引物退火溫度
一般低4、5度就好了。如果你用軟件設計的引物，比如oligo6什么的，它會在tm之外給你一個operate t，就是操作溫度，用這個就好了。......閱讀全文
引物退火溫度
一般低4、5度就好了。如果你用軟件設計的引物，比如oligo6什么的，它會在tm之外給你一個operate t，就是操作溫度，用這個就好了。
引物的熔解溫度與退火溫度
primer的一個重要參數是熔解溫度(Tm)。這是當50%的primer和互補序列表現為雙鏈DNA分子時的溫度.Tm對于設定PCR退火溫度 是必需的。在理想狀態下，退火溫度足夠低，以保證primer同目的序列有效退火， 同時還要足夠高，以減少非特異性結合。合理的退火溫度從55℃到70℃。退火溫度一般
根據引物合成單如何設定PCR退火溫度？
問題：引物單上數據如下上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%)Tm(1M Na+)：68.2Tm(50mM Na+)：46.6下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%)Tm(1M Na+)：66.2Tm(50mM Na+)：44.6順便問下大家，Tm(1M
根據引物合成單如何設定PCR退火溫度？
PCR退火溫度應如何設置？ 問題：引物單上數據如下 上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%) Tm(1M Na+)：68.2 Tm(50mM Na+)：46.6 下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%) Tm(1M Na+)：
退火溫度與引物的TM值有什么聯系
退火溫度與引物的TM值的關系主要和DNA聚合酶與其buffer有關。有些退火溫度要比TM低5度、3度，有些還會高3度，有些是一模一樣的。主要參考不同公司所生產的DNA聚合酶的說明書。
shrna引物退火原理
1. 載體取2-5ug，在25ul體系中，用2.5ul的酶切30min-1h，回收載體：載體:---2ul（2-5ug）酶---------2.5ulBuf--------2.5ul水---------18ul回收的時候希望濃度高點。2. Oligo退火形成雙鏈若為2OD=5.4nmol的話，則每個
為什么引物中GC含量越高，需要設定更高的退火溫度？
GC堿基互補配對時形成三個氫鍵，非特異性配對后需要較高的溫度才能打開氫鍵，從而促進特異性配對。
tm值與退火溫度
我用primer 5設計出來的Tm值從來都是直接當退火溫度用。用引物primer-blast的話我都是直接貼序列上去。有其他菌的匹配很正常，有些進化親緣性很近的，只要在同一物種中沒有匹配上的問題應該不大！
梯度PCR退火溫度的設計
溫度梯度PCR是指在退火溫度不太明確時，為了找到最優退火溫度，在一臺PCR儀上同時做多管PCR，每一管放在儀器?內不同列(有的是不同行)上，分別進行PCR(如50℃~60℃可以分6管，分別為50，52，54，56，58，60度)，最后看看哪個溫度的效果最好。總之是用來進行退火溫度優化的。
PCR的退火溫度怎么設定
PCR中退火的那步是引物與模板結合，一般來說，退火溫度比Tm值要低上5度左右。另外，也可以根據你設計引物的軟件比如primer5.0或Olige 6 推薦的溫度。但這些都不是絕對的。你要是在他的推薦溫度下沒有目的條帶，你可以試試做一個溫度梯度，摸索一下退火溫度。
pcr退火溫度太高有什么缺點
說影響得看情況，退火溫度太高肯定會影響引物的結合效率的。但是，實際上，好的引物一般是上下游引物的退火溫度比較接近。有時候，我們可能會通過犧牲特異性的手段（當GC含量過高時，減少引物長度）來平衡兩條引物的退火溫度。高的退火溫度是不利于復性的，所以不會因為使模板復性而降低擴增效率，倒是可能因為影響引物結
PCR的退火溫度對反應的影響
引物退火溫度是影響PCR的主要因素之一，一般來說每個引物都對應著各自的退火溫度。影響：以文獻作參考，在一定的溫度范圍內，退火溫度越高，擴增的特異性也就越高。退火溫度越低，擴增產物的特異性也就降低。如果退火溫度過高，引物與模板結合差，電泳條帶差，甚至沒有擴增。如果溫度過低，擴增特異性差，雜帶較多，背景
pcr退火溫度是根據什么原則設計？
在模板變性后溫度快速冷卻至40℃～60℃(某個退火溫度?)的時候，可使引物和模板發生結合。由于模板DNA?比引物復雜得多，引物和模板之間的碰撞結合機會遠遠高于模板互補鏈之間的碰撞，這就使PCR后期的過程成為可能。退火溫度與時間，取決于引物的長度、堿基組成及其濃度，還有靶基序列的長度。對于20個核苷酸
PCR的退火溫度對反應的影響
引物退火溫度是影響PCR的主要因素之一，一般來說每個引物都對應著各自的退火溫度。影響：以文獻作參考，在一定的溫度范圍內，退火溫度越高，擴增的特異性也就越高。退火溫度越低，擴增產物的特異性也就降低。如果退火溫度過高，引物與模板結合差，電泳條帶差，甚至沒有擴增。如果溫度過低，擴增特異性差，雜帶較多，背景
pcr退火溫度一般為多少
唉，這種題就是中國特色，完全理論脫離實際。PCR退火溫度是一個范圍，一般是50度到65度，或者到70度做兩步法PCR。其中，模板的GC含量、模板的組成（單一模板還是cDNA還是全基因組DNA還是別的什么）等等條件都會影響tm值。沒有一個確定的說是多少比較好，都是具體情況具體分析。有的時候引物設計回來
退火溫度低會對PCR產生什么影響
通常來說，退火溫度是由引物的GC%含量決定的，但是反應體系的條件改變也會影響引物的退火溫度（如Mg,Na等離子濃度）。建議你去http://www.idtdna.com/analyzer/Applications/OligoAnalyzer/分析一下你的PCR體系中的引物退火溫度，而不是僅僅由公式計
熒光定量pcrct值太高，怎么調退火溫度
標準曲線按照標準曲線計算般都相量則用delta delta CT計算舉例： 照組基ACT值20 內參（比βactin)CT值15實驗組基A CT值18內參CT值14 首先算加量：delta CT=15-14=1212說
變性、退火溫度對PCR熱循環的影響
PCR退火溫度應如何設置？ 在PCR自動熱循環中，最關鍵的因素是變性與退火的溫度。如操作范例所示，其變性、退火、延伸的條件是：94℃60s, 37℃60s, 72℃120s，共25～30個循環，擴增片段500bp。在這里，每一步的時間應從反應混合液達到所要求的溫度后開始計算。在自動熱循環儀
變性、退火溫度對PCR熱循環的影響
PCR退火溫度應如何設置？在PCR自動熱循環中，最關鍵的因素是變性與退火的溫度。如操作范例所示，其變性、退火、延伸的條件是：94℃60s, 37℃60s, 72℃120s，共25～30個循環，擴增片段500bp。在這里，每一步的時間應從反應混合液達到所要求的溫度后開始計算。在自動熱循環儀內由混合液原
引物片段退火后不能連接到載體上是什么問題？
連接反應需要引物的5’磷酸基團。如果需要將合成的引物退火直接連接相應的載體上，引物需要磷酸化。磷酸化的產物如果還不能連接載體上，需要檢查載體的酶切效果，需要改善引物退火的條件。SiRNA分子具有特殊的對稱結構，退火的難度較大，退火時需要提高退火溫度。
退火爐溫度控制系統的發展現狀
真空退火是隨著精密機械制造、航天、國防等尖端工業而發展起來的新型熱處理方法，特別是近些年來，對零件性能、精度要求的提高使真空退火爐越來越受到人們的重視。國際上從上世紀70年代開始就開始了退火爐計算機控制的研究，近年來由于計算機技術以及新的控制技術的迅速發展，退火爐的計算機控制得到了迅速的發展，退火爐
PCR反應退火溫度的高低與什么因素有關
退火溫度是影響PCR反應特異性的重要因素。引物與模板復性所需要的退火溫度取決于引物的長度、堿基組成及其濃度。引物長度越短，引物中G+C的含量越低，所需的退火溫度越低。雖然降低退火溫度可能增加擴增產量，但引物與模板間的錯配現象也會增多，導致非特異性擴增上升。相反，提高退火溫度雖然可以提高反應的特異性，
退火和真空快速退火爐
退火是一種金屬熱處理工藝，指的是將金屬緩慢加熱到一定溫度，保持足夠時間，然后以適宜速度冷卻，有時是自然冷卻，有時是控制速度冷卻的熱處理方法。?退火的目的：?1. 降低硬度，軟化工件，改善切削加工性。2. 改善或消除鋼鐵在鑄造、鍛壓、軋制和焊接過程中造成的各種組織缺陷以及殘余應力，減少工件變形、開裂或
引物與模板鏈正確連接的保證因素
?1. 退火溫度很重要。? ? （1）引物與模板結合的溫度參數。要保證退火溫度足夠低，保證引物與目的序列的有效結合；退火溫度又要足夠高，以減少非特異性結合。? ? （2）退火溫度與堿基比例關系很大。? ? ①GC（40%-60%），比例太高會使退火溫度過高，從而無法實現引物與模板結合。? ? ②兩種
退火的目的
(1) 降低硬度，改善切削加工性.(2)降低殘余應力，穩定尺寸，減少變形與裂紋傾向；(3)細化晶粒，調整組織，消除組織缺陷。(4)均勻材料組織和成分，改善材料性能或為以后熱處理做組織準備。在生產中，退火工藝應用很廣泛。根據工件要求退火的目的不同，退火的工藝規范有多種，常用的有完全退火、球化退火、和去
定量PCR儀引物長度設定
① 引物長度 一般引物長度為18~30堿基。總的說來，決定引物退火溫度（Tm值）最重要的因素就是引物的長度。有以下公式可以用于粗略計算引物的退火溫度。 在引物長度小于20bp時：[4(G+C)+2(A+T)]-5℃ 在引物長度大于20bp時：62.3℃+0.41℃(%G-C)-
定量PCR儀引物長度設定
① 引物長度 一般引物長度為18~30堿基。總的說來，決定引物退火溫度（Tm值）最重要的因素就是引物的長度。有以下公式可以用于粗略計算引物的退火溫度。 在引物長度小于20bp時：[4(G+C)+2(A+T)]-5℃ 在引物長度大于20bp時：62.3℃+0.41℃(%G-C)-
如何做好熒光定量PCR實驗？（二）
2.4 實時多重PCR探針的選擇：多重實時PCR的多種含意有兩種：一為選擇保守的探針和引物，利用不同的染料標記探針，在檢測時可根據熒光的顏色來判定不同的產物。另一種為選擇保守的引物，擴增不同長度的目的片段，反應中加入SYBRN染料，最后根據不同目的片段的Tm值來判定不同的物品。多重實時PCR的熒光探
如何提高擴增效率和PCR的特異性
引物引物設計：引物長度適當，18-24mers，并保證序列獨特性，以降低序列在非目的片段中存在的可能性，但長度大于24核苷的引物并不意味著有更高的特異性，較長的序列可能會與錯誤配對序列雜交，反而降低特異性，而且長序列比短序列雜交慢，影響產量； 引物濃度：引物的濃度會影響特異性。最佳的引物濃度一般在0
PCR反應技術的反應基本步驟
PCR 全過程包括三個基本步驟,即雙鏈 DNA 模板加熱變性成單鏈(變性);在低溫下引物與單鏈DNA互補配對(退火);在適宜溫度下 Taq DNA 聚合酶以單鏈 DNA 為模板,利用4種脫氧核苷三磷酸(dNTP)催化引物引導的 DNA 合成(延伸)。這三個基本步驟構成的循環重復進行,可使特異性 DN