酵母菌DNA制備
實驗材料 酵母試劑、試劑盒 YPD破菌緩沖液酚氯仿異戊醇LB儀器、耗材 玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟 1. 注盛于一個13 mm×100 mm 無菌玻璃試管中的2 ml 培養基接種含有帶目的基因的質粒的酵母單菌落，在轉動或搖動培養箱中30℃過夜培養到靜止期。2. 將1.5 ml 的過夜培養物轉移到微量離心管中，室溫高速離心5 s，倒掉上清，快速振蕩分散沉淀物。 3. 細胞用200 μl 破菌緩沖液重懸，加0.3 g 玻璃珠（約200 μl 體積）及200 μl 酚/氯仿/異戊醇，在漩渦混合器上高速振蕩2 min，室溫高速離心5 min。4. 取1~2 μl 水相轉化感受態大腸桿菌只HB101或MH1，涂布在帶有合適的抗生素的LB平板上以質粒上的抗藥性標志進行選擇。......閱讀全文
酵母菌DNA制備
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPD破菌緩沖液酚氯仿異戊醇LB儀器、耗材?玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟 1.? 注盛于一個13 mm×100 mm 無菌玻璃試管中的2 ml 培養基接種含有帶目的基因的質粒的酵母單菌落，在轉動或搖動培養箱中30℃過夜培養到靜止期。2.? 將1.5 ml 的過夜培養
酵母菌DNA制備實驗1
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD破菌緩沖液酚氯仿異戊醇LB儀器、耗材玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟1. ?注盛于一個13 mm×100 mm 無菌玻璃試管中的2 ml 培養基接種含有帶目的基因的質粒的酵母單菌落，在轉動或搖動培養箱中30℃過夜培養到靜止期。?2. ?將1.5 ml 的過夜培養物轉移
酵母菌DNA制備實驗2
實驗材料酵母試劑、試劑盒TERNA酶乙酸銨無水乙醇儀器、耗材離心機培養箱玻璃培養管實驗步驟1. ?在18 mm×150 mm 無菌玻璃培養管或17 mm×100 mm 無菌聚丙烯酰胺管中用10 ml YPD培養基過夜培養酵母菌至靜止期。2. ?培養物室溫下在臺式離心機上1 200 g 離心5 min
酵母菌RNA制備實驗
實驗材料 酵母菌試劑、試劑盒 TES酸性酚氯仿乙酸鈉乙醇儀器、耗材 離心管離心機搖床實驗步驟 1. ?酵母細胞在10 ml 培養基中生長至指數中期（OD600=1.0）。?2. ?將培養液轉移到50 ml，離心管，于4℃，1 500 g 離心3 min。?3. ?棄上清，菌體沉淀用1 ml 冰冷的水
酵母菌RNA制備實驗—poly（A）+法
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒酚氯仿異戊醇儀器、耗材玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟一、熱酸酚方案（基本方案1）1. ?TES及酸酚溶液的體積增加到4 ml。2. ?操作時使用50 ml 聚丙烯離心管。3. ?將得到大約10 mg RNA。?二、玻璃珠方案（備擇方案1）1. ?將體積增加到15 ml
酵母菌RNA制備實驗—玻璃珠法
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒酚氯仿異戊醇儀器、耗材玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟1. ?培養并收集酵母菌細胞，冷凍細胞沉淀。2. ?用300 μl RNA緩沖液中重懸細胞沉淀。?3. ?加1體積冷的酸洗玻璃珠（體積與約200 μl 水相等）、300 μl 的用RNA緩沖液平衡的25：24 ：1酚/
酵母菌基因組DNA的提取實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 酵母菌 試劑、試劑盒
酵母菌基因組DNA的提取實驗
實驗材料 酵母菌試劑、試劑盒 SE緩沖液山梨醇EDTA溶菌酶PVP蛋白酶K緩沖液 Tris儀器、耗材 高速冷凍離心機臺式離心機恒溫水浴低溫冰箱冷凍真空干燥器取液器電泳儀水平電泳槽紫外觀測儀實驗步驟 1. ?1.5 ml ?對數生長期細菌細胞。2. ?離心，12 000 rpm，1-2 min。3.
酵母DNA微量制備
實驗概要本實驗介紹了分別從40ml和5ml酵母培養液中制備酵母DNA的操作流程。實驗步驟1. 酵母DNA微量制備(40ml)?? 1) 在125ml三角瓶中用40ml YPD培養液在30℃條件下培養細胞達最大生長量(過夜)。?? 2) 將上述培養物移入螺蓋離心管，用醫用離心機或Sorvall SS-
胸腺DNA的制備
實驗概要本實驗介紹了濃鹽法小牛胸腺DNA制備的原理及操作步驟。實驗原理DNA在生物體內是以與蛋白質形成復合物的形式存在的，因此提取出脫氧核糖核酸蛋白復合物（DNP）后，必須將其中的蛋白質除去。小牛胸腺，魚類精子和植物種子的胚等含有豐富的DNA，可作為提取DNA的良好材料。動物和植物組織的脫氧核糖核蛋
哺乳動物中制備基因組DNA實驗——制備DNA
在DNA提取過程中應盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為后續的實驗打下基礎。一般真核細胞基因組DNA有107-9bp，可以從新鮮組織、培養細胞或低溫保存的組織細胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等試劑存在下用蛋白酶K消化細胞，隨后用酚抽提而實現的。實驗材料動物組織試劑、
酵母菌RNA制備實驗—熱酸性酚抽提法
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒TES酸性酚氯仿乙酸鈉乙醇儀器、耗材離心管離心機搖床實驗步驟1. ?酵母細胞在10 ml 培養基中生長至指數中期（OD600=1.0）。?2. ?將培養液轉移到50 ml，離心管，于4℃，1 500 g 離心3 min。?3. ?棄上清，菌體沉淀用1 ml 冰冷的水重懸，轉
方法三：酵母菌基因組DNA的提取
方法三：酵母菌基因組DNA的提取一：儀器：同方法一二：試劑：SE緩沖液（1M山梨醇，0.1MEDTA pH7.5）；溶菌酶（50mg/ml）；20％PVP；蛋白酶K緩沖液（10mM Tris pH7.6??0.5% SDS 1mM EDTA）；其余同前三：操作?1.5ml??對數生長期細菌細胞???
質粒DNA大量制備實驗
實驗方法原理?這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。實驗材料?大腸桿菌試劑、試劑盒?葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS異丙醇乙醇乙酸甲儀器、耗材?離心機漩渦混合器水浴鍋實驗步驟?1.? 往2 ml 燒瓶中加入500 ml ，含有適當抗生素的L
質粒DNA大量制備實驗
堿裂解法 平衡離心法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。
質粒DNA的大量制備
實驗概要本方法用于從細菌中提純大量質粒DNA。主要試劑1. STE 0.1mol/L NaCl 10mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) 2. 溶液Ｉ 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 10mmol/L EDTA(
質粒DNA的制備方法
有多種分離質粒的方法，如堿裂解法、煮沸裂解法、層析柱過濾法等。
快速制備酵母DNA法
實驗概要本實驗制備了酵母轉化質粒，快速從轉化酵母菌中分離了用于Southern分析的基因組DNA。主要試劑2％ Triton X－100，1％SDS，100mmol/L NaCl，10mmol/L Tris-HCl(pH8)，1mmol/L Na2EDTA，苯酚：氯仿：已戊醇（25：24：1），YP
酵母DNA的小量制備
實驗方法原理通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。實驗材料酶解酶 100T酵母細胞試劑、試劑盒異丙醇醋酸鉀SDS醋酸鈉山梨糖醇緩沖液TE酵母
酵母DNA的小量制備
實驗方法原理 通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。實驗材料 酶解酶 100T酵母細胞試劑、試劑盒 異丙醇醋酸鉀SDS醋酸鈉山梨糖醇緩沖液T
“DNA探針”的制備過程
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內切酶做不完全水解)分別
制備互補DNA的方法
制備互補DNA，往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質，則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分。就胰島B細胞而論，此細胞含有高水平胰島素前體mRNA，后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體，如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原)，則可從沉淀
DNA探針的制備方法
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針，常常是比較煩瑣的。以細菌為例，細菌的基因組大小約為5×106堿基，約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針，通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法，即將細菌DNA切成小片段后（如用限制性內切酶做不完全水解）分別
酵母DNA的小量制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。
DNA芯片的制備方式
DNA芯片又叫做基因芯片（gene chip）或基因微陣列（microarray），寡核酸芯片，或DNA微陣列，它是通過微陣列技術將高密度DNA片段陣列以一定的排列方式使其附著在玻璃、尼龍等材料上面。由于常用計算機硅芯片作為固相支持物，所以稱為DNA芯片。
λ噬菌體DNA的制備
實驗概要本實驗介紹了λ噬菌體DNA的制備、操作步驟和注意事項。實驗原理λ噬菌體是最早使用的克隆載體，λ噬菌體的基因組是一長度約為50kb的雙鏈DNA分子，它在宿主細胞有兩種生活途徑：其一是裂解生長，環狀DNA ? 分子在細胞內多次復制，合成大量噬菌體基因產物，裝配成噬菌體顆粒，裂解宿主菌再進行下一次
質粒DNA的小量制備
實驗概要本方法用于從細菌中制備提純少量質粒DNA。主要試劑1. 溶液Ｉ 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris．Cl(pH8.0) 10mmol/LEDTA(pH8.0) 溶液Ｉ可成批配制，每瓶約100ml，在6.895×104Pa高壓下蒸氣滅菌15分鐘，貯存于4℃。2. 溶液Ⅱ 0.2
DNA片段的制備方法
常用以下方法獲得DNA片段：①用限制性核酸內切酶將高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超聲波)取得DNA隨機片段；③在已知蛋白質的氨基酸順序情況下，用人工方法合成對應的基因片段；④從mRNA反轉錄產生cDNA。
制備DNA測序模板實驗——小量裂解物中制備λ噬菌體DNA
實驗材料重組λ噬菌體試劑、試劑盒DNA酶ⅠRNA酶ⅠPEGSMSDSEDTA異丙醇乙酸鈉TE儀器、耗材巴斯德吸管試管離心機實驗步驟1. ?在新鮮配制的λ頂層瓊脂糖和λ瓊脂糖平板上，通過在平板上裂解適于λ噬菌體生長的大腸桿菌菌株，制備重組λ噬菌體毒種原液。2. ?取700 μl 毒種液加入無菌的1.5
制備DNA測序模板實驗——制備單鏈M13噬菌體DNA
本實驗包含了用于制備適用于雙脫氧測序的模板及適用于末端標記和化學測序的DNA的實驗方案。所有用于雙脫氧測序的雙鏈模板在與引物退火前必須變性，在一般應用上，堿變性在測序中的效果比熱變性好。實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LBTEM13聚乙二醇容易讓頂層瓊脂乙酸鈉乙醇儀器、耗材巴斯德吸管試管離心機實驗步驟1