化產品)；DNA模板(需擴增的 DNA)；雙蒸水；礦物油；PCR反應管；微量移液器；離心機及PCR儀
逆轉錄聚合酶鏈反應的操作步驟
1. 總RNA的提取：見相關內容。2. cDNA第一鏈的合成：試劑公司有多種cDNA第一鏈試劑盒出售，其原理基本相同，但操作步驟不一。現以GIBICOL公司提供的SuperScript Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis 試
口蹄疫聚合酶鏈反應（PCR）
?20世紀90年代初，PCR技術日趨成熟，也滲入到FMD的診斷中。這一技術特異性強，靈敏度高，可檢測多種組織樣品，檢測病毒RNA的PCR方法已經成為FMDV檢測方法中的一種，PCR方法具有極高的靈敏度（其理論值為一個病毒粒子的核酸），因為它僅需要極少量的反應模板，而且可以設計多循環PCR反應。由于僅
基因的PCR擴增實驗原理、實驗材料和操作步驟
實驗原理單鏈DNA在互補寡聚核苷酸片段的引導下，可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向復制出互補DNA。這時單鏈DNA稱為模板DNA，寡聚核苷酸片段稱為引物（Primer），合成的互補DNA稱為產物DNA。雙鏈DNA分子經高溫變性后成為兩條單鏈DNA，它們都可作為單鏈模板DNA，在相應的引物引導下，用
PCR擴增DNA（PCR－Amplify－DNA）實驗原理、材料和操作步驟
【實驗原理】聚合酶鏈反應（polymerasechainreaction，PCR）是一種體外 DNA擴增技術，1985年由Mullis等人創立。該技術能在幾小時的實驗操作中，將人為選定的一段DNA擴增幾百萬倍，具有靈敏度高、特異性強、操作簡便和應用廣泛等優點，目前已成為分子生物學及基因工程中極為
實時逆轉錄聚合酶鏈反應的操作步驟
1. 總RNA的提取：見相關內容。 2. cDNA第一鏈的合成：試劑公司有多種cDNA第一鏈試劑盒出售，其原理基本相同，但操作步驟不一。現以GIBICOL公司提供的SuperScript Preamplification System for First Strand cDNA Synthes
聚合酶鏈反應PCR反應體系
PCR是20世紀80年代由美國西特斯公司的一批科學家、技術人員和商人發明的，主要發明者凱利·穆利斯（Kary Mullis）因此獲得了1993年的諾貝爾化學獎。其他科學家和技術人員，包括厄立克（Henry Erlieh）、安海姆（Norman Arnheim）、才木（Ran—daliSaiki）、霍
聚合酶鏈反應的基本步驟
主要分為三大步驟:高溫變性、低溫退火、適溫延伸。分別添加引物、模板、Taq酶、dNTP和緩沖液等反應物混合,在約為95℃環境下,雙鏈DNA氫鍵斷裂解旋為單鏈;單鏈與人工設計的引物在約為60℃溫度下,按照堿基互補配對的原則相結合;并升溫到72℃左右,利用Taq酶延伸合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保
聚合酶鏈反應（PCR）技術的發展和應用2
第五節 PCR各處應用模式 一、兼并引物（Degenerate Primer）PCR 密碼子具有兼并性，如表22-4，單以氨基酸順序推測編碼的DNA序列是不精確的，但可以設計成對兼并引物，擴增所有編碼已知順序的核酸序列。用兼并引物時寡核苷酸中核苷酸序列可以改變，但核苷酸的數量應相同。兼并度越低，
聚合酶鏈反應剪接的原理和應用
中文名稱聚合酶鏈反應剪接英文名稱PCR splicing定 義利用聚合酶鏈反應進行基因剪接以刪除DNA中一段特定序列的方法。系設計兩組引物，先分別擴增擬刪除序列上下游兩側的序列,再用上游序列5′端引物和下游序列3′端引物用PCR反應進行連接。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至40~60℃左右，引物與模板
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至40~60℃左右，引物與模板
PCR技術原理、實驗步驟和應用
一、實驗目的1.掌握聚合酶鏈式反應的原理。2. 掌握移液槍和PCR儀的基本操作技術。二、實驗原理PCR技術，即聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）是由美國PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年（1993年獲諾貝爾化學獎）建立的。這項技術
PCRDHPLC實驗原理和步驟
【實驗目的】1．了解PCR-DHPLC技術的原理。2．了解并熟悉PCR-DHPLC技術的步驟。【實驗原理】DHPLC技術也稱為WAVE核苷酸片段分析系統。利用高效液相色譜原理，PCR擴增后的DNA片段與緩沖液（TEAA）混合形成液相，流動相被高壓驅動，通過一個DNA分離柱——DNA Sep柱
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至40~60℃左右，引物與模板
PCR技術原理、實驗步驟和應用
一、實驗目的1.掌握聚合酶鏈式反應的原理。2. 掌握移液槍和PCR儀的基本操作技術。二、實驗原理PCR技術，即聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）是由美國PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年（1993年獲諾貝爾化學獎）建立的。這項技術可在試管
PCR技術原理、實驗步驟和應用
?一、實驗目的1.掌握聚合酶鏈式反應的原理。2. 掌握移液槍和PCR儀的基本操作技術。二、實驗原理PCR技術，即聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）是由美國PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年（1993年獲諾貝爾化學獎）建立的。這項技術可在試
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至40~60℃左右，引物與模板
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至40~60℃左右，引物與模板
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至40~60℃左右，引物與模板
PCR技術原理、實驗步驟和應用
一、實驗目的1.掌握聚合酶鏈式反應的原理。2. 掌握移液槍和PCR儀的基本操作技術。二、實驗原理PCR技術，即聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）是由美國PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年（1993年獲諾貝爾化學獎）建立的。這項技術可在