光生物學研究技術快訊：重組光合作用
美國亞利桑那州立大學生物能源與光合作用中心Kevin Redding、以色列特拉維夫大學植物科學與糧食安全學院Iftach Yacoby等科學家，在《Energy and Environmental Science》上最新發表其重要研究成果：重組光合作用：光系統I-氫酶嵌合體產生氫氣（Rewiring photosynthesis: a Photosystem I-hydrogenase chimera that makes hydrogen in vivo）。科學家們利用藻類氫化酶和光系統I組成嵌合體，氫化酶直接從光合作用器官光系統I（PSI）截獲高能電子，將原先的CO2通化過程導向產生氫氣的過程，并最終產生氫氣——地球上最清潔的能源（氫氣燃燒產生水），從而實現了藻類直接利用太陽能進行光合作用產生清潔能源氫氣的目的。這種具備全新的重組的光合作用系統——PSI-氫酶嵌合體的細胞，可以連續依賴太陽能制造氫氣，并由此......閱讀全文
光生物學研究技術快訊：重組光合作用
美國亞利桑那州立大學生物能源與光合作用中心Kevin Redding、以色列特拉維夫大學植物科學與糧食安全學院Iftach Yacoby等科學家，在《Energy and Environmental Science》上最新發表其重要研究成果：重組光合作用：光系統I-氫酶嵌合體產生氫氣（Rew
植物表型分析技術快訊—西紅柿表型與代謝組學研究案例
植物源蛋白水解物（PHs）是一類重要的生長刺激素，影響植物表型組及代謝組特征，進而促進植物生長和作物產量，尤其在缺水、鹽脅迫、重金屬等逆境條件下，這種促進作用更加突出。PSI植物表型組學研究中心首席科學家Klara Panzarova等，利用PlantScreen高通量表型分析平臺，就一種PH對
基因工程重組抗體技術的研究
在抗體研究的漫長過程中,相繼發展了三代不同水平的抗體制備技術?其中以抗原免疫高等脊椎動物制備的多克隆抗體,稱為第一代抗體;通過雜交瘤技術生產的只針對某一種特定抗原決定簇的單克隆抗體,稱為第二代抗體;應用重組DNA技術或是基因突變的方法改造某種抗體基因的編碼序列,使之產生出自然界中原本存在的抗體蛋白質
科學快訊
海底光纖：檢測地震新方法 研究人員說，監測地震誘發的海底光纖電纜的變化代表了一種發現地震的新手段。他們的方法使在不安裝新的海底設備的情況下感測地震成為可能，這種方法可在用其它方法難以監測地震的地區（包括俯沖帶或缺乏地震儀的遙遠海洋區域）發現地震。 盡管地球表面有70%為海水覆蓋，但幾乎所有的
環保快訊
新疆 根據《關于印發的通知》，新疆維吾爾自治區自2017年10月1日起，按照誰污染誰付費的原則，開始對石油化工行業和包裝印刷行業征收揮發性有機物排污費。 此次征收范圍涉及的2個行業大類中排放揮發性有機物的7個行業小類，具體包括：原油加工及石油制品制造、有機化學原料制造、初級形態塑料及合成樹脂
植物表型分析技術快訊—多光譜熒光成像系統研究植物...1
植物表型分析技術快訊—多光譜熒光成像系統研究植物脅迫響應FluorCam多光譜熒光成像系統是國際知名FluorCam葉綠素熒光成像技術的高級擴展產品，其高度集成，功能強大，應用廣泛，利用系統中的葉綠素熒光成像、多光譜熒光成像、紅外熱成像技術及RGB成像，可對植物進行全面、非接觸的監測，高靈敏度反映光
植物表型分析技術快訊—多光譜熒光成像系統研究植物...2
案例2:?由真菌Rosellinia necatrix引起的白根腐病，是影響鱷梨作物的最主要的土壤傳播疾病之一。白根腐病會引起植物根系腐爛、葉片發黃枯萎，甚至導致植株在出現第一個葉面癥狀幾周后死亡。病害的早期檢測與防治至關重要。本案例中，對感染Rosellinia necatrix后的植
DNA重組技術
連接反應的策略?? 可以采用幾種策略來進行外源ＤＮＡ片段和質粒載體的連接。對此，可依據外源ＤＮＡ片段未的性質，以及質粒載體與外源ＤＮＡ上限制酸切位點的性質來作出選擇。（一）外源ＤＮＡ片段未的性質帶有各種未的外源ＤＮＡ的克隆方法見下表：────────────────────────────────
重組－DNA－技術介紹
中文名稱重組 DNA 技術英文名稱recombinant DNA technique定 義在體外將兩個或多個不同的DNA片段全部或部分構建成一個DNA分子的方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
重組－DNA－技術簡介
中文名稱重組 DNA 技術英文名稱recombinant DNA technique定 義在體外將兩個或多個不同的DNA片段全部或部分構建成一個DNA分子的方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
DNA重組技術－連接
實驗概要? ? ? ? 體外連接獲得重組分子，用于轉化受體細胞。實驗原理? ? 質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆較小的DNA片段(＜10kb)且結構簡單，質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆，從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA和目的DNA片段， ?然后體外使
DNA重組技術2
?感受態細胞的制備(一)制備新鮮或冷凍的大腸桿菌感受態細胞 下述操作方案是由Hanahan(1983)提供的，所制備的大腸桿菌DHl、DH5和ＭＭ249感受態細胞培養物能使每微克超螺旋ＤＮＡ以≥5x108轉化菌落的頻率進行轉化，其他大多數大腸桿菌菌株的最高轉化率大約只有前述菌株的1/10-1/5。
同源重組技術原理
同源重組技術原理：基因敲除鼠技術是上世紀80年代中后期基于DNA同源重組的原理發展起來的，Capecchi和Smithies在1987年根據同源重組（homologous recombination）的原理，首次實現了ES的外源基因的定點整合（targeted integration），這一技術稱為
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組與鑒定1
重組DNA是在體外用限制性內切酶，將不同來源的DNA分子進行特異地切割，獲得的目的基因或DNA片段與載體重新連接，從而組成一個新的DNA雜合分子。重組的DNA分子能夠通過一定的方式進入相應的宿主細胞，在宿主細胞中進行無性增殖，獲得大量的目的基因或DNA片段，此過程稱基因克隆。重組的DNA分子也能夠在
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組的載體2
二、噬菌體載體作為細菌寄生物的噬菌體，大多數具有編碼多種蛋白質的基因，能利用宿主細胞的蛋白質合成體系，進行生長和增殖。構建的噬菌體載體，以λ噬菌體、M13和粘粒最為常用。㈠ λ噬菌體載體野生型λDNA是一種基因組為4.8 kb的線性雙鏈DNA，全部序列已知，共編碼50多個基因。其中約一半基因參與
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組的載體3
在作為載體時，這些噬菌體有一個很大的優點，即克隆到M13mp載體的外源DNA片段（雙鏈），在子代噬菌體便成為了單鏈形式。故應用M13mp進行克隆，可方便地分離到大量含有外源DNA某一單鏈的DNA分子。這種單鏈DNA可在下列工作中作模板：①主要用作雙脫氧鏈終止法進行DNA序列測定的模板；②制備僅有一條
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組與鑒定2
（1）CaCl2處理以后的轉化: 當細菌處于0℃、二價陽離子（如Ca2+、Mg2+等）低滲溶液中時，細菌細胞膨脹成球形，處于感受態；此時轉化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘附于細胞表面，重組DNA在42℃短時間熱沖擊后吸附在細胞表面，在豐富培養基中生長數小時后，球狀細胞恢復原
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組與鑒定3
當多克隆位點有外源DNA片段插入時，破壞此酶的N端閱讀框架，產生無α互補功能的N端片段，因此在帶有外源DNA片段的細菌在含有IPTG/X-gal的培養基上呈白色，見圖7-11 。如果外源DNA插入片段相當短，不破壞β-半乳糖苷酶的氨基端氨基酸序列的閱讀框，有時產生的重組體菌落不呈白色而是呈淺藍色。4
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組的載體1
載體（vector）是攜帶靶DNA（目的DNA）片段進入宿主細胞進行擴增和表達的運載工具。常用的載體是通過改造天然的細菌質粒、噬菌體和病毒等構建而成。目前已構建成的載體主要有質粒載體、噬菌體載體、病毒載體和人工染色體等多種類型，亦可根據其用途不同分為克隆載體和表達載體二類。載體的構建和選擇應考慮以下
體外DNA重組技術4
（二）質粒的大量制備:1.將5ml轉化菌種接種于500ml LB培養液(含用于篩選的抗生素)中，37℃以225rpm速度振蕩培養12～16小時；2.10,000rpm，4℃離心15min收集菌體；3.將細菌懸浮于100ml預冷的STE（0.1M NaCl，10mM Tris.Cl，pH8.0，1mM
體外DNA重組技術6
六、重組質粒的轉化【實驗目的】學習和掌握感受態細胞的制備方法和轉化實驗的基本操作。【實驗原理】將重組質粒轉入大腸桿菌的過程稱為轉化。轉化所用的大腸桿菌需要用物理或化學方法特殊處理，使重組DNA分子容易進入細胞內，被處理后易于接納DNA分子的細胞稱作感受態細胞。下面介紹感受態細胞的制備。【實驗試劑與器
體外DNA重組技術2
【注意事項】基因組DNA分子量大，所有操作必須輕柔，酚/氯仿對皮膚有腐蝕作用，應該戴手套操作。二、RNA的制備【實驗目的】1.理解生物細胞中RNA制備方法的原理。2.熟悉組織細胞中RNA制備的基本操作。（一）細胞總RNA的提取1.異硫氰酸胍法【實驗原理】異硫氰酸胍法提取細胞總RNA是目前常用的提取方
體外DNA重組技術1
在體外將兩個或多個來源相同或不相同的DNA片段連接成新的重組DNA分子，再轉到特定宿主細胞中進行自主復制并表達。這是分子生物學中的基本技術。DNA重組技術的基本程序包括：（1）獲得外源DNA：外源DNA是進行DNA重組的目的DNA片段，一般采用 DNA聚合酶鏈式反應(PCR)或逆轉錄-DNA聚合酶鏈
體外DNA重組技術5
（三）DNA酶切片段的回收【實驗方法與步驟】1.凍融法:（1）在UV燈下，用手術刀片將含DNA片段的瓊脂糖凝膠切下，-70℃冷凍至少 15min，然后在65℃水浴中使膠融化；（2）加入等倍體積TE-飽和酚，劇烈振蕩30秒鐘，然后-70℃冷凍 15min；（3）室溫融化后，12,000rpm離心5mi
DNA重組技術－酶切
實驗概要? ? ? ? 通過酶切獲得可進行體外重組的載體和外源DNA實驗原理? ?DNA重組技術是用內切酶分別將載體和外源DNA切開，經分離純化后，用鏈接酶將其連接，構成新的DNA分子。? ? ?限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上，并切割雙鏈DN
基因的重組連接技術
DNA酶切片段的連接是分子生物學實驗中又一關鍵技術，該技術是基因重組，基因改造的重要中間環節。兩DNA片段相鄰的5'磷酸和3'羥基間可由連接酶催化形成磷酸二酯鍵，這個連接反應在體外一般都有大腸桿菌DNA聯接酶和T4DNA聯接酶催化，但分子生物學實驗中主要采用T4DNA聯接酶，因該酶在
同源重組法技術介紹
同源重組法：同源重組（homologous recombination）是將外源基因定位導入受體細胞的染色體上，在該座位因有同源序列，通過單一或雙交換，新基因片段替換有缺陷的片段，達到修正缺陷基因的目的。如在新基因片段旁組裝一Neo基因，則在同源重組后，因有Neo基因，可在含有新霉素（neomyci
細胞重組的技術方法
轉移 核體與胞質體在仙臺病毒或聚乙二醇的作用下能合并成為完整細胞，稱“重組細胞”。目前不僅能使大鼠核體與小鼠胞質體合并成為重組細胞，并能使人的核體與小鼠胞質體形成重組細胞。若將胞質與完整的細胞融合，構成含有一個親本核和兩個親本胞質的雜種細胞，稱“胞質雜種”。這樣，就可把一個親本細胞的胞質基因（
體外DNA重組技術3
【實驗試劑與器材】（1）Oligo(dT)纖維素（2）層析柱裝置（3）1×上樣緩沖液：20mM Tris.Cl (pH7.6)，0.5M NaCl，1 mM EDTA.Na2 (pH8.0)，0.1%十二烷基肌氨酸鈉(SLS)配制方法: 用Tris.HCl、NaCl和EDTA母液，加入各成分確切
DNA重組技術(DNA－Recombination)
一、DNA 的酶切與連接（1）酶切反應：同質粒DNA 的鑒定，只不過是質粒DNA 換為載體DNA 。若大量酶切，則成比例增加。（2）加2倍體積的預冷無水乙醇和1/10體積的3mol/l NaAc混勻，-20℃2h以上。（3）15000rpm離心15min，棄上清。（4）加入75%乙醇洗滌2次，離心棄