布ELISA法的操作程序
(C-ELISA) C-ELISA(Cloth-ELISA)是加拿大學者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型免疫檢測技術。該方法是以疏水性聚脂布(Hydrophobic Polyester Cloth)即滌綸布為固相載體,這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大,可為免疫反應提供較大的表面積,提高反應的敏感性,且容易洗滌,不需特殊儀器等優點。其基本原理與Dot-ELISA類似,只是載體不同。以對布氏桿菌抗原的檢測為例,C-ELISA的主要程序為:⑴ 首先把抗布氏桿菌的血清包被(吸附)在聚脂布上,并經洗滌及封閉;⑵ 加被檢樣品并于室溫下感作30分鐘,然后洗5次;⑶ 加酶標記的抗布氏桿菌抗體,于室溫下感作30分鐘,然后洗滌5次;⑷ 加入底物液顯色;⑸ 測定OD值。......閱讀全文
布ELISA法的操作程序
(C-ELISA) C-ELISA(Cloth-ELISA)是加拿大學者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型免疫檢測技術。該方法是以疏水性聚脂布(Hydrophobic Polyester Cloth)即滌綸布為固相載體,這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大,可為免疫反應提供較大的表面
布ELISA法的操作程序
(C-ELISA) C-ELISA(Cloth-ELISA)是加拿大學者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型免疫檢測技術。該方法是以疏水性聚脂布(Hydrophobic Polyester Cloth)即滌綸布為固相載體,這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大,可為免疫反應提供較大的表面
斑點ELISA法的操作程序
常規的微量板ELISA比較,Dot-ELISA具有簡便、節省抗原等優點,而且結果可長期保存;但其也有不足,主要是在結果判定上比較主觀,特異性不夠高等。該方法的主要操作程序為:⑴載體膜的預處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后,稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中,置
間接ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例,間接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液;② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清;待檢鴨血清;③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。⑵ 方法步驟① 加抗原包被 → 4
斑點ELISA法的操作程序
與常規的微量板ELISA比較,Dot-ELISA具有簡便、節省抗原等優點,而且結果可長期保存;但其也有不足,主要是在結果判定上比較主觀,特異性不夠高等。該方法的主要操作程序為:⑴載體膜的預處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后,稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中,
競爭ELISA法的操作程序
此法主要用于測定小分子抗原及半抗原,其原理類似于放射免疫測定。其基本程序為:① 抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原(對照孔僅加酶標抗原)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液④ 用ELISA檢測儀測定OD值。被結合的酶標
阻斷ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現已成為豬傳染性胃腸炎(TGE)、豬偽狂犬病(PR)及豬胸膜肺炎(AP)的主要檢測方法。下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序:① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃
間接ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例,間接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液;② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清;待檢鴨血清;③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。⑵ 方法步驟① 加抗原包被 → 4
競爭ELISA法的操作程序
此法主要用于測定小分子抗原及半抗原,其原理類似于放射免疫測定。其基本程序為:① 抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原(對照孔僅加酶標抗原)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液④ 用ELISA檢測儀測定OD值。被結合的酶標
斑點ELISA法主要操作程序
⑴載體膜的預處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后,稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中,置37℃使硝酸纖維素膜徹底干燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點加40-53個樣品,每個壓圈可加抗原液1-20μl。⑵ 封閉 將硝酸纖維素膜置于封閉液中,37℃感作15-30
阻斷ELISA檢測法操作程序
① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干⑤
雙夾心ELISA法的操作程序
此法與雙抗體夾心ELISA的主要區別在于:它是采用酶標抗抗體檢查多種大分子抗原,它不僅不必標記每一種抗體,還可提高試驗的敏感性。此法的基本程序為:① 加抗體(Ab-1)包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 加待檢抗原(Ag) → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干③ 加用非同種動物生產的特異性抗體(A
抗體捕捉ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測IgM抗體。由于IgM抗體出現于感染早期,所以檢測出IgM,則可作為某種疾病的早期診斷。抗體捕捉ELISA根據所用標記方式不同可分為標記抗原、標記抗體、標記抗抗體捕捉ELISA等幾種,其中以標記抗原捕捉ELISA比較有代表性,該方法的主要程序為:① 用抗u鏈(抗IgM重鏈)抗體包被→
雙夾心ELISA法的操作程序
此法與雙抗體夾心ELISA的主要區別在于:它是采用酶標抗抗體檢查多種大分子抗原,它不僅不必標記每一種抗體,還可提高試驗的敏感性。此法的基本程序為:① 加抗體(Ab-1)包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 加待檢抗原(Ag) → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干③ 加用非同種動物生產的特異性抗體(A
抗體捕捉ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測IgM抗體。由于IgM抗體出現于感染早期,所以檢測出IgM,則可作為某種疾病的早期診斷。抗體捕捉ELISA根據所用標記方式不同可分為標記抗原、標記抗體、標記抗抗體捕捉ELISA等幾種,其中以標記抗原捕捉ELISA比較有代表性,該方法的主要程序為:① 用抗u鏈(抗IgM重鏈)抗體包被→
什么是布ELISA法?
(C-ELISA) C-ELISA(Cloth-ELISA)是加拿大學者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型免疫檢測技術。該方法是以疏水性聚脂布(Hydrophobic Polyester Cloth)即滌綸布為固相載體,這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大,可為免疫反應提供較大的表面
布ELISA法的主要程序
⑴ 首先把抗布氏桿菌的血清包被(吸附)在聚脂布上,并經洗滌及封閉;⑵ 加被檢樣品并于室溫下感作30分鐘,然后洗5次;⑶ 加酶標記的抗布氏桿菌抗體,于室溫下感作30分鐘,然后洗滌5次;⑷ 加入底物液顯色;⑸ 測定OD值。
雙抗體夾心ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測大分子抗原。現以檢測雞傳染性法氏囊病病毒(IBDV)的雙夾心抗體ELISA為例介紹本法的操作程序。① 加抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干③ 加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干④ 加底物液 → 37℃ 15分鐘,加
間接ELISA的操作程序
本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例,間接ELISA的操作程序如下: ⑴ 材料 ① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液; ② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清;待檢鴨血清; ③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。 ⑵ 方
阻斷ELISA的操作程序
本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現已成為豬傳染性胃腸炎(TGE)、豬偽狂犬病(PR)及豬胸膜肺炎(AP)的主要檢測方法。下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序:① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃
ELISA試劑盒實驗操作程序總結
實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合elisa試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋
薄層色譜法操作程序
1原理:將適宜的固定相涂布于玻璃板上,成一均勻薄層。待點樣、展開后,與適宜的對照物按同法所得的作對比,用以進行藥品的鑒別、雜質檢查或含量測定。 ?2儀器與設備:玻板(除另有規定外,用5cm×20cm,10cm×20cm,20cm×20cm的規格)、定量毛細管或微量注射器、展開缸。 ?3試液與試劑:固
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
1、直接ELISA試劑盒本法首要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例,直接ELISA的操作程序如下:(1) 資料① 包被液、洗刷液、保溫液、底物液、停止液;② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參閱血清;待檢鴨血清;③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。(2)
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
根據ELISA所用的固相載體而區分為三大類型:一是采用聚苯乙烯微量板為載體的ELISA,即我們通常所指的ELISA(微量板ELISA);另一類是用硝酸纖維膜為載體的ELISA,稱為斑點ELISA(Dot-ELISA);再一類是采用疏水性聚脂布作為載體的ELISA,稱為布ELISA(C-ELISA)。
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
酶聯免疫吸附試驗 (以下簡稱ELISA) :是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,使酶標記的抗原-抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測大分子抗原
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
酶聯免疫吸附試驗 (以下簡稱ELISA) :是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,使酶標記的抗原-抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測大分子抗原,
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
? 抗體的活性和純度對制備標記抗體至關重要,因為特異性免疫反應隨抗體活性和純度的增加而增強。? 在酶標記過程中,抗體的活性有所降低,故需要純度高、效價高及抗原親和力強的抗體球蛋白,最好使用親和層析提純的抗體,可提高敏感性,而且可稀釋使用,減少非特異性吸附。? 酶與抗體交聯,常用戊二醛法和過碘酸鹽氧化
鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA,間接ELISA的操作程序
⑴ 材料① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液;② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清;待檢鴨血清;③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。⑵ 方法步驟① 加抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 加待檢血清 → 37℃ 2小時,洗滌三次、拋干③ 加酶標抗體 → 37℃
土工布合成材料垂直滲透儀操作程序
操作程序:(一)安裝試驗物1.按如下順序放入:密封墊/調節孔板/密封墊/試驗物/密封墊2. 旋入試樣壓板,用專用工具擰緊(二)注水1.電源開按鈕,按鈕燈亮,速度顯示器亮。2.旋轉流量調節鈕,使流量顯示值為50左右(流量100)。3.按運行按鈕,按鈕燈亮,開始注水。(三)測試1.旋轉升降機構的手輪,帶
ELISA法
ELISA法是建立在抗原與抗體免疫學反應的基礎上,因而,具有特異性。由于測定中需要酶標記抗原或抗體,酶分子與抗原或抗體分子的結合物可以催化底物分子發生反應,產生放大作用,正因為此種放大作用而使本法具有很高的敏感性。常用的ELISA分析1)?? 測定抗原A??將抗體吸附于固相表面,這個過程叫包被。B