GST標簽抗體GST標簽與IF&IP等多種應用
近年來在原核表達體系中,谷胱甘肽S轉移酶GST表達純化系統的應用更為普遍,它的來源是日本血吸蟲的25kDa大小的GST蛋白。GST標簽系統具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便,以及利于GST抗體制備等特點和優勢。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層析得到。GST融合蛋白可被位點特異性蛋白酶裂解,從而除去GST蛋白。正是由于以上的優點,商品化的GST融合蛋白表達體系以及GST標簽抗體系統至今仍被廣泛應用。用GST融合表達系統表達外源基因時,需要對融合表達的產物進行檢測和純化,這里面就包括了GST標簽抗體的應用,如果選擇一個最具性價比的GST抗體顯得尤為重要。首先需要考慮抗體的來源,比如小鼠源的單克隆抗體還是兔源的多克隆抗體,一般來說,單抗的特異性、穩定性以及效價都要優于多克隆抗體。EarthOx的GST標簽抗體——Anti-GST Tag Monoclonal Antibody [......閱讀全文
GST標簽抗體GST標簽與IFIP等多種應用
近年來在原核表達體系中,谷胱甘肽S轉移酶GST表達純化系統的應用更為普遍,它的來源是日本血吸蟲的25kDa大小的GST蛋白。GST標簽系統具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便,以及利于GST抗體制備等特點和優勢。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層析得到。G
GST抗體IFIP等多種應用
GST標簽系統具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便,以及利于GST抗體制備等特點和優勢。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層析得到,也可以直接被位點特異性蛋白酶裂解去除。正是由于以上的優點,商品化的GST融合蛋白表達體系以及GST標簽抗體系統至今仍被廣泛應用
親和層析--GST標簽(谷胱甘肽)
低耐壓:谷胱甘肽瓊脂糖微球大包裝填料谷胱甘肽瓊脂糖凝膠提供了一步純化方法,并允許對含有谷胱甘肽結合序列的蛋白質進行快速、溫和以及高特異性的純化。通過使用含有還原型谷胱甘肽的緩沖液洗脫,已結合的 GST融合蛋白容易從填料中被取代。?該填料用于純化谷胱甘肽 -S- 轉移酶(GST) 以及帶有 GST 標
GST標簽蛋白純化介質使用介紹
GST標簽蛋白純化介質 Affinity Resin for GST-tag Protein一、GST標簽蛋白純化介質簡介:? ? ?GST標簽蛋白純化介質專為GST(谷胱甘肽硫轉移酶)標簽融合蛋白的純化而設計,采用該產品可快速從細胞發酵液中提取含有GST標簽的目標蛋白,上海惠誠生物提供GST標簽蛋
研究GST標簽蛋白,原來可以這么簡單
為什么要研究GST標簽蛋白?谷胱甘肽巰基轉移酶(GST)是在真核細胞中天然存在的大小26KDa的蛋白。GSTs可以催化外源性物質結合到谷胱甘肽(GSH)上,因而對諸多環境毒素包括化療藥物、殘留的藥物、除草劑及致癌物起到解毒作用。許多研究人員將GST的DNA序列整合到表達載體上來生產帶有GST標簽的融
有適合免疫沉淀IP的GST抗體嗎
有適合免疫沉淀IP的GST抗體嗎?近年來在原核表達體系中,谷胱甘肽S轉移酶GST表達純化系統的應用更為普遍,它的來源是日本血吸蟲的25kDa大小的GST蛋白。GST標簽系統具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便,以及利于GST抗體制備等特點和優勢。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細菌裂解液中提取,在
如何選擇合適的GST抗體?
GST標簽系統具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便,以及利于GST抗體制備等特點和優勢。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層析得到,也可以直接被位點特異性蛋白酶裂解去除。正是由于以上的優點,商品化的GST融合蛋白表達體系以及GST標簽抗體系統至今仍被廣泛
如何選擇合適的GST抗體?
GST標簽系統具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便,以及利于GST抗體制備等特點和優勢。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層析得到,也可以直接被位點特異性蛋白酶裂解去除。正是由于以上的優點,商品化的GST融合蛋白表達體系以及GST標簽抗體系統至今仍被廣泛
如何選擇合適的GST抗體?
GST標簽系統具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便,以及利于GST抗體制備等特點和優勢。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層析得到,也可以直接被位點特異性蛋白酶裂解去除。正是由于以上的優點,商品化的GST融合蛋白表達體系以及GST標簽抗體系統至今仍被廣泛應用
GST融合蛋白(GST-fusion-protein-purification)的表達與純化
原理GST 純化系統是利用GST (glutathione-S-transferase )融合蛋白與固定的谷胱甘肽(GSH)通過硫鍵共價親和,通過GSH交換洗脫的原理來進行純化 。1ml樹脂大約可結合5-8 mg融合蛋白,并可反復使用數次。試劑u IPTG(異丙基硫代-β-D-半乳糖苷) 2
重組蛋白表達的幾種常用標簽介紹
?重組蛋白表達技術現已經廣泛應用于生物學各個具體領域。特別是體內功能研究和蛋白質的大規模生產都需要應用重組蛋白表達載體。本文將簡要介紹幾個常用載體標簽及其功能和優點。一. GST標簽GST(谷胱甘肽巰基轉移酶) 標簽蛋白本身是一個在解毒過程中起到重要作用的轉移酶,它的天然大小為26KD。將它應用在原
Flag標簽蛋白檢測抗體實驗應用說明
Flag標簽蛋白檢測抗體Abbkine提供可用于WB,IF,IP應用的Flag抗體,特異性檢測Flag標簽融合蛋白,Flag標簽抗體可識別在細胞內表達的Flag標記重組蛋白,包括Flag位于氨基末端、中段以及羧基末端的重組蛋白。Flag標簽系統利用一個短的親水性八氨基酸肽( DYKDDDDK)融
常用內參抗體和標簽抗體
Anti-β-Tubulin,Anti-β-Actin,Anti-GAPDH,Anti-GFP Tag,Anti-RFP Tag 等Epitope Biotech Inc. 公司定制生產高品質的對特定表位有特異性的小鼠單克隆抗體,與其他公司生產的同類產品相比,具有最高的靈敏度和最高的特異性,并且性價
【分享】幾種常用的蛋白標簽的功能和優點
重組蛋白表達技術現已經廣泛應用于生物學各個具體領域。特別是體內功能研究和蛋白質的大規模生產都需要應用重組蛋白表達載體。本文將簡要介紹幾個常用的蛋白標簽及其功能和優點。 一. GST標簽 GST(谷胱甘肽巰基轉移酶) 標簽蛋白本身是一個在解毒過程中起到重要作用的轉移酶,它的天然大小為26KD。
Purification-of-GST-Fused-Proteins
Day 1Set up an overnight culture in 100 ml LMM broth or 100 ml terrific broth containing 100ul 100 mg/mlAmpDay 2Add 40-50 ml o/n culture to 1 lt terri
GST-Activity-Fluorometric-Assay
實驗概要The ?experiment provides a simple, fluorescence-based in vitro assay for ?detecting the GST activity using a fluorescence plate reader. The assay
GST蛋白純化步驟
制備細胞裂解物:1.每100ml培養物的細胞沉淀懸于4mlPBS;2.加入溶菌酶至終濃度1mg/ml,冰上放置30min;3.用針筒將10ml 0.2%Triton X-100強行注入細胞裂解物中,劇烈震動數次混勻;4.加入DNase和RNase至終濃度5μg/ml,4℃震動溫育10min;5.4℃
用于蛋白質表達的標簽實驗(一)
一、設計具有標簽的蛋白質時需要考慮的因素親和力和可溶性的選擇在大腸埃布氏菌中生產外源蛋白時面臨兩個挑戰: 一? 是所用蛋白質表達系統的表達水平很低; 二是所表達的蛋白質被錯誤折疊進不溶性的聚集體—包涵體中。弱啟動子、低轉錄起始或稀有密碼子的存在引起的表達問題都可以通過在裝配過表達質粒時將矯正
蛋白上的標簽是否會影響抗體制備?
通常重組蛋白上的GST(谷胱甘肽S-轉移酶)或MBP(麥芽糖結合蛋白)標簽分子量較大,含有許多抗原位點,在免疫時會成為抗原從而影響特異性抗體的制備。所以作為抗原的重組蛋白最好不帶有GST或MBP標簽。一些小分子量的標簽,如His、Myc、Flag基本不會影響特異性抗體的制備。NovoPro用于制備抗
GST融合蛋白純化方法
Abstract:?Many people have vented out frustration over insoluble GST-fused proteins. This is a protocol for enzymatically active soluble GST-fused pro
GSTpulldown操作流程
實驗材料 探針蛋白原核蛋白細胞蛋白組織蛋白提取物試劑、試劑盒 NaClKClNa2HPO4KH2PO4Triton-100IPTGPMSF(苯甲基磺酰氟)CocktaierImmobilized Glutathione無水乙醇儀器、耗材 定容瓶錐形瓶高速離心機低溫冰箱超聲儀EP管層析柜
GSTpulldown操作流程
實驗目的:體外檢測蛋白質與蛋白質之間相互作用。用于驗證兩個已知蛋白的相互作用,或者篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白。實驗原理:利用重組技術將探針蛋白與GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通過GST與固相化在載體上的GTH(Glutathione)親和結合。因此,
GSTpulldown操作流程
利用重組技術將探針蛋白與GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通過GST與固相化在載體上的GTH(Glutathione)親和結合,已廣泛應用于分子生物學(1)證實兩種蛋白可能有相互作用(2)尋找能與已知蛋白發生相互作用的未知蛋白。實驗方法原理利用重組技術將探針蛋
GST-融合蛋白沉降實驗
實驗材料 細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒 裂解緩沖液SDS 聚丙烯酰胺凝膠探針GST 蛋白儀器、耗材 沸水浴翻轉祥品旋轉儀谷胱甘肽瓊脂糖球珠實驗步驟 材料緩沖液和溶液將緩沖液稀釋到適當濃度。裂解緩沖液20 mmol/LTris-Cl(pH8.0)200 mml/L NaCl1 mm
GSTpulldown操作流程
實驗目的:體外檢測蛋白質與蛋白質之間相互作用。用于驗證兩個已知蛋白的相互作用,或者篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白。?實驗原理:利用重組技術將探針蛋白與GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通過GST與固相化在載體上的GTH(Glutathione)親和結合。
GSTpulldown操作流程
實驗目的:體外檢測蛋白質與蛋白質之間相互作用。用于驗證兩個已知蛋白的相互作用,或者篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白。實驗原理:利用重組技術將探針蛋白與GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通過GST與固相化在載體上的GTH(Glutathione)親和結合。因此,
GSTpulldown操作流程
實驗概要體外檢測蛋白質與蛋白質之間相互作用。用于驗證兩個已知蛋白的相互作用,或者篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白。實驗原理利用重組技術將探針蛋白與GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通過GST與固相化在載體上的GTH(Glutathione)親和結合。因此,當與
GSTpull-down-技術
實驗概要本實驗詳細介紹了GST-pull down 技術的操作流程,主要包括:GST蛋白的大量制備,谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂的處理,GST蛋白的結合,細胞裂解液的預清除及細胞裂解液的探測。實驗步驟1. 大量制備GST蛋白?? 1) 活化凍存菌種GST和GST-X:按1:50比例將表達蛋白的凍存菌液加入5
GSTpulldown操作流程
實驗目的:體外檢測蛋白質與蛋白質之間相互作用。用于驗證兩個已知蛋白的相互作用,或者篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白。 實驗原理:利用重組技術將探針蛋白與GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通過GST與固相化在載體上的GTH(Glutathione)
GST融合蛋白的準備
Preparation of Glutathione-S-Transferase (GST) Fusion ProteinsMargret B. Einarson and Elena N. Pugacheva?Foxx Chase Cancer Center, Philadelphia, PA 19