PAGE膠制備方法實驗
實驗試劑1. 5x樣品緩沖液（10ml）:0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50％甘油，2ml 10％的SDS，0.5ml巰基乙醇，1ml 1％溴酚藍，0.9ml蒸餾水。可在4℃保存數周，或在－20℃保存數月。2. 凝膠貯液：在通風櫥中，稱取丙烯酰胺30g，甲叉雙丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。過濾后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1個月。3. pH8.9分離膠緩沖液： Tris 36.3g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，調pH8.9，定容至100ml， 4℃保存。4. pH6.7濃縮膠緩沖液： Tris 5.98g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，調pH6.7，定容至100ml， 4℃保存。5. TEMED（四乙基乙二胺）原液6.10％過硫酸銨（用重蒸水新鮮配制）7. pH8.3 Tris-甘氨酸電極緩沖液：稱取T......閱讀全文
完整蛋白質從SDSPAGE膠中的電洗脫及其MALDITOF－MS－分析實驗
試劑、試劑盒電泳緩沖液蛋白質染色液微量離心管儀器、耗材水平凝膠電泳儀器電洗脫試劑盒真空離心濃縮儀實驗步驟3.1 蛋白質檢測一 般而言，凝膠染色和脫色非常易于操作。在本實驗方法中，我們使用 ElectroBlue 染料代替有固定作用的考馬斯亮藍染色液顯色蛋白質（見注釋 1) 。( 1 ) SDS-PA
SDSPAGE凝膠制備試劑盒說明書
SDS-PAGE凝膠制備試劑盒說明書? P1200-25T P1200-50T 保存條件 30%制膠液(29:1) 100mL 100mL×2 4℃，避光 1.5mol/LTris
聚丙烯酰胺凝膠電泳PAGE膠的配制
各種濃度PAGE膠的配制（DNA電泳用） 50ml體系： ? 丙烯酰胺 有效分離（bp) 二甲苯青 溴酚藍 丙烯
滲透細胞蛋白磷酸化實驗——－制備用于SDSPAGE的天然細胞
實驗材料待標記的培養細胞預熱研究用細胞（傳代細胞或被分離的原代細胞）試劑、試劑盒2 × SDS-PAGE 樣品緩沖液細胞培養液細胞外緩沖液有滲透性的37℃緩沖液鏈球菌溶血素 O 工作溶液ATP 儲存溶液[γ-32P] ATP研究用藥理試劑受體激動劑2 × 冰裂解緩沖液蛋白抑制劑儲存溶液儀器、耗材4℃
蛋白電泳技術手冊
在蛋白電泳過程中，配膠麻煩、電泳耗時長、需要反復調試凝膠濃度是我們面臨的三個棘手問題。EZ Protein系列蛋白電泳產品的克服了上述問題。2-5分鐘配膠，濃縮膠、分離膠一次成型；25分鐘恒壓完成電泳；10-250KD蛋白質一塊膠即可分離，免去了反復調整膠濃度的麻煩。獨有配方，本產品不添加T
蛋白質的單向SDS凝膠電泳實驗——制備多塊梯度膠
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒TEMED丙烯酰胺儀器、耗材離心管電泳儀實驗步驟1. ?如灌制均一濃度凝膠一樣在多板凝膠灌制裝置中組裝好微型膠夾層。?2. ?如圖一、安裝好30 ml 梯度發生器、磁力攪拌器、蠕動泵（可選用）和聚乙烯Tygon管，梯度發生器的輸出端連接于制膠室下方的輸入口。圖一3. ?配制
鑒定分析植物蛋白復合物的藍綠非變性凝膠電泳實驗
試劑、試劑盒十二烷基 β-D-麥芽糖苷增溶液TritonX-100 增溶液洋地黃阜苷增溶液考馬斯亮藍染色液丙烯酰胺溶液BN 凝膠緩沖液實驗步驟3.1 BN-PAGE 樣品的制備所有樣品制備步驟必須在 4°C 下操作，在開始制備樣品前（見 26.3.1 節 1 和 26. 3.1 節 2) ，要制備好
鑒定分析植物蛋白復合物的藍綠非變性凝膠電泳實驗
試劑、試劑盒：十二烷基 β-D-麥芽糖苷增溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?TritonX-100 增溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
鑒定分析植物蛋白復合物的藍綠非變性凝膠電泳實驗
試劑、試劑盒?十二烷基 β-D-麥芽糖苷增溶液TritonX-100 增溶液洋地黃阜苷增溶液考馬斯亮藍染色液丙烯酰胺溶液BN 凝膠緩沖液實驗步驟 3.1 BN-PAGE 樣品的制備所有樣品制備步驟必須在 4°C 下操作，在開始制備樣品前（見 26.3.1 節 1 和 26. 3.1 節 2) ，要制
單向聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗
蛋白質的SDS-PAGE實驗 傳統的考馬斯亮藍染色實驗 快速考馬斯亮藍染色實驗 InstaStain Blue 凝膠紙染色實驗 InstaStain Blue 凝膠紙染色實驗 SYPRO Ruby 熒光染色實驗 SYPR
蛋白質的（PAGE）聚丙烯酰胺凝膠電泳制備方法
一．試劑制備：??? 1.分離膠緩沖液（pH8.9）:36.6gTris,48ml1mol/l的HCl,或先加水至80ml,用濃HCl調pH，再定容至100ml.??? 2.濃縮膠緩沖液（pH6.7）：5.98gTris,48ml1mol/l的HCl, 或先加水至80ml,用濃HCl調pH，再定容至
RNAi實驗原理與制備方法（二）
3.用RNase III 消化長片斷雙鏈RNA制備siRNA其他制備siRNA的方法的缺陷是需要設計和檢驗多個siRNA序列以便找到一個有效的siRNA。而用這種方法——制備一份混合有各種siRNAs “混合雞尾酒” 就可以避免這個缺陷。選擇通常是200—1000堿基的靶mRNA模版，用體外轉錄
轉基因小鼠制備實驗方法
實驗概要掌握轉基因小鼠制備基本實驗方法。實驗步驟1. 選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。 2. 47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合籠；另取數只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結
細胞膜的制備方法實驗
從懸浮細胞中制備細胞膜從組織培養皿中的匯合或部分匯合細胞中分離頂層膜、基底膜或中間膜從生長于微載體上的細胞中分離細胞膜實驗材料膠原酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒EDTA ? ? ? ? ? ? ? ?
RNAi實驗原理與制備方法（一）
實驗原理通過生化和遺傳學研究表明，RNA干擾包括起始階段和效應階段(inititation and effector steps)。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。證據表明；一個稱
細胞膜的制備方法實驗
從懸浮細胞中制備細胞膜 從組織培養皿中的匯合或部分匯合細胞中分離頂層膜、基底膜或中間膜 從生長于微載體上的細胞中分離細胞膜 ? ? ? ? ? ? 實驗材料
SDSPAGE的配制及電泳實驗
實驗原理SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳技術首先在1967年由Shapir0建立，其原理：聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(簡稱Acr)和交聯劑N，N’一亞甲基雙丙烯酰胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(APS)，N，N，N’，N’四甲基乙二胺(TEMED)作用下，聚合交聯形成的具有網狀立體結構的凝膠，并以此為支持
蛋白質的SDSPAGE實驗
實驗材料蛋白質溶液團粒狀細胞蛋白試劑、試劑盒4X濃縮膠緩沖4X分離膠緩沖10X電泳緩沖液2XSDS-PAGE上樣緩沖液正丁醇甲醇SDS儲存液儀器、耗材離心機電泳裝置凝膠上樣吸頭玻璃板加熱器實驗步驟一、灌制平板膠1.清洗玻璃板。a.將玻璃板放人 2%PCC-54 清洗液中浸泡 3?24 h。b.自來水
蛋白質的非變性－PAGE－實驗
實驗材料蛋白溶液或塊狀細胞蛋白試劑、試劑盒丙烯酰胺過硫酸銨電泳緩沖液5X樣品緩沖液分離膠緩沖液濃縮膠緩沖液儀器、耗材微量注射器移液器吸頭或凝膠上樣吸頭實驗步驟1.安裝凝膠灌制模具、灌制凝膠、開始電泳，以及對凝膠進行的操作、保存、染色等步驟均與方案 1 中所述一致。2.若要通過檢測生物學活性來確定蛋白
SDS－PAGE電泳法的實驗步驟
1、清洗玻璃板一只手扣緊玻璃板，另一只手蘸點洗衣粉輕輕擦洗。兩面都擦洗過后用自來水沖，再用蒸餾水沖洗干凈后立在筐里晾干。2、灌膠與上樣（1）玻璃板對齊后放入夾中卡緊。然后垂直卡在架子上準備灌膠（操作時要使兩玻璃對齊，以免漏膠）。垂直電泳槽（2） 按前面方法配10%分離膠，加入TEMED后立即搖勻即可
實驗室分析方法關于膠回收切膠的一點注意事項
1. 電泳的buffer和gel都是新制的，切膠的臺子清理干凈，刀片最好洗凈滅菌，總之一句話就是保證切下的帶沒有外源dna污染。 2. 切膠是要把整個目的片斷所在位置的膠全部回收。為了減少膠的體積，可以用相對比較薄的膠來做，只要夠點樣即可，也可采用薄而寬的梳子來跑膠。 3. 關于防護，在一般
怎樣根據蛋白質大小確定SDSPAGE電泳分離膠的濃度
按的是你丙烯酰胺和雙丙烯酰胺的總質量與膠總體積的質量體積比（m/v）首先你要將上述藥品粉末按照19:1或29:1的比例用水配置成母液（一般為30%,也是m/v）而10%,12%,16%你自然也就知道應該用多少的母液去配制了.相信如何配膠你是知道的.
怎樣根據蛋白質大小確定SDSPAGE電泳分離膠的濃度
你可以用12%的膠濃度，如果marker是fermentas家的SDS非預染marker（批號SM0431）的話，可以看到116kd 66.2kd 45kd 35kd 25kd 18.4kd 14.4kd，這樣你的目的條帶20kd就差不多在整塊膠的中間
做WB時SDSPAGE膠凝固后多長時間上樣最好
配膠時，建議濃縮膠室溫凝固20-30分鐘后，再加分離膠，室溫凝固2-3小時后再用效果佳，如果當天配完不用，需塑料薄膜手套之類的將其包好，放置 4°冰箱過夜，第二天即用，不建議時間過長使用！
免疫電泳實驗_倒膠
試劑、試劑盒Tris-巴比妥緩沖液貯液電極緩沖液瓊脂糖溶液實驗步驟為使瓊脂糖溶液均勻鋪層和得到重復的結果，玻璃板必須水平放置。為便于在免疫電泳中從第一向到第二向的轉移，最好使用瓊脂糖凝膠支持膜。12 ml 瓊脂糖溶液在 84 cm X 94 cm 上的凝膠厚度為 1.5 mm。倒膠后約 3 分鐘凝固
DNA膠回收實驗技術總結
膠回收一. 提高膠回收量的辦法：1) 增加電泳時的上樣量。2) 電泳緩沖液用新鮮配制的。3) 切膠時盡量只切有條帶的膠，減小切膠體積：含目的片斷很少的膠就不要要了，不然影響回收率。4) 把切的兩塊或多塊膠融化后，無論多大的體積都用一個管子，轉移到同一個柱子上。5) 溶膠時所加的溶液可多一點，這樣更有
轉基因小鼠制備實驗方法（protocol)
1、 選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。2、 47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合籠；另取數只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結扎公鼠合籠。3、第二天上午9:00前觀察供體、受體，
LSCM樣品制備中相關實驗方法
樣品制備中相關實驗方法?用于免疫熒光抗體標記組織切片的載玻片需經過明膠、蛋白膠、多聚賴氨酸?( Poly-L-Lysine)、硅烷(3-氨丙基三乙氧基硅烷，APES)?等處理，以粘貼組織切片，防止組織切片在免疫反應過程中脫落。簡易明膠處理方法是將干凈的載玻片浸于?0.1%?明膠熱溶液中一分鐘，取出瀝
濃縮膠的配制方法
一般同工酶可選擇7?5%～10%的膠(過氧化物酶和酯酶7?5%較合適，超氧化物歧化酶用10%，可溶性蛋白可根據需要配制)。將配制好的凝膠液置真空干燥器中，抽氣10Min，再加入TEMED15μl；混勻后用一細玻棒引流，沿無凹槽的玻板緩緩注入膠室中，注膠過程要防止氣泡產生。膠液加到離凹槽3CM處為止，
SDSPAGE蛋白質電泳－配膠緩沖液系統對電泳的影響
在SDS-PAGE不連續電泳中，制膠緩沖液使用的是Tris-HCL緩沖系統，濃縮膠是pH6.7，分離膠pH8.9;而電泳緩沖液使用的Tris-甘氨酸緩沖系統。在濃縮膠中，其pH環境呈弱酸性，因此甘氨酸解離很少，其在電場的作用下，泳動效率低;而CL離子卻很高，兩者之間形成導電性較低的區帶，蛋白分子就介