轉基因小鼠制備實驗方法（protocol)
1、 選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。2、 47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合籠；另取數只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結扎公鼠合籠。3、第二天上午9:00前觀察供體、受體，有精栓者拿出備用。受體籠拿出作好隔離措施。4、10:30左右，斷頸處死供體，手術取出整個輸卵管，放入透明質酸酶~0.3mg/M2液中。顯微鏡下，用鑷子撕開輸卵管壺腹部，受精卵隨同顆粒細胞即一同流出。5、仔細觀察放在透明質酸酶M2液中的受精卵，當受精卵周圍的顆粒細胞脫離時，將受精卵吸出，放入M2液中洗滌，最后放在M16液中放入5% CO2，37C0培養箱培養。6、在顯微鏡下觀察，挑選細胞飽滿，透明帶清晰，雄原核清晰可見的受精卵待用。7、安裝持卵針和注射針，使其末端平行于載物臺，在凹玻片的中央滴入一滴M2液，覆蓋石蠟油，移入待注射的受精卵......閱讀全文
轉基因小鼠制備實驗方法（protocol)
1、 選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。2、 47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合籠；另取數只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結扎公鼠合籠。3、第二天上午9:00前觀察供體、受體，
轉基因小鼠制備實驗方法
實驗概要掌握轉基因小鼠制備基本實驗方法。實驗步驟1. 選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。 2. 47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合籠；另取數只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結
轉基因小鼠制備實驗
轉基因小鼠制備實驗可應用于：（1）動物發育研究；（2）研究細胞功能調控機制。實驗方法原理遺傳的基本物質是DNA，基因是位于染色體上有遺傳效應的DNA片段，對于儲存在生物全套染色體中的全部遺傳信息，可稱其為基因組。不同種類、不同個體的生物基因組成是不同的，對動物個體來說，非自身的基因成分屬于外源基因，
轉基因小鼠制備實驗
實驗材料 小鼠試劑、試劑盒 HCGPMSG透明質酸酶戊巴比妥鈉儀器、耗材 顯微鏡鑷子持卵針注射針實驗步驟 1. ?選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。?2. ?47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合
轉基因小鼠制備實驗
實驗步驟 1. 選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。2. 47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合籠；另取數只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結扎公鼠合籠。3. 第二天上午9:00前觀察
轉基因小鼠制備實驗
1、 選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。?2、 47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合籠；另取數只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結扎公鼠合籠。?3、第二天上午9:00前觀察供體、受
動物實驗技術：轉基因小鼠制備實驗
1、 選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。2、 47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合籠；另取數只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結扎公鼠合籠。3、第二天上午9:00前觀察供體、受體，
制備轉基因小鼠過程中的若干技巧
背景：當今轉基因技術迅速發展，作為模式動物的小鼠在上世紀就已經有完整的轉基因制備過程。雖然技術成熟但方法單一，所以需要進行發展和改進。 方法改進： 1.在小鼠品系的選擇上需要注意，盡量選擇容易受胎的品系。如ICR小鼠 2.在利用顯微注射法制備轉基因小鼠時，質粒濃度在1.5ng/
protocol：小鼠胚胎干細胞培養實驗方法和操作步驟3
體外分化方法第1步：ES培養基在LIF存在的條件下維持細胞培養第2步：EB培養基使用細菌培養皿去除LIF后胚狀體的形成需要4天。1、分散純化細胞（參見上面的細胞傳代部分）2、純化 2小時后將細胞轉入含有ES培養基的50ml Falcon管中，計數細胞取適量體積放入15ml管中離心3分鐘。3、用2ml
protocol：小鼠胚胎干細胞培養實驗方法和操作步驟1
1、一般培養：保持胚胎干細胞處于未分化狀態培養基細胞復蘇凍存細胞明膠包被細胞傳代2 、體外分化培養基包被有多聚鳥氨酸/纖維結合蛋白的培養板（使用或不使用蓋玻片）體外分化方法注：以下培養針對于小鼠的R1胚胎干細胞系，其它胚胎干細胞的培養可以參考。不過人的胚胎干細胞培養不可以采用下面的protocol，
protocol：小鼠胚胎干細胞培養實驗方法和操作步驟2
體外向心肌細胞方向分化胚胎干細胞在體外去除LIF情況下會自然向心肌細胞方向分化，小鼠的R1系一般在第7-8天自然出現搏動的心肌細胞，與胚胎發育時間線是完全一致的。培養基：EB 配制一20×不含DMEM，FBS，LIF的溶液（該溶液也能用于ES培養基--見前述）。分裝在50ml 離心管中，（稀釋為
病毒RNA提取實驗方法（protocol）
1，用異硫氰酸胍提取提禽流感病毒的詳細步驟，可參考（我提過N次做定量PCR都沒問題）：1.取200ul樣品數+陰性對照+陽性對照個1.5ml滅菌eppendorf管2.加600ul異硫氰酸胍，然后加入對照和樣品，再加200ul氯仿，顛倒混勻3.13000rpm離心15min4.在第3步離心快結束時，
Western－Blot－Protocol實驗步驟
一、提取抗原蛋白??將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl100%酒精充分混勻，靜置5min(RT),2000×g,4℃離心5min,吸取上清至新管中,加入750μl異丙醇,混勻,靜置10min(RT),12000×g,4℃離心10min,棄上清,加入1ml0.3mol/L鹽酸胍/95%酒精重懸
轉基因酵母乙肝疫苗的制備方法
基因重組乙肝疫苗是利用轉基因技術，構建含有乙肝病毒HBsAg基因的重組質粒，轉入酵母（啤酒酵母. 漢遜酵母或畢赤酵母）或重組中國倉鼠卵巢細胞（CHO）表達的乙型肝炎表面抗原，在繁殖過程中產生于未糖基化的HBsAg多肽，經破碎酵母菌體，顆粒形未糖基化的HBsAg多肽釋放，經純化，滅活，加氫氧化鋁后
轉基因食物或危害小鼠健康
法國卡昂大學的一個研究小組近日宣布，他們發現被終身喂食一種普通轉基因玉米的小鼠易患上腫瘤，并且肝臟和腎臟也受到嚴重損害。目前，法國政府已經啟動了對轉基因玉米安全性的調查。 雖然之前的安全實驗已經證實在食用90天之后，這種轉基因玉米對動物沒有不良影響，《每日郵報》相關報道稱，新的實驗被認為是首次對
Western－Blot－Protocol實驗操作步驟
一、提取抗原蛋白 將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl100%酒精充分混勻，靜置 ?5min(RT),2000×g,4℃離心5min,吸取上清至新管中,加入750μl異丙醇,混勻,靜置10min(RT),12000×g,4℃離心 ?10min,棄上清,加入1ml0.3mol/L鹽酸胍/95%酒
小鼠細胞染色體制備及核型分析實驗1
?培養以及小鼠外周血分裂相細胞收獲實驗實驗材料雌性小鼠7?10周齡試劑、試劑盒完全的RPMIPHA 溶液LPSFBS肝素鈉溶液秋水仙堿溶液固定劑儀器、耗材聚苯乙烯組織培養管肝素化的微量毛細分血管有蓋的12mm X 75mm 無菌管錐形玻璃離心管清潔的顯微鏡玻片實驗步驟基本方案 培養以及小鼠外周血分裂
小鼠細胞染色體制備及核型分析實驗2
GIEMSA 顯帶（G顯帶）實驗材料分裂中期染色體玻片試劑、試劑盒2XSSCNaCl胰蛋白酶 Giemsa溶液磷酸鹽緩沖液玻片染色缸儀器、耗材亮視野顯微鏡實驗步驟1.于室溫存放染色體玻片 7~10d。2.在盛有 60~62°C 的 2XSSC 溶液的廣口瓶中孵育玻片 1.5 h，每個廣口瓶中盛放玻片
實驗小鼠給藥和采血方法
?（一）給藥方法1．灌胃給藥小鼠專用灌胃針由注射器和喂管組成，喂管長約1nm，喂管尖端焊有一金屬小圓球，金屬球中空，用途是防止喂管插入時造成損傷。金屬球彎成20度角，以適應口腔與食道之間彎曲。將喂管插頭緊緊連接在注射器的接口上，吸入定量的藥液；左手捉住小鼠，右手拿起準備好的注射器。將喂管針頭尖端防放
大腸桿菌感受態細胞的幾種制備方法protocol1
常態的細胞不能攝入外部溶液中的DNA，所以要轉化質粒DNA進入大腸桿菌必須首先制備感受態的大腸桿菌細胞。受體細胞經過一些特殊方法（如：CaCl，RuCl等化學試劑法）的處理后，細胞膜的通透性發生變化，成為能容許多有外源DNA的載體分子通過的感受態細胞(competent cell) 。轉化，是將
大腸桿菌感受態細胞的幾種制備方法protocol2
方法四：1、將1ml過夜培養的細菌（如DH52、TG1、TM101）接種于100ml2×YT培養于500ml燒瓶。于37℃刷烈振蕩，通常≥200rpm培養的細菌密度約OD550=0.2～0.5(5×107cells/ml),需2～4h。2、將培養物放于冰上致冷10min，于4℃離心細菌培養物，100
腺苷的實驗制備方法
1、對照品溶液的制備精密稱取腺苷對照品適量，加甲醇配制成1mL含40μg的對照品溶液。2、供試品溶液的制備取供試品20mL置100mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻超聲處理5分鐘，放置待沉淀完全，濾過，取許濾液50mL蒸干，殘渣加水20mL溶解，以水飽和的正丁醇提取4次，合并正丁醇提取液蒸干，殘渣加50
PAGE膠制備方法實驗
實驗試劑1. 5x樣品緩沖液（10ml）:0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50％甘油，2ml 10％的SDS，0.5ml巰基乙醇，1ml 1％溴酚藍，0.9ml蒸餾水。可在4℃保存數周，或在－20℃保存數月。2. 凝膠貯液：在通風櫥中，稱取丙烯酰胺30g，甲叉雙丙烯
轉基因小鼠預言新流感病毒
德國的研究者開發了一種轉基因小鼠，這種小鼠可以幫助科學家們發現新的可能導致全球流行病的流感病毒株。在一項研究中對小鼠進行了描述。“禽流感病毒在體內逃避 MxA 蛋白限制需要病毒核蛋白具有人類特征”這將于 4 月 10 日在實驗醫學雜志上發表。 甲型流感病毒從豬、禽類或其他動物物種傳播給人類時，
轉基因小鼠搭上西班牙軍隊“便機”
? 這些籠子里裝的是運抵大加那利島的Javier Castro Hern的轉基因小鼠，這些動物曾在西班牙馬德里被攔截數月。 被西班牙航空公司拒載運載的29只轉基因小鼠近日搭乘西班牙軍隊的便機飛往加那利群島，現在它們已經抵達目的地特納利夫島上的拉古納大學。 這些小鼠在美國培育，它們曾因伊
轉基因小鼠模型的建立(SOP)1
名稱：轉基因小鼠模型的建立(SOP)關鍵詞：轉基因小鼠目的：在動物體研究轉化基因原理：轉基因動物是指染色體基因組中整合有外源基因并能遺傳給后代的一類動物。整合到動物染色體基因組的外源基因稱為轉基因。轉基因技術則是指制備轉基因動物所需的一套技術，它涉及外源基因的構建、載體和受體的篩選、基因導人技術、供
轉基因小鼠模型的建立(SOP)2
[不足之處]（1）外源基因隨機整合；（2）個別原核不清晰，需進行特殊處理；（3）需大型精密儀器，費用昂貴；（4）操作周期相對較長。（二）實驗器材的準備1．輸精管切除術用器材：彎式有齒鑷、直式有齒鑷、顯微鑷、手術剪、自動小夾涂藥器、自動小夾、帶彎針4/0絲線及持針器、直徑為10cm塑料 Petri氏培
轉基因小鼠模型的建立(SOP)3
（2）受體母鼠的準備輸卵管轉移的受體鼠應該為4-6周齡大小，體重在20-25克左右，嚴禁用低體重以及超重母鼠，若體重較低，其體能不足以維持妊娠，可能導致受精卵的重新吸收；若體重較重，麻醉劑被吸收入脂肪組織，降低麻醉效果，可能使手術困難，而且脂肪組織的存在意味著靜脈的存在，所以手術時切掉脂肪組織可能導
轉基因小鼠模型的建立(SOP)5
4．顯微注射（1）導入DNA的制備：顯微注射首先涉及導入DNA的制備，顯微注射的轉入基因通常為去除載體序列的線狀DNA，轉基因所用載體是真核表達載體，即含有在哺乳動物細胞內表達的真核啟動子。所謂組織特異性的實現多是通過組織特異性啟動子來實現組織特異性表達的。制備轉基因小鼠，必須對待導入DNA進行分離
轉基因小鼠模型的建立(SOP)6
[洗卵管制作]1）? 點燃酒精燈，調節火焰到最佳。捏持玻璃毛細吸管或巴氏移液管在火焰上焰旋轉過火。2）? 當吸管開始變軟，快速撤離火焰，向外急劇扯拉使吸管變長，形成口徑大約200?l的吸管。注意制備過程中離開火焰的時間以及扯拉的力度，盡量保證制備吸管的一致性。3）? 為吸管評分，輕柔地折斷吸管，辨別