感受態制備：酵母感受態細胞制備實驗
酵母感受態細胞制備可以：（1）用于建立酵母轉化體系；（2）用于酵母表達系統構建；（3）用于酵母其他分子生物學研究。實驗方法實驗材料釀酒酵母 試劑、試劑盒YPDA液體培養基 蒸餾水 甘油 二甲基亞砜 儀器、耗材培養皿 離心機 離心管 冰箱 實驗步驟一、試劑與耗材 1. 試劑 細菌用-酵母提取物（Fisher）、 細菌用-蛋白胨（Fisher）、葡萄糖（Fisher）、細菌用-瓊脂粉、去離子水、甘油(Sigma)、二甲基亞砜(Sigma)、聚乙二醇3350(Sigma)、醋酸鋰(Sigma)、鮭魚精子細胞DNA(Invitrogen)、酵母無氨基酸氮源(Sigma)、 2-(N-嗎啉代) 乙磺酸、腺嘌呤(Sigma)、葡萄糖。 2. 儀器 水浴鍋(VWR)、離心機(Eppendorf)、30 °C搖床與恒溫培養箱(VWR)、培養皿。二、 試劑配方 &nbs......閱讀全文
酵母感受態細胞制備實驗
化學法 試劑盒制備法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 感受態是受體最容易接受外源DNA片段并實現轉化的一種生理狀態，用對應化學物質處理細胞后，細胞逐漸形成感受態細胞并
感受態制備：酵母感受態細胞制備實驗
酵母感受態細胞制備可以：（1）用于建立酵母轉化體系；（2）用于酵母表達系統構建；（3）用于酵母其他分子生物學研究。實驗方法實驗材料釀酒酵母 試劑、試劑盒YPDA液體培養基 蒸餾水 甘油 二甲基亞砜 儀器、耗材培養皿 離心機 離心管 冰箱 實驗步驟一、試劑與耗材 1. ?試劑?細菌用-酵母提取物（Fi
酵母感受態細胞制備實驗——化學法
酵母感受態細胞制備可應用于：（1）建立酵母轉化體系；（2）酵母表達系統構建；（3）酵母其他分子生物學研究。實驗方法原理感受態是受體最容易接受外源DNA片段并實現轉化的一種生理狀態，用對應化學物質處理細胞后，細胞逐漸形成感受態細胞并進行轉化。化學法簡單，快速，穩定，重復性好，廣泛用于外源基因的轉化。實
酵母感受態細胞制備實驗——試劑盒制備法
實驗方法原理酵母化學感受態細胞制備試劑是一種通過化學處理，高效快速制備釀酒酵母化學感受態細胞，用于長期凍存以備后續轉化的產品。實驗材料酵母菌試劑、試劑盒YPD培養基酵母化學感受態細胞制備試劑盒儀器、耗材離心管冰箱冷凍管保溫冰盒實驗步驟一、挑取酵母受體菌的新鮮的單菌落（4℃放置不超過3周的也可以），接
酵母感受態細胞的制備需要注意什么
感受態細胞可以存儲在-80°C長達一年，沒有轉化潛能的損失。然而, 瞬間凍結在液氮或-80°C冰箱是不建議的。感受態細胞需要在冷凍保護劑中，像哺乳動物細胞一樣緩慢地冷凍。1. 使用硬紙板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等儲存。2. 用紙片等將盒子里的細胞管隔開，分成多個小格子。3. 復蘇過程中，在37°C解凍細
感受態細胞的制備
感受態細胞的制備1.挑取適當菌株的E.coli?單菌落接種于2ml SOB培養液中，37℃搖床過夜。2.取0.5-1ml過夜培養的菌液轉種到50ml SOB中，18℃劇烈震蕩，直到A600達到0.6。3.將培養物轉移到50ml離心管中，4℃ 4,000rpm/min離心10min。同時在冰浴上配置T
感受態細胞的制備
材料、設備及試劑 一. 材料 E. coli DH5α，BL21菌株: Rˉ,Mˉ,Ampˉ；T-vectorDNA: 購買或實驗室自制，eppendorf管。 二. 設備 恒溫搖床,電熱恒溫培養箱,臺式高速離心機,無菌工作臺,低溫冰箱, 恒溫水浴鍋, 制冰機, 分光光度計,微量移液槍。
酵母DNA微量制備
實驗概要本實驗介紹了分別從40ml和5ml酵母培養液中制備酵母DNA的操作流程。實驗步驟1. 酵母DNA微量制備(40ml)?? 1) 在125ml三角瓶中用40ml YPD培養液在30℃條件下培養細胞達最大生長量(過夜)。?? 2) 將上述培養物移入螺蓋離心管，用醫用離心機或Sorvall SS-
感受態細胞的制備方法
CaCl2法1.將快速生長的大腸桿菌置于經低溫（0℃）預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹，同時Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，誘導細胞成為感受態細胞細胞壁通透性發生變化，極易與外源DNA相粘附并在細胞表面形成抗脫氧核糖核
超級感受態細胞的制備
The Inoue Method for Preparation and Transformation of Competent E. coli: "Ultra Competent" CellsJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and T
感受態細胞的制備方法
感受態細菌細胞的轉化采用氯化鈣的方法。不含有質粒的大腸桿菌菌株在室溫下使其解凍并加入40mL S.O.C 的液體培養基。在37 ℃培養1h , 然后將其轉移到37 ℃搖床上以200r /min 速度培養2 ～3h， 直到OD600 達到0.2 ～ 0.4。不同細菌菌株的最適宜OD600 是不同的。在
酵母DNA的小量制備
實驗方法原理 通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。實驗材料 酶解酶 100T酵母細胞試劑、試劑盒 異丙醇醋酸鉀SDS醋酸鈉山梨糖醇緩沖液T
酵母菌DNA制備
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPD破菌緩沖液酚氯仿異戊醇LB儀器、耗材?玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟 1.? 注盛于一個13 mm×100 mm 無菌玻璃試管中的2 ml 培養基接種含有帶目的基因的質粒的酵母單菌落，在轉動或搖動培養箱中30℃過夜培養到靜止期。2.? 將1.5 ml 的過夜培養
苯酚法制備酵母tRNA
試劑、試劑盒 DEAE 纖維素 二乙醇胺 (TEA) 溶液 0.lmol LTEA 緩沖液 0.lmol L 氯化鈉含 0.lmoi. LTEA 緩沖液 12mol L 氯化鈉含 0.lmol LTEA 緩沖液 lmol L 氯化鈉含 0.lmol LTEA 緩沖液 乙醚 水飽和酚 乙醇儀器
酵母DNA的小量制備
實驗方法原理通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。實驗材料酶解酶 100T酵母細胞試劑、試劑盒異丙醇醋酸鉀SDS醋酸鈉山梨糖醇緩沖液TE酵母
苯酚法制備酵母tRNA
通過 DEAE 纖維素柱純化，除去少量 DNA、大分子 RNA、蛋白質、多糖等雜質，最后得到各種氨基酸專一性 tRNA 的混合物.試劑、試劑盒DEAE 纖維素二乙醇胺 (TEA) 溶液0.lmol LTEA 緩沖液0.lmol L 氯化鈉含 0.lmoi. LTEA 緩沖液12mol L 氯化鈉含
苯酚法制備酵母tRNA
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 DEAE 纖維素 ? 二乙醇胺 (TEA) 溶液 0.lmol LTEA 緩沖液 ?0.lmol L 氯化鈉含 0.lmoi. LTEA 緩沖液
酵母總RNA的制備
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 AE 緩沖液。 ? 苯酚 10%SDS ?酚 ?氯仿 ? 無水乙醇 乙醇. ?3mol L 乙酸鈉 ?無 RNase
酵母DNA的小量制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。
快速制備酵母DNA法
實驗概要本實驗制備了酵母轉化質粒，快速從轉化酵母菌中分離了用于Southern分析的基因組DNA。主要試劑2％ Triton X－100，1％SDS，100mmol/L NaCl，10mmol/L Tris-HCl(pH8)，1mmol/L Na2EDTA，苯酚：氯仿：已戊醇（25：24：1），YP
酵母總RNA的制備
試劑、試劑盒 AE 緩沖液。 苯酚 10%SDS 酚 氯仿 無水乙醇 乙醇. 3mol L 乙酸鈉 無 RNase 的水儀器、耗材 髙速離心機實驗步驟 一 材料與設備1)AE 緩沖液：50 mmol/L 乙酸鈉 (PH5.3)，lOmmol/LEDTA。2) 苯酚 (用 AE 緩沖液預先平衡）。3)
受體菌感受態細胞的制備
一、目的與原理當細菌處于容易吸收外源DNA的狀態時，即為感受態，而用理化手段使細菌處于感受態的操作為致敏過程。感受態細胞制備是重組基因能否實現轉化的一個重要的技術環節。本試驗是通過鈣離子來誘導使之成為感受態細胞。二、材料和方法1． 材料：大腸桿菌2． 儀器：離心機，恒溫搖床，恒溫水浴，超凈工作臺，冰
農桿菌感受態細胞制備實驗
農桿菌感受態細胞制備可用于：（1）建立農桿菌轉化體系；（2）農桿菌表達系統構建；（3）農桿菌其他分子生物學研究。實驗方法原理在基因工程操作中，感受態細胞的制備和質粒的轉化是一項基本技術。感受態是細菌細胞具有的能夠接受外源DNA的一種特殊生理狀態。農桿菌的感受態可用CaCl2處理而誘導產生。將正在生長
感受態細胞制備原理及方法
摘要： 目前,感受態細胞的制備常用冰預冷的CaCl2處理細菌的方法制備,即用低滲CaCl2溶液在低溫（0℃）時處理快速生長的細菌,從而獲得感受態細菌.本方法的關鍵是選用的細菌必須處于對數生長期,實驗操作必須在低溫下進行. 原理：
電轉化感受態細胞的制備
1．電轉化感受態細胞的制備?1. 用槍頭挑取單克隆菌落，投入盛有10ml LB液體培養基的50ml離心管中。（同時做培養基和槍頭的空白對照）?2. 37℃，220rpm，培養14-16個小時。?3. 第二天，以1：100的比例將這10ml菌液倒入1000ml LB液體培養基中，37度，220rpm，
感受態細胞制備原理及方法
理：?目前，感受態細胞的制備常用冰預冷的CaCl2處理細菌的方法制備，即用低滲CaCl2溶液在低溫（0℃）時處理快速生長的細菌，從而獲得感受態細菌。此時細菌膨脹成球形，外源DNA分子在此條件下易形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘附在細菌表面，通過熱激作用促進細胞對DNA的吸收。轉化效率可達106-
農桿菌感受態細胞制備實驗
氯化鈣法 電轉農桿菌感受態 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在基因工程操作中，感受態細胞的制備和質粒的轉化是一項基本技術。感受態是細菌細胞具有的能夠接受外源DNA的一
感受態細胞的制備和轉化
第一節 概 述?在自然條件下,很多質粒都可通過細菌接合作用轉移到新的宿主內,但在人工構建的質粒載體中,一般缺乏此種轉移所必需的mob基因,因此不能自行完成從一個細胞到另一個細胞的接合轉移。如需將質粒載體轉移進受體細菌,需誘導受體細菌產生一種短暫的感受態以攝取外源DNA。轉化(Transformati
感受態制備：農桿菌感受態細胞制備實驗
農桿菌感受態細胞制備實驗農桿菌感受態細胞制備可以：（1）用于建立農桿菌轉化體系；（2）用于農桿菌表達系統構建；（3）用于農桿菌其他分子生物學研究。實驗方法氯化鈣法電轉農桿菌感受態實驗方法原理在基因工程操作中，感受態細胞的制備和質粒的轉化是一項基本技術。感受態是細菌細胞具有的能夠接受外源DNA的一種特
酵母蔗糖酶的制備實驗
研磨法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 蔗糖酶( inver tase ) (β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶) ( fructofuranosidefructohydrol