細胞生物基本方法：肌組織細胞培養
肌組織細胞培養1）骨骼肌細胞培養1．殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成0.3～0.5厘米小塊。2．用不含鈣鎂離子的Hanks液配的0.25％胰蛋白酶消化，無菌紗網或紗布濾過，合成培養基加10％小牛血清培養，為促進分化可加1％的胎汁。3．細胞接種量為2×106/皿，接種在膠原或明膠的底物上能促進細胞分化。明膠制備比較簡單，常用Hanks液配的0.01％明膠。 2） 肌細胞培養1．選新鮮受精雞卵，置溫箱中孵育（溫箱中放有水槽，以維持箱內溫度），每日翻動一次（180度），孵育9～12天。2．取雞胎法相間《組織培養和分子細胞學技術》53頁。3．用眼科剪剪開胸腔，剝出心臟，置入皿中用Hanks液漂洗1～2次。4．小心剪除大的動靜脈，保留心室肌，用組織塊或消化培養法均可。......閱讀全文
細胞生物基本方法：肌組織細胞培養
肌組織細胞培養1）骨骼肌細胞培養1．殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成0.3～0.5厘米小塊。2．用不含鈣鎂離子的Hanks液配的0.25％胰蛋白酶消化，無菌紗網或紗布濾過，合成培養基加10％小牛血清培養，為促進分化可加1％的胎汁。3．細胞接種量為2×106/皿，接種在膠原或明膠的底物上能促進細胞分化
細胞生物基本方法：神經組織細胞培養
神經組織細胞培養1．獲取腦組織后，先仔細剝除腦膜和血管等纖維成分，置入Hanks液中漂洗1～2次后，置于30～50倍的Hanks液中，腦組織比較柔軟，反復吹打即可制成細胞懸液。2．為排除脂肪成分和其它碎塊，把懸液注入離心管中，在室溫直立5～10分鐘后，細胞或細胞團塊自然下沉，脂肪等雜物易漂浮于懸液表
細胞生物基本方法：結締組織類細胞培養
結締組織類細胞培養1）成纖維細胞培養用人或動物胚體為好；動物可用小鼠或雞胚，去頭和內臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養；如為人胚，可取皮膚培養。幼兒包皮是培養成纖維細胞的很好對象。?2）??巨噬細胞培養1．實驗前三天，向每只小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml（勿注入腸內）。2．引頸殺死動物，手
肌組織細胞培養實驗
骨骼肌細胞培養實驗 心肌細胞培養實驗 神經組織細胞培養實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 肌組織
肌組織細胞培養實驗
實驗材料 肌組織試劑、試劑盒 Hanks胰蛋白酶血清胎汁儀器、耗材 紗布實驗步驟 動物胚或幼體的大腿肌組織為最好的培養材料。取材常用生后1~2 天的乳鼠（Wistar 大鼠更好）。1. ?殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成0.3~0.5 厘米小塊；2. ?用不含鈣鎂離子的Hanks液配的0.25 %胰
肌組織細胞培養實驗——神經組織細胞培養實驗
實驗方法原理神經組織主要由兩種神經細胞（神經元）和神經膠質細胞組成。神經元為高度分化的細胞，在組織發生晚期已失掉增殖能力，對生存條件要求高，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或在加入神經生長因子（NGF）和膠質細胞因子時，才能生存，并可能出現一定程度的分化現象，如長出突起等，但卻難使之增殖；即使
細胞生物基本方法：腫瘤細胞培養
腫瘤細胞培養特殊之處在于成纖維細胞的排除（成纖維細胞常與腫瘤細胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤組織）。有以下一些方法：1．機械刮除法2．反復帖壁法3．消化排除法4．膠原酶消化法?1）??機械刮除法1．標記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養瓶皿的背面圈下生長腫瘤細胞的部位。2．刮除：棄掉培養液，把無菌膠刮伸入
細胞生物基本方法：上皮細胞培養
上皮細胞培養1）表皮細胞培養1．取材：取外科植皮或手術殘余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產流產兒皮膚更好，切成0.5～1平方厘米小塊。2．EDTA處理：先置入0.02％EDTA中室溫置5分鐘。3．冷消化：換入0.25％胰蛋白酶中，置4℃過夜。4．分離：取出皮膚，用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開。5．
肌組織細胞培養實驗——心肌細胞培養實驗
實驗方法原理心肌組織是最早利用的培養材料，Carrel曾長期培養過雞胚心肌組織，至今心肌仍不失為好的培養物。最常用的是雞胚心肌、小鼠、大鼠以及人胎兒心肌等都可應用。心肌是比較容易培養和生長的組織，可應用多種方法進行培養，如懸滴培養、組織塊培養和消化培養法等，主要取心室肌培養，均能獲得良好的生長效果。
肌組織細胞培養實驗——骨骼肌細胞培養實驗
實驗材料肌組織試劑、試劑盒Hanks胰蛋白酶血清胎汁儀器、耗材紗布實驗步驟動物胚或幼體的大腿肌組織為最好的培養材料。取材常用生后1~2 天的乳鼠（Wistar 大鼠更好）。1. ?殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成0.3~0.5 厘米小塊；2. ?用不含鈣鎂離子的Hanks液配的0.25 %胰蛋白酶消
細胞生物基本方法：常規組織培養法
常規組織培養法1）初代消化培養法1.??????準備：取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2.??????布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。3.??????處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染
細胞培養基本方法
= 細胞培養基本方法 =?(一)準備和安裝過濾器 (二)合成培養基的配制 (三)小牛血清的處理 (四)生長培養基的配制(五)凍存細胞的復蘇 (六)傳代 (七)凍存 (八)注意事項 (一)準備和安裝過濾器 清洗好過濾器，干燥，放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜，用布包裝好，
細胞培養基本方法
一)準備和安裝過濾器??清洗好過濾器，干燥，放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜，用布包裝好，15磅20 min進行高壓滅菌處理。 在超凈臺內打開過濾器架好，膠管一端接入濾泵再插入待除菌的液體中，出口端膠管深入到已消毒好的瓶子中。用泵過濾，過濾后要檢查濾膜是否完好無損。?(二)合成培養基的配制?1、根
細胞培養的基本方法（二）
第四節 細胞計數及活力測定一、原理 培養的細胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好，所以要進行細胞計數。計數結果以每毫升細胞數表示。細胞計數的原理和方法與血細胞計數相同。在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力，由組織中分離細胞一般也要檢查活力，以了解分
細胞培養的基本方法細胞分離技術（一）
細胞分離技術一、從原代組織中分離細胞 將組織塊分離（散）成細胞懸液的方法有多種，最常用的是機械解離細胞法、酶學解離細胞法以及螯合劑解離細胞法。從原代組織中獲得單細胞懸液的一般方法是酶解聚。細胞暴露在酶中的時間要盡可能的短，以保持最大的活性。下列步驟可以解聚整個組織，獲得較高產量的有活性細胞。1.胰蛋
細胞培養的基本方法細胞分離技術（二）
1.懸浮細胞 ●計數將要凍存的活細胞。細胞應該處于對數生長期。以大約200～400g離心5分鐘沉淀細胞，使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。 ●以1×107到5×107細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養基中再次懸浮細胞，或者以0.5×107到1×107在無血清培養基中，再次懸浮細胞。 ●
細胞分離技術是細胞培養的基本方法
從原代組織中分離細胞 將組織塊分離（散）成細胞懸液的方法有多種，最常用的是機械解離細胞法、酶學解離細胞法以及螯合劑解離細胞法。從原代組織中獲得單細胞懸液的一般方法是酶解聚。細胞暴露在酶中的時間要盡可能的短，以保持最大的活性。下列步驟可以解聚整個組織，獲得較高產量的有活性細胞。1.胰蛋白酶 (Tryp
關于微生物細胞培養的基本介紹
微生物多為單細胞生物，野生生存條件比較簡單。所以微生物人工培養的條件比動植物細胞簡單得多。其中厭氧微生物培養比好氧微生物復雜，因為嚴格厭氧需要維持二氧化碳等非氧的惰性氣體濃度，而好氧微生物則只需要通過不斷攪拌提供無菌氧氣。微生物對培養條件要求不如動植物細胞那樣苛刻，玉米漿、蛋白胨、麥芽汁、酵母膏
結締組織類細胞培養
一、成纖維細胞培養用人或動物胚體為好；動物可用小鼠或雞胚，去頭和內臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養；如為人胚，可取皮膚培養。幼兒包皮是培養成纖維細胞的很好對象。二、巨噬細胞培養1．實驗前三天，向每只小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml（勿注入腸內）。2．引頸殺死動物，手提鼠尾將全鼠浸入70％酒
結締組織類細胞培養實驗——巨噬細胞培養實驗
實驗方法原理巨噬細胞屬免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得，便于培養，并可進行純化。但屬不繁殖型細胞群，難以長期生存，好的條件下僅能生活2~3 周，因之多用作初代培養。巨噬細胞也能建成無限細胞系；大多來自小鼠，如P388D-1、J774A.1、RAW
細胞生物基本方法：復蘇
復蘇方法1．從液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴，浸入了液氮，取出后因安剖內液氮迅速氣化而發生爆炸，因此應帶有防護眼睛和手套。2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時搖動，盡快解凍。3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開蓋，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中，
細胞生物基本方法：常用轉化細胞
幾種常用轉化細胞和轉化技術1）致癌化學物轉化細胞：轉化敘利亞地鼠胚胎細胞實驗1．取材：妊娠后第13天取材，取數個同窩胚胎，去頭和內臟，在無菌條件下剪碎至米粒大小，再用0.25％胰蛋白酶（含0.01％EDTA）37℃消化30分鐘，濾過、低速離心、吸除消化液、加入營養液、制備成細胞懸液、接種入1875p
結締組織類細胞培養實驗
成纖維細胞培養實驗 巨噬細胞培養實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 包括人在內的各種成纖維細胞都很容易培養，也是其它組織培養時的副產物，極易獲得。人的成纖維細胞不僅
細胞培養方法
1、收到細胞，請查看瓶子是否有破裂，培養基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快聯系。2、收到細胞，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞。因路途耽擱等因素，細胞會有部分脫落。請在超凈臺中將培養瓶里的培養基吸出一部分，保留大約5-6ml左右在培養瓶里。將培養瓶置于37℃培養箱中培養，蓋子微微擰松。吸出的培養基可以
細胞培養方法
細胞培養方法：1.玻璃吸管和玻璃培養瓶的消毒:高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2)干烤消毒140度2小時以上;2.無菌工作臺先清洗后用75%酒精擦拭干凈,紫外線照射40分鐘以上;各種培養板照射3小時以上;3.培養基(pH7.2)和血清配制好后要做無菌試驗:將血清按10%加入培養基內,用無菌的玻璃離心管或玻
細胞培養方法
一、準備工作 準備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試，具體內容可參閱有關文獻。 二、取材
細胞培養方法
一、準備工作? 準備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試，具體內容可參閱有關文獻。?二、取
結締組織類細胞培養實驗——成纖維細胞培養實驗
實驗方法原理包括人在內的各種成纖維細胞都很容易培養，也是其它組織培養時的副產物，極易獲得。人的成纖維細胞不僅容易培養，而且生物性狀穩定，很難發生轉化，成為二倍體細胞培養的主要對象，人的二倍體細胞系，主要為成纖維細胞。實驗材料細胞試劑、試劑盒胰蛋白酶儀器、耗材剪刀實驗步驟為獲取大量成纖維細胞培養，以便
細胞生物基本方法：凍存
凍存方法1．細胞：選對數生長期細胞，收集細胞24小時前換液一次。2．計數：按常規方法把細胞制成細胞懸液，計數，令細胞密度達5×106/ml，離心去上清，吸入離心管中。3．凍存液：先用培養液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO凍存液，按上法一滴滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸
細胞培養的基本條
細胞培養是指從體內組織取出細胞在體外模擬體內環境下，使其生長繁殖，并維持其結構和功能的一種培養技術。細胞培養的培養物可以是單個細胞，也可以是細胞群。以下是細胞培養的基本條件：?一、合適的細胞培養基?合適的細胞培養基是體外細胞生長增殖的重要的條件之一，培養基不僅提供細胞營養和促使細胞生長增殖的基礎物質