GST融合蛋白的親和純化實驗
實驗方法原理 瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用 1/10 的 GST 融合體加樣做平行 SDS-PAGE 凝膠電泳并染色以便更確切地比較 GST 融合體蛋白帶。另外，融合蛋白的降解可能導致誘餌蛋白的量減少，尤其是當使用粗提物（見圖 19.2.1）而不是純化標記的實驗蛋白時。在對結合實驗蛋白進行定量時必須將降解量計算在內。實驗材料 E.coli 提取物（溶于瓊脂糖顆粒結合緩沖液） [35S] Met 標記蛋白質GST 融合蛋白（GST 和與瓊脂糖顆粒結合）試劑、試劑盒 1 × SDS 樣品緩沖液凝膠固定液（10% 冰醋酸／45% 甲醇）儀器、耗材 離心機和 Beckman TLA-100轉子微量離心機4℃ X射線膠片／儲存磷光子屏掃描光密度儀／磷光子顯像儀實驗步驟 1. E.coli 可溶性蛋白抽提物放置在冰上解凍。2. 每個反應取......閱讀全文
GST融合蛋白的親和純化實驗
實驗方法原理 瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用 1/10 的 GST 融合體加樣做平行 SDS-PAGE 凝膠電泳并染色以便更確切地比較 GST 融合體蛋白帶。另外，融合蛋白的降解可能導致誘餌蛋白的量減少
GST融合蛋白的親和純化實驗
GST 共結合純化法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用
GST融合蛋白的親和純化實驗
實驗方法原理瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用 1/10 的 GST 融合體加樣做平行 SDS-PAGE 凝膠電泳并染色以便更確切地比較 GST 融合體蛋白帶。另外，融合蛋白的降解可能導致誘餌蛋白的量減少，尤其是當
GST融合蛋白純化方法
Abstract:?Many people have vented out frustration over insoluble GST-fused proteins. This is a protocol for enzymatically active soluble GST-fused pro
GST融合蛋白純化的原理
GST純化系統其實就是凝膠親和層析系統。該純化柱中，凝膠手臂上通過硫鍵結合一個谷胱甘肽。然后利用谷胱甘肽與谷胱甘肽巰基轉移酶（即GST）之間酶和底物的特異性作用力，使得帶GST標簽的融合蛋白能夠與凝膠上的手臂谷胱甘肽結合，從而將帶標簽的蛋白與其他蛋白分離開。
GST融合蛋白純化——篩選表達株
Purification of GST fusion proteins in?E.coli?GSTSugden lab,McArdle Laboratory for?Cancer Research?,University of Wisconsin-Madison Medical SchoolScre
GST－融合蛋白沉降實驗
實驗材料 細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒 裂解緩沖液SDS 聚丙烯酰胺凝膠探針GST 蛋白儀器、耗材 沸水浴翻轉祥品旋轉儀谷胱甘肽瓊脂糖球珠實驗步驟 材料緩沖液和溶液將緩沖液稀釋到適當濃度。裂解緩沖液20 mmol/LTris-Cl(pH8.0)200 mml/L NaCl1 mm
GST－融合蛋白沉降實驗
GST 沉降實驗與 far western(方案 2) 相比有—個優點：探針蛋白是在更自然的環境下與可能的搭檔蛋白孵育，因而增強了相互作用的有效性。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒裂解
GST－融合蛋白沉降實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞裂解液 其中蛋白質 35S 用標記 試劑、試劑盒 裂解緩沖液 SDS 聚丙烯酰胺凝膠
GST融合蛋白（GST－fusion－protein－purification）的表達與純化
原理GST 純化系統是利用GST （glutathione-S-transferase ）融合蛋白與固定的谷胱甘肽（GSH）通過硫鍵共價親和，通過GSH交換洗脫的原理來進行純化 。1ml樹脂大約可結合5-8 mg融合蛋白，并可反復使用數次。試劑u IPTG（異丙基硫代-β-D-半乳糖苷） 2
谷胱甘肽瓊脂糖親和層析純化融合蛋白實驗
pGEX 載體表達的外源蛋白與谷胱甘肽 S 轉移酶融合，因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進行純化。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料表達 GST 融合蛋白的大腸桿菌細胞試劑、試劑盒二硫蘇糖醇谷胱甘肽洗脫緩沖液磷酸緩沖鈉鹽溶液Tri
谷胱甘肽瓊脂糖親和層析純化融合蛋白實驗
實驗材料 表達 GST 融合蛋白的大腸桿菌細胞試劑、試劑盒 二硫蘇糖醇谷胱甘肽洗脫緩沖液磷酸緩沖鈉鹽溶液TritonX-100DNase溶菌酶RNase凝血酶、腸激酶或 Xa 因子溶液SDS-聚丙烯酰胺凝膠儀器、耗材 SorvallSS-34 轉頭或相當的轉頭谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂皮下注射針頭實驗步驟
谷胱甘肽瓊脂糖親和層析純化融合蛋白實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 表達 GST 融合蛋白的大腸桿菌細胞 試劑、試劑盒 二硫蘇糖醇 谷胱甘肽洗脫緩沖液 磷酸
GST融合蛋白表達與純化的實驗步驟與注意事項（一）
GST表達融合蛋白?pGEX-KG大小：5006bp，氨芐青霉素抗性(Ampr)，IPTG誘導表達酶切位點：BamHI 930、SmaI 937、EcoRI 962、XbaI 966、NcoI 974、SalI 980、XhoI 985、SacI 992、HindIII 994GST分子量：構建pG
GST融合蛋白表達與純化的實驗步驟與注意事項（二）
7、轉化BL21(DE3)pLysS菌株檢測GST融合蛋白的表達(1)冰上融化BL21(DE3)pLysS感受態細胞(天根)(2)2 ml離心管中，加入25μl BL21+ 3μl質粒(300-500ng)，混勻(質粒≤感受態1/10)(3)冰上放置30min(4)42°C，90s(5)冰上放置2-
GST融合蛋白的準備
Preparation of Glutathione-S-Transferase (GST) Fusion ProteinsMargret B. Einarson and Elena N. Pugacheva?Foxx Chase Cancer Center, Philadelphia, PA 19
GST蛋白純化步驟
制備細胞裂解物：1.每100ml培養物的細胞沉淀懸于4mlPBS；2.加入溶菌酶至終濃度1mg/ml，冰上放置30min；3.用針筒將10ml 0.2%Triton X-100強行注入細胞裂解物中，劇烈震動數次混勻；4.加入DNase和RNase至終濃度5μg/ml，4℃震動溫育10min；5.4℃
酵母GST蛋白純化方法
GST Fusion Protein Purification from Yeast5 ml overnight culture of your favorite yeast in your favorite medium.Inoculate 50 ml and grow 30o C shaking
直鏈淀粉樹脂親和層析純化麥芽糖結合融合蛋白實驗
親和層析方法幾乎可以將麥芽糖結合融合蛋白純化成單組分。麥芽糖結合蛋自（MBP) 是一個由大腸桿菌 malE 基因編碼的周質蛋白，是細菌麥芽糖轉運系統的成員之一。MBP 能結合微摩爾水平的麥芽糖和麥芽糊精，因此可用交聯了麥芽糖的瓊脂糖進行純化。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J
直鏈淀粉樹脂親和層析純化麥芽糖結合融合蛋白實驗
實驗材料 表達 BMP 融合蛋白的大腸桿菌細胞試劑、試劑盒 細胞裂解緩沖液細胞洗滌緩沖液柱洗脫緩沖液柱洗滌緩沖液MgCl2PMSFSDS 凝膠加樣緩沖液Tris-ClDNase溶菌酶RNase凝血酶、腸激酶或 Xa 因子溶液SDS-聚丙烯酰胺凝膠儀器、耗材 Beckman Ti60 轉頭或相當的轉頭
蛋白共沉淀檢測實驗_備擇－用GST融合蛋白
實驗材料全細胞抽提物試劑、試劑盒谷胱甘肽-瓊脂糖或者谷胱甘肽-瓊脂糖漿抗體免疫共沉淀緩沖液氯化鈉蛋白 A G-瓊脂糖漿2 × 樣品緩沖液（用于 SDS-PAGE 膠）儀器、耗材20 ml 注射器和 18-G 針頭漢密爾頓注射器實驗步驟1. 按照蛋白 A/G-瓊脂糖漿所述的方式準備兩份樣本（見「用蛋白
做得GST融合純化總有雜帶如何去掉
可以在平衡緩沖液里加一些鹽,0.2-0.5MNaCl，這樣可降低一些因離子作用帶來的非特異吸附。同時在平衡液里加0.5%吐溫等表面活性劑，這樣應該有些改善。此外你也可以用階段洗脫的方法,例如用5mM和10mM還原谷胱甘肽去分別去洗脫，看看有沒有什么區別。還要注意的問題是超聲破碎時注意功率和時間，避免
金屬螯合親和層析實驗——MCAC純化帶組氨酸尾可溶融合蛋白
經遺傳工程改造的使其氨基端或羧基端帶上6個連續的組氨酸殘基的重組蛋白，可用一種通過共價偶連的次氨基三乙酸（NTA）使鎳離子固相化的層析介質加以提純，是為金屬螯合親和層析。實驗材料蛋白質試劑、試劑盒IPTGNiSO4蛋白酶抑制劑MCAC-EDTATriton儀器、耗材層析柱轉子實驗步驟1. ?接種含以
GST標簽蛋白純化介質使用介紹
GST標簽蛋白純化介質 Affinity Resin for GST-tag Protein一、GST標簽蛋白純化介質簡介：? ? ?GST標簽蛋白純化介質專為GST(谷胱甘肽硫轉移酶)標簽融合蛋白的純化而設計,采用該產品可快速從細胞發酵液中提取含有GST標簽的目標蛋白，上海惠誠生物提供GST標簽蛋
直鏈淀粉樹脂親和層析純化麥芽糖結合融合蛋白
? ? ? ? ? ? 實驗材料 表達 BMP 融合蛋白的大腸桿菌細胞 試劑、試劑盒 細胞裂解緩沖液 細胞洗滌緩沖液 柱洗
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白 試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相互作用緩沖液PK 緩沖液還原型谷胱甘肽于 Tris-Cl中洗滌緩沖液 1 洗滌緩沖液 2蛋白酶蛋白激酶 A[y-32P]ATP儀器、耗材 與待篩選蛋白結合的膜或濾膜Sephadex G-50 轉柱實驗步驟 材
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
GST 融合蛋白作為在細菌中表達的重組蛋白，從它們被介紹以來，已用于成千上萬個研究項目中（Smith and johnson 1988)。它們常常被用于制備抗體，這些抗體可用于研究蛋白質-蛋白質相互作用以及分析生化反應。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W
硫氧還原蛋白融合蛋白的表達和純化實驗
實驗材料 融合蛋白試劑、試劑盒 氨芐青霉素甘油色氨酸儀器、耗材 電泳儀培養箱搖床試管實驗步驟 1. ?將編碼目的序列的DNA片段克隆于pTRXFUS或hpTRXFUS質粒上的trxA基因3‘末端，構建符合讀框的融合基因，或者于pALtrxA-781的單一Rsr 2位點上插入短肽編碼序列。2. ?用含
硫氧還原蛋白融合蛋白的表達和純化實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒