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    發布時間:2019-04-30 22:19 原文鏈接: 細胞生物基本方法:腫瘤細胞培養

    腫瘤細胞培養

    特殊之處在于成纖維細胞的排除(成纖維細胞常與腫瘤細胞同時混雜生長,致難以純化腫瘤組織)。有以下一些方法:

    1.機械刮除法

    2.反復帖壁法

    3.消化排除法

    4.膠原酶消化法

     

    1)  機械刮除法

    1.標記:鏡下觀察,用不脫色筆在培養瓶皿的背面圈下生長腫瘤細胞的部位。

    2.刮除:棄掉培養液,把無菌膠刮伸入瓶皿中,肉眼或顯微鏡窺視下,刮除無標記空間。

    3.Hanks液沖洗一兩次,洗除被刮掉的細胞。

    4.注入培養液繼續培養,如發現仍有成纖維細胞殘留,可重復刮除至完全除掉為止。

     

    2)  反復帖壁法

    1.待細胞生長達一定數量后,倒出舊培養液,用胰酶消化后,Hanks沖洗2次,加入不含血清的培養液,吹打制成細胞懸液。

    2.取編號為ABC三個培養瓶。首先把懸液接種入A培養瓶中,置溫箱中靜止培養520分鐘后,輕輕傾斜培養瓶,讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養液,再接種入B培養瓶中后,向A瓶中補充少許完全培養液置溫箱中繼續培養。

    3.培養B瓶中細胞520分鐘后,按處理A的方法,把培養液注入C培養瓶中,再向B瓶補加完全培養基。

     

    3)消化排除法

    1.先是用0.5%胰蛋白酶和0.02EDTA11)混合液漂洗培養基細胞一次,然后再換成新的混合繼續消化,并在倒置顯微鏡下窺視和不時搖動培養瓶,到半數細胞脫落下來后,便立即停止消化。

    2.把消化液吸入離心管中,離心去上清,吸入另瓶中,加培養液置溫箱中培養,向原瓶內也補加新的培養液繼續培養。用此法處理后,成纖維細胞比腫瘤細胞易先脫落,經過幾次反復處理,可能把成纖維細胞除凈。

     

    4)膠原酶消化法

    1.可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理,邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視,當發現成纖維細胞被除掉后,即終止消化。

    2.Hanks洗滌處理一次后,更換新培養液,繼續培養,可獲純凈腫瘤細胞。如成纖維細胞未被除凈,可再次重復。



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