免疫熒光常見問題總結
1、問：免疫熒光：用免疫熒光方法做同樣的內容，組織切片和培養細胞，兩者操作過程中有哪些不同？參考見解：只是固定方法不同，細胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一樣的。2、問：近期要做免疫熒光雙標，不知哪位有免疫熒光雙標技術的詳細步驟以及注意事項？參考見解：我正在做冰凍組織切片的免疫熒光的雙染。有些體會：（1）選取primary antibodies時要來源于兩種不同的動物，我用的是來源于rabbit和rat的抗體，secondary antibodies則是不同熒光信號標記的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC（綠）和donkey anti-rat-Tex-Red（紅）。（2）我的做法是兩種primary antibodies同時孵育，然后兩種secondary antibodies同時孵育。抗體濃度、孵育時間要認真摸索，我感覺primary antibodies 4度孵育過夜比較好，背景比較干凈。......閱讀全文
免疫熒光常見問題總結
1、問：免疫熒光：用免疫熒光方法做同樣的內容，組織切片和培養細胞，兩者操作過程中有哪些不同？參考見解：只是固定方法不同，細胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一樣的。2、問：近期要做免疫熒光雙標，不知哪位有免疫熒光雙標技術的詳細步驟以及注意事項？參考見解：我正在做冰凍組織切片的免疫熒光的雙
蛋白純化常見問題總結
蛋白純化過程中常遇見一些問題，這里整理了以下幾個蛋白純化實驗中遇見的問題及其解決方案。1)我現在手頭有個融合蛋白，純化的時候用助溶劑溶解后做了GST親和層析，之后用蛋白酶切割后卻發現目的蛋白沒有活性。請問有哪些可能會出現這種原因?怎么解決?測過基因序列，沒有問題。細胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助
Western－Blot常見問題總結
Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與或標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電
蛋白純化常見問題總結
蛋白純化過程中常遇見一些問題，這里整理了以下幾個蛋白純化實驗中遇見的問題及其解決方案。1)我現在手頭有個融合蛋白，純化的時候用助溶劑溶解后做了GST親和層析，之后用蛋白酶切割后卻發現目的蛋白沒有活性。請問有哪些可能會出現這種原因?怎么解決?測過基因序列，沒有問題。細胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助
蛋白純化常見問題總結（二）
3)Sephadex G-25(medium)柱脫鹽時，鹽濃度太高對柱效有影響嗎?若有，一般對鹽濃度限度如何?大家別客氣，除鹽對于濃度應該也是有一定的限制的，同樣的樣品鹽濃度高的自然要比濃度低的要在柱子上走的峰要寬些，相對需要的柱子的分辨率也要高點，但是在正常的范圍如1-2M應該影響不大，不過要除得
蛋白純化常見問題總結（一）
蛋白純化過程中常遇見一些問題，這里整理了以下幾個蛋白純化實驗中遇見的問題及其解決方案。1)我現在手頭有個融合蛋白，純化的時候用助溶劑溶解后做了GST親和層析，之后用蛋白酶切割后卻發現目的蛋白沒有活性。請問有哪些可能會出現這種原因?怎么解決?測過基因序列，沒有問題。細胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助
免疫熒光技術常見問題與解答
1、問：近期要做免疫熒光雙標，不知哪位有免疫熒光雙標技術的詳細步驟及其注意事項？?參考見解：我正在做冰凍組織切片的免疫熒光雙染。我的經驗是：?（1）選取一抗時要來源于兩種不同的動物，我用的是來源于rabbit和rat的抗體，二抗則是不同熒光信號標記的，我用的是donkey anti-rabbit-F
蛋白質純化常見問題總結
蛋白質純化過程中常遇見一些問題，這里整理了以下幾個蛋白質純化實驗中遇見的問題及其解決方案。1)我現在手頭有個融合蛋白，純化的時候用助溶劑溶解后做了GST親和層析，之后用蛋白酶切割后卻發現目的蛋白沒有活性。請問有哪些可能會出現這種原因?怎么解決?測過基因序列，沒有問題。細胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我
蛋白純化系統化常見問題總結
使用Blupadstart蛋白純化系統過程中常遇見一些問題，這里整理了以下幾個蛋白純化實驗中遇見的問題及其解決方案。? ? ? ??1)我現在手頭有個融合蛋白，純化的時候用助溶劑溶解后做了GST親和層析，之后用蛋白酶切割后卻發現目的蛋白沒有活性。請問有哪些可能會出現這種原因?怎么解決?測過基因序列，
蛋白純化實驗一些常見問題總結
蛋白純化過程中常遇見一些問題，這里整理了下幾個蛋白純化實驗中的遇見的問題及其解決方式。1)我現在手頭有個融合蛋白，純化的時候用助溶劑溶解后做了GST親和層析，之后用蛋白酶切割后卻發現目的蛋白沒有活性。請問有哪些可能會出現這種原因?怎么解決?測過基因序列，沒有問題。細胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助
蛋白純化實驗一些常見問題總結
蛋白純化過程中常遇見一些問題，這里整理了下幾個蛋白純化實驗中的遇見的問題及其解決方式。1)我現在手頭有個融合蛋白，純化的時候用助溶劑溶解后做了GST親和層析，之后用蛋白酶切割后卻發現目的蛋白沒有活性。請問有哪些可能會出現這種原因?怎么解決?測過基因序列，沒有問題。細胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助
SSCP檢測SNP原理，步驟及常見問題總結整理
SSCP原理：sscp稱為單鏈構象多態性，它是基于DNA構象來檢測PCR產物單鏈堿基微小差異的方法，因其檢測敏感，快速和所需裝置簡便而在分子生物學各個領域廣泛應用。但該方法的試驗結果受多種因素的影響，如：PCR產物，溫度，電壓，PAGE膠的濃度和交聯度等，因而重復性比較差。因此在做SSCP時要注意各
SSCP檢測SNP原理，步驟及常見問題總結整理
SSCP原理：sscp稱為單鏈構象多態性，它是基于DNA構象來檢測PCR產物單鏈堿基微小差異的方法，因其檢測敏感，快速和所需裝置簡便而在分子生物學各個領域廣泛應用。但該方法的試驗結果受多種因素的影響，如：PCR產物，溫度，電壓，PAGE膠的濃度和交聯度等，因而重復性比較差。因此在做SSCP時要注意各
冷凍干燥機干燥前后常見問題總結
1?噴瓶現象????噴瓶是影響凍干制劑外觀質量的重要因素，噴瓶的原因主要在三個方面，藥液中的氣泡、預凍、干燥速率。????制品在分裝過程中，當灌裝機溶液分注入瓶中時，由于液體流速較快，形成一定量的氣泡存在于瓶內液體中，此時應將裝瓶液體放置一定時間讓氣泡充分逸出，否則旗袍被凍結在制品內部，當升華過程抽
移液器使用常見問題及解決方法總結
?? 移液器，對于實驗室人員而言，幾乎是都要在實驗室中用到的，并且在使用的過程中，也會遇到一些列問題。???? 一、移液器使用常見問題：???? A.活塞/吸頭 泄漏?????B.吸頭不適合移液器???? C.二次使用吸頭?????D.移液器吸頭沒有碰到容器壁???? E.濕度差異???? F.沒有
天平使用常見問題總結：告別“假天平”，遠離稱量雷區
天平在使用過程中除了人為因素外，以下八大環境因素也會影響其稱量性，需要特別留意。就天平使用的常見問題小編總結以下解決方法，讓你遠離稱量雷區，輕松應對稱量困惱。1、空氣流動因素解決方法-避免空氣流動-使用防風罩-使用網格稱盤2、溫差因素解決方法-讓天平在實驗室穩定一段時間-把樣品放置在天平附近3、震動
免疫組化的經驗總結（1）－常見問題
免疫組織化學的概念：?免疫組化是利用抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑?(熒光素、酶、金屬離子、同位素)?顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學。免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。免疫組化實驗所用的組織和細胞
天平使用常見問題總結：告別“假天平”，遠離稱量雷區
天平在使用過程中除了人為因素外，以下八大環境因素也會影響其稱量精準性，需要特別留意。就天平使用的常見問題小編總結以下解決方法，讓你遠離稱量雷區，輕松應對精準稱量困惱。1、空氣流動因素解決方法-避免空氣流動-使用防風罩-使用網格稱盤2、溫差因素解決方法-讓天平在實驗室穩定一段時間-把樣品放置在天平附近
來自耶魯大學的PCR常見問題的精辟總結
Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.?COMPONENTVOLUMEFINAL CON
ELISA中常見問題及解決方法經驗總結
【摘要】：ELISA 試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。相關專題 ELISA免疫實驗技術 e
免疫熒光
Immunofluorescence Technique?(Spector Lab)protocol for immunofluorescence on cells??Immunofluorescence Protocol?(Walter Steffen)Methanol fixationForma
RNAi總結
RNA干涉（RNAi）是指雙鏈RNA分子使基因表達沉寂的現象，是在線蟲中發現的，在 1998年的一篇Nature論文中被公諸于眾。過去幾年中，科研工作者已明確轉錄后基因沉默現象普遍存在于動、植物中，在機體防御病毒入侵和轉座子沉默效應中起著重要作用。近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義
貧血總結
缺鐵性貧血：一鐵的代謝：1.鐵的分布：功能狀態鐵、貯存鐵2.鐵的來源和吸收：需要20～25mg/d，大部分來自衰老的紅細胞破壞，食物中攝取1~1.5mg/d可維持鐵的平衡3.鐵的運輸：高鐵與轉鐵蛋白結合，運到各組織，通過胞飲進入細胞，在胞內再次還原為亞鐵4.再利用和排泄：RBC正常壽命為120天5.
免疫熒光簡介
免疫熒光技術（Immunofluorescence technique ）又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。
間接免疫熒光
實驗方法原理固定細胞，順序加入一抗和二抗，通過 UV 光觀察。實驗材料細胞培養在蓋玻片 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?產生一抗種屬的二抗 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
間接免疫熒光
實驗方法原理固定細胞，順序加入一抗和二抗，通過 UV 光觀察。實驗材料細胞培養在蓋玻片產生一抗種屬的二抗豬血清或其他封閉劑D-PBSA試劑、試劑盒新鮮制備的固定劑用含10%的FBS培養液封固劑實驗步驟1. 用 D-PBSA 洗滌長有細胞的蓋玻片，置于合適的培養皿中。如 13 mm 蓋玻片可用24 孔
直接免疫熒光
中文名稱直接免疫熒光英文名稱direct immunofluorescence定 義直接用熒光標記抗體來研究特異性抗原在細胞內定位的方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
免疫熒光概述
免疫熒光（immunofluorescence technic）Coons等于1941年首次采用熒光素進行標記而獲得成功。這種以熒光物質標記抗體而進行抗原定位的技術稱為熒光抗體技術（fluorescentantibodytechnique）。 用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法；用
免疫熒光技術
免疫熒光技術是標記免疫技術中發展最早的一種．它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。Coons等于1941年首次采用熒光素進行標記抗體獲得成功。經過幾十年的發展，該技術已相當成熟。 用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的
免疫熒光技術
實驗方法原理 直接法是以熒光素標記的抗體直接與標本內的抗原反應，形成抗原—熒光素標記抗體復合物。根據熒光的分布位置及強度，確定相應抗原的存在與否及其所在部位。實驗材料 抗體試劑、試劑盒 PBS伊文氏蘭儀器、耗材 顯微鏡實驗步驟 1. 標本經固定后，PBS洗滌3×3 分鐘；2. 加熒光素標記的抗體，濕