用于激酶分析的細胞裂解實驗
實驗方法原理 實驗材料 培養細胞（貼壁貼壁細胞在100 mm 組織培養板中約 70% 生長成片／懸浮細胞濃度 為 10^6 細胞／ml）試劑、試劑盒 PBS裂解緩沖液蛋白酶抑制劑儲存液儀器、耗材 微量離心機實驗步驟 1. 用預冷的 PBS 洗細胞 2 次，將最后的洗液盡可能吸盡。2. 加入 0.75 ml 裂解緩沖液重懸 2 × 107 個細胞，若是貼壁細胞必須完全覆蓋。加入蛋白酶抑制劑儲存液，使其終濃度為 1 mmol/L PMSF，100 μmol/L 苯甲脒，5 μg/ml 亮抑蛋白酶肽，5 μg/ml抑胃酶肽 A，5 μg/ml抗蛋白酶。3. 4°C 冰浴細胞 10 min，刮離細胞并將裂解液移至標記的微量離心管中。4. 4°C，最大速度離心 10 min，小心地將上清移至新微量離心管中，迅速進行后續實驗。注意事項 若用于免疫沉淀（先使用 25%～50% 的裂解物進行初試驗，再依據結果進行裂解物量的調整）和簡單純......閱讀全文
用于激酶分析的細胞裂解實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 培養細胞（貼壁貼壁細胞在100 mm 組織培養板中約 7
用于激酶分析的細胞裂解實驗
實驗方法原理 實驗材料 培養細胞（貼壁貼壁細胞在100 mm 組織培養板中約 70% 生長成片／懸浮細胞濃度 為 10^6 細胞／ml）試劑、試劑盒 PBS裂解緩沖液蛋白酶抑制劑儲存液儀器、耗材 微量離心機實驗步驟 1. 用預冷的 PBS 洗細胞 2 次，將最后的洗液盡可能吸盡。2. 加入 0.
用于激酶分析的細胞裂解實驗
實驗材料培養細胞（貼壁貼壁細胞在100 mm 組織培養板中約 70% 生長成片／懸浮細胞濃度 為 10^6 細胞／ml）試劑、試劑盒PBS裂解緩沖液蛋白酶抑制劑儲存液儀器、耗材微量離心機實驗步驟1. 用預冷的 PBS 洗細胞 2 次，將最后的洗液盡可能吸盡。2. 加入 0.75 ml 裂解緩沖液重懸
用于免疫沉淀的培養細胞的裂解實驗
實驗方法原理 培養的動物細胞一般使用溫和去垢劑來裂解。如果低濃度的去垢劑就能引起細胞的充分裂解（如1%NP-40或1%TritonX-100)，那么這對目標蛋白的影響可能比勻漿方法更溫和。去垢劑的選擇必須根據免疫沉淀所用的抗體的識別表位的性質來決定。實驗材料 單層細胞或懸浮細胞試劑、試劑盒 裂解緩沖
用于免疫沉淀的培養細胞的裂解實驗
方法A:單層培養的細胞的裂解 方法B:懸浮生長的細胞的裂解 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 培養的動物細胞一般使用溫和去垢劑來裂解。如果低濃度的去垢劑就能引起細胞的充
DNA裂解分析實驗
瓊脂糖凝膠電泳 個體核的PI熒光 乙醇固定后PI染色 JAM分析 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
DNA裂解分析實驗
實驗材料?細胞試劑、試劑盒?溶解緩沖液RNA 酶A T1 混合液蛋白酶 KDNA 加樣緩沖液儀器、耗材?Eppendorf 管移液管瓊脂糖凝膠實驗步驟 1. 將 5X105 細胞移入無菌的 1.5 ml Eppendorf 管中，4℃ 2000 r/min 離心 5 分鐘，棄上清。2. 加入 20
DNA裂解分析實驗
瓊脂糖凝膠電泳 個體核的PI熒光 乙醇固定后PI染色 JAM分析 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
用于免疫印跡的動物培養細胞、酵母和細菌的裂解實驗
實驗方法原理去垢劑裂解細胞法通常用于培養的動物細胞。典型的離子型去垢劑SDS(如2%SDS)能充分地裂解細胞。培養的動物細胞和細菌，如可以使用這種方式裂解。假如實驗所用的抗體識別的抗原決定簇取決于自然空間構象，并對還原環境敏感，那么在裂解緩沖液中應除去二硫蘇糖醇，并建議使用非還原/無脲的凝膠實驗材料
標記裂解培養細胞實驗
基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對貼壁細胞）基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對非貼壁細胞）SDS煮沸法裂解細胞實驗方法原理實驗材料待標記的培養細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒37℃標記培養液 ? ? ?
DNA裂解分析實驗_JAM分析
實驗材料細胞試劑、試劑盒胸腺嘧啶脫氧核苷HBSSPBSEDTA儀器、耗材新鮮培養基組織培養板實驗步驟1. 實驗前一天，將細胞接種于新鮮培養基。對數生長期細胞可更好地滲入 [3H]-胸腺嘧啶脫氧核苷。2. 收獲細胞，在新鮮培養基中以 1X106?細胞/ml 重懸，用 5 μCi/ml [3H]-胸腺嘧
免疫沉淀的培養細胞的裂解實驗_單層培養的細胞的裂解
實驗方法原理培養的動物細胞一般使用溫和去垢劑來裂解。如果低濃度的去垢劑就能引起細胞的充分裂解（如1%NP-40或1%TritonX-100)，那么這對目標蛋白的影響可能比勻漿方法更溫和。去垢劑的選擇必須根據免疫沉淀所用的抗體的識別表位的性質來決定。實驗材料單層細胞或懸浮細胞試劑、試劑盒裂解緩沖液PB
32－P－標記裂解培養細胞實驗——SDS煮沸法裂解細胞
實驗材料待標記的培養細胞固相化金黃色葡萄球菌（可選）試劑、試劑盒37℃標記培養液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡鹽水(TBS) ／磷酸鹽平衡鹽水(PBS)SDS裂解緩沖液RIPA 校正液免疫沉淀洗液儀器、耗材橡皮細胞刮子Sorvall 冷凍離心機(或其他)樹脂玻
免疫沉淀的培養細胞的裂解實驗_懸浮生長的細胞的裂解
實驗材料細胞實驗步驟①細胞在480g的離心力條件下離心10min，棄去上清。②用冷PBS洗細胞兩次，然后將洗過的細胞置于冰上。③重新懸浮沉淀，使1.0ml裂解液（冷卻到4℃)中含大約1X107?5X107個細胞。④冰上孵育細胞15min，并不時地振動小管。⑤4℃條件下20000g離心裂解液10min
紅細胞裂解的實驗方法步驟
IntroductionPrior to using lymphoid tissue cell suspensions for flow cytometric analysis and/or for?in vitro?functional assays, it is recommended to r
32－P－標記裂解培養細胞實驗
基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對貼壁細胞） 基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對非貼壁細胞） SDS煮沸法裂解細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
32－P－標記裂解培養細胞實驗
實驗方法原理 實驗材料 待標記的培養細胞試劑、試劑盒 37℃標記培養液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡鹽水(TBS) ／磷酸鹽平衡鹽水(PBS)溫和裂解緩沖液／RIPA 裂解緩沖液儀器、耗材 樹脂玻璃擋板(1 in 厚)取液器吸頭樹脂玻璃盒37℃微量離心管一次性
細胞裂解方法：化學裂解、酶裂解和機械裂解
裂解方法包括化學裂解、酶裂解和機械裂解。化學裂解和酶裂解通常是比較溫和的方法，通常會很少使DNA 斷裂。這兩種方法（包括SDS 和溶菌酶處理等）提取純化DNA中常用的方法。機械裂解可以更均一的裂解細胞，同化學裂解相比，機械處理具有更高的裂解效率和更低的選擇性。機械處理可以更劇烈和全面的裂解細胞，
基因活性的同位素分析實驗——原位裂解細胞的CAT分析法
實驗材料轉染細胞試劑、試劑盒Triton裂解液儀器、耗材培養皿培養箱實驗步驟1. ?60 mm 培養皿中轉染了CAT表達質粒的細胞，用2 ml PBS洗1次。每培養皿加入2 ml?低滲緩沖液，在室溫下溫育2~5 min。2. ?吸去低滲緩沖液，加入400 μl Triton裂解液。用橡膠刮子將細胞刮
培養細胞標記和裂解物的制備實驗——溫和去污裂解法
實驗材料培養細胞試劑、試劑盒DMEMHClTBSTris儀器、耗材微量離心管Plexiglas盒吸頭細胞刮子冷凍離心機實驗步驟1. ?培養待標記的細胞至適當的生長期。?對于貼壁細胞：?2a. ?吸去培養液，用37℃的含血清不加標記物的標記培養液洗盡殘存的含磷酸鹽培養液，吸盡該培養液。?3a. ?加入
氮艙減壓法裂解培養細胞實驗
實驗方法原理 通過來自增壓艙中的氮氣減壓膨脹來破碎細胞是一種快速、有效的細胞和組織的勻漿方法，能釋放完整的細胞器和制備細胞膜。該方法的原理很簡單：細胞放在一個壓力艙中，在高壓下（約5500kPa，相當于800psi)氮氣首先被溶解在細胞中，當壓力突然消失時，氮從溶液中迅速氣化，并引起細胞膜的拉伸和擴
氮艙減壓法裂解培養細胞實驗
實驗方法原理通過來自增壓艙中的氮氣減壓膨脹來破碎細胞是一種快速、有效的細胞和組織的勻漿方法，能釋放完整的細胞器和制備細胞膜。該方法的原理很簡單：細胞放在一個壓力艙中，在高壓下（約5500kPa，相當于800psi)氮氣首先被溶解在細胞中，當壓力突然消失時，氮從溶液中迅速氣化，并引起細胞膜的拉伸和擴展
氮艙減壓法裂解培養細胞實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過來自增壓艙中的氮氣減壓膨脹來破碎細胞是一種快速、有效的細胞和組織的勻漿方法，能釋放完整的細胞器和制備細胞膜。該方法的原理很簡單：細
酪氨酸激酶分析實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 兔肌肉烯醇化酶
凝膠中激酶直接分析實驗
基本方案 直接分析 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 鹽酸胍或脲都能使蛋白質變性，選用哪一種取決于不同的激酶，但一般首選鹽酸胍，因為對大多數激酶而言它的變性效果更好。
酪蛋白激酶分析實驗
基本方案 用 β-酪蛋白 備擇方案 用多肽底物 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 β-酪蛋
凝膠中激酶直接分析實驗
實驗方法原理 鹽酸胍或脲都能使蛋白質變性，選用哪一種取決于不同的激酶，但一般首選鹽酸胍，因為對大多數激酶而言它的變性效果更好。實驗材料 10 mmol L 激酶底物有激酶活性的酶樣品試劑、試劑盒 2-丙醇Tris?Cl鹽酸胍 脲DTTTween 20匹配的激酶反應緩沖液 Mg／ATP 溶液 [γ-3
酪蛋白激酶分析實驗
實驗方法原理 實驗材料?β-酪蛋白（溶于水）有酪蛋白激酶活性的酶樣品試劑、試劑盒?[γ-32P] ATP 溶液酪蛋白激酶反應緩沖液TCA SDS-PAGE 樣品緩沖液儀器、耗材?30℃ 水浴P81 磷酸纖維素膜離心管離心機實驗步驟 每個鑒定反應按以下比例將各反應組分加入 1.5 ml 微量離心管中：
酪氨酸激酶分析實驗
實驗材料兔肌肉烯醇化酶試劑、試劑盒1 mmol L DTT 50 mmol L HEPES（pH 7.0 ）甘油100 mmol L 乙酸5 × 酪氨酸激酶反應緩沖液[γ-32P] ATP 溶液冰 2 × SDS-PAGE 樣品緩沖液儀器、耗材30℃ 水浴和沸水浴實驗步驟1. 4℃ 最大速度離心 5
酪氨酸激酶分析實驗
實驗方法原理 實驗材料?兔肌肉烯醇化酶試劑、試劑盒?1 mmol L DTT 50 mmol L HEPES（pH 7.0 ）甘油100 mmol L 乙酸5 × 酪氨酸激酶反應緩沖液[γ-32P] ATP 溶液冰 2 × SDS-PAGE 樣品緩沖液儀器、耗材?30℃ 水浴和沸水浴實驗步驟 1.