重組蛋白質的代謝標記實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸儀器、耗材 培養瓶離心機轉子實驗步驟 1. 接種2.5×106細胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培養液的60 mm 肌組織培養皿中。對每一假定重組病毒分別準備一個平皿供感染用，并準備一個對照平皿供野生型桿狀病毒感染。于27℃溫育2 h。使細胞貼壁。吸出培養液，然后加入1 ml 含重組病毒或1 ml 含野生型病毒的無血清完全培養液，感染復數（MOI）為5~10。2. 將每個平皿中的培養液移去后，再往其中加入3 ml 含10%胎牛血清的完全培養液， 27℃溫育約40 h。 3. 小心去除培養液，用不含甲硫氨酸或不含甲琉氨酸和半胱氨酸的培養液洗細胞一次， 加入1 ml 已添加EXPRE35S35S至0.25~0.5 mCi/ml 的同樣培養液。于27℃溫育3~4 h。 4. 將細胞和培養物上清移......閱讀全文
重組蛋白質的代謝標記實驗
由于重組蛋白質表達的時候，宿主蛋白質的合成基本終止，因此體內代謝標記是檢測重組蛋白質的敏感方法。實驗材料蛋白質試劑、試劑盒胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸儀器、耗材培養瓶離心機轉子實驗步驟1. ?接種2.5×106細胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培養液的60 mm 肌組織培養皿中。對每一假定重組病
重組蛋白質的代謝標記實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒
重組蛋白質的代謝標記實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸儀器、耗材 培養瓶離心機轉子實驗步驟 1. ?接種2.5×106細胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培養液的60 mm 肌組織培養皿中。對每一假定重組病毒分別準備一個平皿供感染用，并準備一個對照平皿供野生型桿狀病毒感染。于27℃溫育
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——重組蛋白的代謝標記
實驗方法原理由于重組蛋白表達的時候，宿主蛋白質的合成基本終止，因此體內代謝標記是檢測重組蛋白的敏感方法。所有的標記氨基酸都摻入到晚期病毒特異的蛋白質（包括目的蛋白）的合成。35S 標記的甲硫氨酸和半胱氨酸是常用的放射標記的氨基酸。為了獲得更好的結果，在標記之前細胞內的這兩種氨基酸應當被清除：將細胞在
蛋白質磷酸化的測定實驗—代謝標記
實驗材料細胞儀器、耗材培養瓶實驗步驟1. 用 60 mm 或 100 mm 培養瓶，在完全培養基中培養細胞至所希望的密度。2. 用預熱的低磷酸培養基（無放射性磷酸鹽）沖洗兩次，然后加入含 0.5~1 mCi32P/ml 的低磷酸培養基（50~100 μmol/L 無機磷酸）。3. 培養結束后，回收?
靶蛋白的放射標記實驗—酵母和細菌蛋白質代謝放射標記
實驗材料細胞儀器、耗材基本培養基實驗步驟1. 接種細胞于只含有必需氨基酸和輔因子的已知成分的基本培養基，于合適溫度中度振蕩培養過夜。2. 用新鮮的基本培養基稀釋培養物，繼續溫育至 107?細胞/ml （酵母）或對數期中期（細菌）。3. 5000 g 室溫離心 10 分鐘收集細胞，用無硫酸鹽基本培養基
氨基酸代謝標記實驗
暫未評分點評實驗，有機會獲丁當獎勵?+收藏氨基酸代謝標記實驗標簽：氨基酸 代謝 標記精編分子生物學實驗指南第五版 第十章代謝標記技術用于研究蛋白質的生物合成、加工、細胞內運輸、分泌、降解和物理化學特性。內容來源于《精編分子生物學實驗指南（第五版）》? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
氨基酸代謝標記實驗
實驗方法原理 在含有放射性標記氨基酸的培養基中，短期培養細胞（800 Ci／mmol)／[35S]標記蛋白質水解產物試劑、試劑盒 PBS(冷凍)37℃ 脈沖標記培養基儀器、耗材 配有液體同位素垃圾閥門的真空吸氣器實驗步驟 1. 室溫融化 [35S] 標記甲硫氨酸，并用預熱的（37℃）脈沖標記培養基制
重組病毒的蛋白質分析實驗
實驗材料?Sf細胞試劑、試劑盒?胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液儀器、耗材?培養瓶培養箱離心機轉子水浴鍋實驗步驟 1.? 接種2.5×108 Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2 培養瓶中，27℃溫育≥ 2 h。從含無血清完全培養液和重組蝕斑的1 ml
重組病毒的蛋白質分析實驗
實驗材料Sf細胞試劑、試劑盒胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液儀器、耗材培養瓶培養箱離心機轉子水浴鍋實驗步驟1. ?接種2.5x108?Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2?培養瓶中，27℃溫育≥2 h。從含無血清完全培養液和重組蝕斑的1 ml 病毒貯液中取0.5
蛋白質的生物合成標記實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 甲硫氨酸PBS儀器、耗材 培養箱離心管實驗步驟 1. ?培養懸浮細胞至對數增長期，室溫300 g 離心5 min。回收107~108細胞。?2. ?每2×107細胞用約10 ml 37℃的短時間標記培養基在圓錐型試管中洗滌，于室溫300 g 離心5 min 回收細胞，小
蛋白質的生物合成標記實驗
甲硫氨酸短時間標記懸液中的細胞 甲硫氨酸短時間標記貼壁培養細胞 甲硫氨酸對細胞進行脈沖追蹤標記 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質
蛋白質的生物合成標記實驗
甲硫氨酸短時間標記懸液中的細胞 甲硫氨酸短時間標記貼壁培養細胞 甲硫氨酸對細胞進行脈沖追蹤標記 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質
離體神經突觸的代謝性標記實驗
mRNA 和 rRNA 存在于樹突和軸突內（VanMinnen1994;Steward1997)。令人疑惑不解的是，位于胞體外區域的 mRNA 是否真的被翻譯。下面的方法可以證明神經突起確實可以不依賴胞體而合成蛋白。現代神經科學研究技術作者：U.Windhorst?&?H. Johansson? 翻
離體神經突觸的代謝性標記實驗
試劑、試劑盒 固定劑溫育液氯霉素放射自顯影乳劑顯影劑SDS樣本緩沖液實驗步驟 一、放射自顯影神經元在條件培養基中培養 2d，如第十章所述。1.用一個鋒利的微電極從胞體分離神經突起，并用牽引電極將胞體移出培養皿 (見第十章)。2.在培養液中加入終濃度 0.lmmol/L 氯霉素，阻斷線粒體蛋白的合成。
離體神經突觸的代謝性標記實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 固定劑 溫育液 氯霉素 放射自顯影乳劑 顯影劑 SDS樣本緩沖液 實驗步驟
重組蛋白質的大規模生產實驗
基本方案 堿處理法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 重組蛋白質 儀器、耗材
氨基酸代謝標記實驗_備擇方案－3－長期細胞標記
實驗方法原理長期標記意味著對細胞進行 6～32 h 持續的代謝標記。該方法特別適用于研究合成速度相對較慢的蛋白質或研究成熟的標記蛋白而不是生物合成的前體。穩定狀態的標記是長期標記的一種形式，在此過程細胞和放射性標記的氨基酸一起孵育直至放射性標記蛋白的合成和降解速率相當。如果蛋白質復合體中的亞基的初級
蛋白質的生物合成標記實驗（二）
實驗材料細胞試劑、試劑盒PBS甲硫氨酸儀器、耗材培養箱離心機實驗步驟1. ?在100 mm 直徑的培養皿上培養貼壁細胞（0.5~2×107）至70%~90%匯片，吸去培養液，用10 ml 于37℃短時間標記培養基輕輕搖晃冼兩次細胞。2. ?加入5 ml 于37℃短時間標記培養基，在5%CO2的加濕培
蛋白質的生物合成標記實驗（一）
甲硫氨酸短時間標記懸液中的細胞生物按照從脫氧核糖核酸 (DNA)轉錄得到的信使核糖核酸（mRNA）上的遺傳信息合成蛋白質的過程。由于mRNA上的遺傳信息是以密碼（見遺傳密碼）形式存在的，只有合成為蛋白質才能表達出生物性狀，因此將蛋白質生物合成比擬為轉譯或翻譯。實驗材料蛋白質試劑、試劑盒甲硫氨酸PBS
蛋白質的生物合成標記實驗（三）
實驗材料細胞試劑、試劑盒甲硫氨酸PBS儀器、耗材離心機培養箱實驗步驟1. ?準備和用［35S］甲硫氨酸標記細胞，用0.2~1 mCi/ml 的［35S］甲疏氨酸脈沖標記細胞5~30 min。?2. ?脈沖標記后，除去［35S］甲硫氨酸培養基，用10 ml 于37℃追加培養基冼細胞1次，加入10 ml
氨基酸代謝標記實驗_備擇方案－2示蹤標記細胞
實驗材料細胞懸液／貼壁細胞[35S]標記L-甲硫氨酸（>800 Ci／mmol)／[35S]標記蛋白質水解產物試劑、試劑盒PBS(冷凍)37℃ 示蹤培養基儀器、耗材配有液體同位素垃圾閥門的真空吸氣器實驗步驟1. 每個時間點和每個樣品準備 0.5 × 107?~2 × 107?細胞， 每 0 .5 ×
蛋白質標記
Biosynthetic labeling?(Sefton Lab)Biotinylation of Antibody?(Contributed by Nanci Donacki)125I Labeling of Protein using ICl?(ScienceXchange)Protein (
肝臟的代謝：蛋白質代謝
蛋白質代謝：（1）合成自身結構蛋白并合成多種血漿蛋白質，其中合成量最多的是白蛋白。（2）肝臟合成的許多凝血因子和纖維蛋白原等，在血液凝固功能上起重要作用。（3）有豐富的氨基酸代謝酶，轉化和分解氨基酸。（4）經鳥氨酸循環合成尿素（尿素是血中非蛋白含氮物質主要成分）。
氨基酸代謝標記實驗_輔助方案－TCA沉淀測定標記摻入量
實驗材料被標記的細胞懸液（見基本方案或備擇方案 1～4）試劑、試劑盒0.1％（m V）BSA／0.02%（m V）NaN310%TCA 溶液冷凍乙醇儀器、耗材連接真空管道的濾過裝置2.5 cm 玻璃微纖維濾膜（Whatman GF／C）實驗步驟1. 加 10～20 μl 被標記的細胞懸液到 0.1
重組蛋白質的定義
根據其定義，重組蛋白質的產生是應用了重組DNA或重組RNA的技術從而獲得的蛋白質。
重組蛋白質的大規模生產實驗——基本方案
蛋白質（protein）是生命的物質基礎，沒有蛋白質就沒有生命。因此，它是與生命及與各種形式的生命活動緊密聯系在一起的物質。實驗材料重組蛋白質儀器、耗材培養瓶過濾器實驗步驟1. ?在懸浮培養液中培養Sf9細胞，并使之適應無血清培養液。?2. ?準備旋轉培養瓶，用于按比例擴增Sf9細胞，將合適大小的兩
檢驗肝臟的代謝考點：蛋白質代謝
（1）合成自身結構蛋白并合成多種血漿蛋白質，其中合成量最多的是白蛋白。（2）肝臟合成的許多凝血因子和纖維蛋白原等，在血液凝固功能上起重要作用。（3）有豐富的氨基酸代謝酶，轉化和分解氨基酸。（4）經鳥氨酸循環合成尿素（尿素是血中非蛋白含氮物質主要成分）。
非標記蛋白質的磷酸化作用分析實驗
免疫印跡分析 化學發光法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質樣品 試劑、試劑盒
蛋白質的膠體金標記
當蛋白質的最適穩定量及標記的最佳pH值被確定以后，便可進行標記。具體步驟如下。（1）根據標記所用膠體金的總量計算出所需要待標記蛋白質的總量。（2）邊攪拌邊將蛋白質溶液加入膠體金溶液中，逐漸加入，lmg的蛋白質量大約需5min,或在攪拌下將膠體金逐漸加入到蛋白質溶液中，大約需5~10min。（3）繼續