融合蛋白的免疫篩選實驗——基本方案
實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LB頂層瓊脂糖疊氮鈉第一抗體儀器、耗材硝酸纖維素濾膜實驗步驟1. 在150 ml LB 平板上滴定λgt11 cDNA文庫的滴度，宿主菌為大腸桿菌LE392菌株，每個平板使用7 ml 1%LB頂層瓊脂。2. 選擇適當的滴度鋪平板，于37℃溫育8 h。 3. 將直徑132 mm 硝酸纖維素濾膜分別編號，放入上述已培養8 h的平板中，于37℃溫育過夜。 4. 用針頭刺孔并用印度墨汁在每張濾膜上作一標記，然后取出濾膜。5. 在室溫用免疫篩選緩沖液洗膜30 min，以封閉濾膜并洗去膜上的殘留細菌，重復洗滌2~4次。 6. 將第一抗體（稀釋于免疫篩選緩沖液中，終濃度為0.5~10 μg/ml）加到裝有濾膜的塑料袋中，熱封口后置40℃水平搖床上反應2~24 h。 7. 于4℃用免疫篩選緩沖液......閱讀全文
融合蛋白的免疫篩選實驗——基本方案
實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LB頂層瓊脂糖疊氮鈉第一抗體儀器、耗材硝酸纖維素濾膜實驗步驟1. ?在150 ml LB 平板上滴定λgt11 cDNA文庫的滴度，宿主菌為大腸桿菌LE392菌株，每個平板使用7 ml 1%LB頂層瓊脂。2. ?選擇適當的滴度鋪平板，于37℃溫育8 h。?3. ?將直徑1
融合蛋白的免疫篩選實驗
基本方案 IPTG法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌 試劑、試劑盒
融合蛋白的免疫篩選實驗
實驗材料 大腸桿菌試劑、試劑盒 LB頂層瓊脂糖疊氮鈉第一抗體儀器、耗材 硝酸纖維素濾膜實驗步驟 1. ?在150 ml LB 平板上滴定λgt11 cDNA文庫的滴度，宿主菌為大腸桿菌LE392菌株，每個平板使用7 ml 1%LB頂層瓊脂。2. ?選擇適當的滴度鋪平板，于37℃溫育8 h。?3. ?
融合蛋白的免疫篩選實驗——IPTG法
實驗方法原理用抗體篩選λgt11 cDNA文庫時，可待噬斑長到一定裎度方可誘導表達融合蛋白，篩選到陽性克隆的成功概率就可能大大增加。噬菌體生長3~4 h 后，將含誘導劑IPTG的濾膜放入噬斑平板，即可誘導β-半乳糖苷酶-cDNA融合蛋白的表達，繼續在37℃培養，然后按基本方案用抗體對影印濾膜進行篩選
免疫篩選實驗
根據抗原-抗體相互作用的原理從群體中選出目的物的技術。如用抗體檢測表達型的基因文庫所合成的蛋白質，從而篩選出目的基因的克隆。實驗方法基本方案 實驗材料 cDNA? 試劑、試劑盒 BHI 氯霉素 NaOH SSC 氯仿 異戊醇 TES SDS mRNA 甲硫氨酸 乙醇 乙酸鈉 免疫沉淀緩沖液? 儀器、
免疫篩選實驗
根據抗原-抗體相互作用的原理從群體中選出目的物的技術。如用抗體檢測表達型的基因文庫所合成的蛋白質，從而篩選出目的基因的克隆。實驗材料cDNA試劑、試劑盒BHI氯霉素NaOHSSC氯仿異戊醇TESSDSmRNA甲硫氨酸乙醇乙酸鈉免疫沉淀緩沖液儀器、耗材轉子硝酸纖維濾膜離心管微量多孔洗滌儀實驗步驟1.
免疫篩選實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 cDNA 試劑、試劑盒
免疫篩選實驗
實驗材料 cDNA試劑、試劑盒 BHI氯霉素NaOHSSC氯仿異戊醇TESSDSmRNA甲硫氨酸乙醇乙酸鈉免疫沉淀緩沖液儀器、耗材 轉子硝酸纖維濾膜離心管微量多孔洗滌儀實驗步驟 1. ?往微量滴定板的每孔中加入250 μl 含適當抗生素的選擇性BHI培養液，并分別接種獨立的cDNA克隆，37℃溫育過
融合蛋白的基本介紹
融合蛋白(fusion protein)有兩種不同的含義，一種是通過DNA重組技術得到的兩個基因重組后的表達產物，另一種是介導兩個細胞質膜融合的一組蛋白，如在仙臺病毒脂雙層外側小葉中含有的兩種糖蛋白之一，介導病毒被膜與宿主細胞質膜的融合作用。另一種糖蛋白是血細胞凝集素神經酰胺酶。 兩個不同的蛋白
構建融合蛋白的基本方法
構建融合蛋白的基本方法是將具有特定功能的天然或人工編碼的多肽序列模塊化，并使用基因編碼的DNA序列模板合成，隨后將第1個蛋白的終止密碼子刪除，再接上帶有終止密碼子的第2個蛋白基因，以實現兩個基因的共同表達。通過控制每一個功能肽模塊在整體蛋白材料中的確切位置和密度，人們便能夠根據實際需要改變融合蛋白的
構建融合蛋白的基本方法
構建融合蛋白的基本方法是將具有特定功能的天然或人工編碼的多肽序列模塊化，并使用基因編碼的DNA序列模板合成，隨后將第1個蛋白的終止密碼子刪除，再接上帶有終止密碼子的第2個蛋白基因，以實現兩個基因的共同表達。通過控制每一個功能肽模塊在整體蛋白材料中的確切位置和密度，人們便能夠根據實際需要改變融合蛋白的
構建融合蛋白的基本方法
構建融合蛋白的基本方法是將具有特定功能的天然或人工編碼的多肽序列模塊化，并使用基因編碼的DNA序列模板合成，隨后將第1個蛋白的終止密碼子刪除，再接上帶有終止密碼子的第2個蛋白基因，以實現兩個基因的共同表達。通過控制每一個功能肽模塊在整體蛋白材料中的確切位置和密度，人們便能夠根據實際需要改變融合蛋白的
構建融合蛋白的基本方法
構建融合蛋白的基本方法是將具有特定功能的天然或人工編碼的多肽序列模塊化，并使用基因編碼的DNA序列模板合成，隨后將第1個蛋白的終止密碼子刪除，再接上帶有終止密碼子的第2個蛋白基因，以實現兩個基因的共同表達。通過控制每一個功能肽模塊在整體蛋白材料中的確切位置和密度，人們便能夠根據實際需要改變融合蛋白的
融合蛋白的酶解實驗
基本方案 輔助方案 備選方案1 輔助方案 備選方案2 備選方案3 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 融合蛋白
融合蛋白的酶解實驗
實驗材料 融合蛋白試劑、試劑盒 SDS儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機實驗步驟 1. ?準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間：?（1）反應1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室溫下反應（2）反應2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（
GST－融合蛋白沉降實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞裂解液 其中蛋白質 35S 用標記 試劑、試劑盒 裂解緩沖液 SDS 聚丙烯酰胺凝膠
GST－融合蛋白沉降實驗
實驗材料 細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒 裂解緩沖液SDS 聚丙烯酰胺凝膠探針GST 蛋白儀器、耗材 沸水浴翻轉祥品旋轉儀谷胱甘肽瓊脂糖球珠實驗步驟 材料緩沖液和溶液將緩沖液稀釋到適當濃度。裂解緩沖液20 mmol/LTris-Cl(pH8.0)200 mml/L NaCl1 mm
GST－融合蛋白沉降實驗
GST 沉降實驗與 far western(方案 2) 相比有—個優點：探針蛋白是在更自然的環境下與可能的搭檔蛋白孵育，因而增強了相互作用的有效性。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒裂解
融合病毒蛋白的基本信息
中文名稱融合病毒蛋白英文名稱fusin定 義淋巴細胞表面趨化因子受體蛋白。是人類免疫缺陷病毒感染CD4細胞的最初結合位點，結合后病毒與細胞融合進入細胞。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞免疫（二級學科）
構建融合蛋白的基本方法介紹
構建融合蛋白的基本方法是將具有特定功能的天然或人工編碼的多肽序列模塊化，并使用基因編碼的DNA序列模板合成，隨后將第1個蛋白的終止密碼子刪除，再接上帶有終止密碼子的第2個蛋白基因，以實現兩個基因的共同表達。通過控制每一個功能肽模塊在整體蛋白材料中的確切位置和密度，人們便能夠根據實際需要改變融合蛋白的
融合蛋白的酶解實驗2
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDS鹽酸胍CaCl2儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?將融合蛋白在≥10倍體積的20 mmol/l Tris·Cl（pH7.4）/6 mol/l 鹽酸胍中透析4 h，或將鹽酸胍加入融合蛋白中至終濃度為6 mol/l。2. ?將樣品在100倍體積的20 mmol
融合蛋白的酶解實驗4
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDS鹽酸胍CaCl2儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?將融合蛋白在≥10倍體積的20 mmol/l Tris·Cl（pH7.4）/6 mol/l 鹽酸胍中透析4 h，或將鹽酸胍加入融合蛋白中至終濃度為6 mol/l。2. ?將樣品在100倍體積的20 mmol
融合蛋白的酶解實驗5
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDSGST清洗緩沖液GST洗脫緩沖液儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?在20或50 ml 帶球旋蓋的試管中，用20倍體積含1%Triton X-100的PBS液洗滌結合在谷胱甘肽-瓊脂糖珠的GST融合蛋白。室溫下，在臺式離心機上以500 g 離心10 s 沉淀
融合蛋白的酶解實驗3
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDS鈉鹽凝血酶裂解液凝血酶儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?準備兩個小量預試驗以確定最佳裂解反應條件：?（1）反應1：20 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液（在合適的緩沖液中）及0.2 μg 凝血酶。（2）反應2：5 μl 1 mg/ml?融合蛋白溶液（模擬
GST融合蛋白的親和純化實驗
實驗方法原理瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用 1/10 的 GST 融合體加樣做平行 SDS-PAGE 凝膠電泳并染色以便更確切地比較 GST 融合體蛋白帶。另外，融合蛋白的降解可能導致誘餌蛋白的量減少，尤其是當
融合蛋白的酶解實驗1
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDS儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間：?（1）反應1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室溫下反應（2）反應2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（模擬消化
GST融合蛋白的親和純化實驗
實驗方法原理 瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用 1/10 的 GST 融合體加樣做平行 SDS-PAGE 凝膠電泳并染色以便更確切地比較 GST 融合體蛋白帶。另外，融合蛋白的降解可能導致誘餌蛋白的量減少
融合蛋白的酶解實驗6
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDSCaCl2重組牛腸激酶儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?做預試驗監測腸激酶與融合蛋白按不同比例混合后的裂解效率，準備5個反應體系：?（1）反應1至4：20 μl 融合蛋白；0.2 U、0.5 U、1 U和2 U的rEK，加50 mmol/l Tris·Cl
GST融合蛋白的親和純化實驗
GST 共結合純化法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用
基因置換實驗——構建融合蛋白
實驗材料菌株BY4741質粒PDB118試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液儀器、耗材YPD 平板YPD 液體培養基血球計數板SC-his平板實驗步驟YPD 平板 第 1 天將菌株 7-3 在 YPD 平板上劃單克隆，30°C 下培養兩天。第 3 天挑取單克隆，在 5 mlYPD 液體培養基中培養，30°C 過