國際首次|我國學者實現活細胞RNA標記與無背景成像
華東理工大學生物反應器工程國家重點實驗室的楊弋、朱麟勇等教授歷經7年合作研究，在熒光RNA及活細胞RNA成像領域獲突破性進展。他們原創的系列高性能熒光RNA，在國際上首次實現了不同種類RNA在動物細胞內的熒光標記與無背景成像。11月5日，該成果以封面論文形式發表于《自然—生物技術》。 熒光蛋白標記技術是蛋白質研究的巨大助力，其研究在2008年曾獲得諾貝爾獎。類似的，RNA研究也迫切需要這樣的顛覆性研究工具。但迄今為止，在自然界尚未發現天然存在的熒光RNA；而科學家們幾經努力人工合成的少數幾種熒光RNA又性能過低，難以實用。針對這一亟需解決的技術挑戰，楊弋、朱麟勇等組成了化學生物學與合成生物學聯合交叉攻關團隊，通過全新的分子設計及分子共同定向進化思路，首次獲得了系列高亮、穩定、低背景的熒光RNA。 這些熒光RNA結構緊湊，特異結合創新染料分子后產生強烈熒光，可具有藍、綠、黃、橙、紅等不同顏色，與五顏六色的辣椒相似，因此被命......閱讀全文
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（二）
圖5.EGFR在細胞中轉運的實時記錄。（a）示意圖，用于解釋如何利用FAPL探針來實時追蹤EGFR相關的細胞膜轉運過程。（b）COS7細胞中表達的EGFR用DRBG-488標記（綠色），溶酶體用lysosometracker（紅色）標記。（c）對表達SNAP-EGFR–CFP的MDCK細胞進行共聚焦
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（四）
熒光顯微鏡在研究活細胞中蛋白質分子的定位、相互作用及動力學等生命活動中起著不可或缺的作用。將熒光蛋白如綠色熒光蛋白和目的蛋白融合表達，然后利用熒光蛋白發出的特異性熒光來觀察和追蹤目的蛋白分子在科學研究中得到了廣泛的應用。但是熒光蛋白具有量子產量低、成熟速度受限、光譜容易受到環境因素影響及容易形成聚集
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（五）
SNAP-tag技術在STED超高分辨率顯微成像中的應用近十年中，顯微成像技術得到了飛躍的發展，填補光學顯微鏡（~200 nm）到電子顯微鏡（~0.1 nm）分辨率缺口，打破光學衍射極限的超高分辨率顯微鏡也越來越趨于成熟化。其中，德國馬普研究所的Stefan Hell教授憑借其研發的受激發射
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（三）
細胞骨架如微管、微絲等一直是生命科學研究的重點。近期Johnsson等科學家將SiR直接標記于與微管和微絲分別特異性結合的小分子docetaxel和jasplakinolide，即形成SiR-tubulin和SiR-actin，實現了在不對細胞或組織進行任何轉染或基因組修飾的條件下直接進行活細胞成像
基本方案2－RNA－抽提和標記
試劑、試劑盒TRIzol 試劑PBS氣仿乙醇乙酸鈉引物Superscript Ⅱ RNase H反轉錄酶10 X low-T dNTP 混合物EDTATE 緩沖液儀器、耗材RNeasy Maxi 試劑盒組織勻漿機圓底離心管圓錐底離心管水平離心機薄壁 PCR 管熱循環儀熒光掃描儀實驗步驟展
理想的RNA標記方法應符合哪些要求？
1. 操作簡單，靈敏度高2. 不影響堿基配對的特異性3. 不影響RNA活性4. 對酶促反應活性無影響或影響不大5. 檢測方法具有高度靈敏性和高度特異性6. 標記物對人體無害
【銳賽小課堂】miRNA研究之RNA標記
RNA標記是將標記物（如放射性同位素、熒光素或酶）共價地連接到RNA，通過檢測標記物，進而實現對RNA鑒別和檢測的目的。RNA標記在分子探針領域應用廣泛，在疾病診斷方面也很有前景。 理想的RNA標記方法應符合以下要求： 1. 操作簡單，靈敏度高 2. 不影響堿基配對的特異性
單細胞納米藥物及亞細胞結構無標記原位同步輻射成像技術獲重要突破
11月13日，中國科學院國家納米科學中心陳春英團隊在《自然-實驗手冊》（Nature Protocols）上，發表了題為In situ label-free X-ray imaging for visualizing the localization of nanomedicines and s
用[32P]磷酸標記細胞實驗_標記單層培養細胞
實驗材料HeLa 細胞試劑、試劑盒FCS磷酸鹽儀器、耗材無磷酸培養基實驗步驟1. 在含 10% FCS 的培養基中單層培養 HeLa 細胞至鋪滿 50% 左右。2. 倒掉完全培養基，加入新鮮的無磷酸培養基，培養 3~4 小時以耗盡胞內的磷酸儲備。3. 換新鮮的無磷酸培養基，并加?32P 磷酸鹽至 2
Nanolive實現無標記活細胞骨架與微絲3D成像分析
間充質干細胞（MSC)是多能干細胞，可從臍帶組織，脂肪組織，牙髓或羊水中獲得，主要來源于人骨髓，能夠分化成各種間充組織如軟骨、脂肪、骨頭、肌肉、肌腱和基質組織。其特性使其成為非常有前途的醫學治療手段，是挑戰治療器官和組織修復的研究熱點，并且已經在一些如炎癥性腸病和其他免疫紊亂，或缺血性心臟病的應用中
科學家研發新RNA成像工具
發表在《自然―方法學》上的一項報告介紹了一種用于人體活細胞內目標RNA成像的工具。這種針對RNA探針的被命名為Spinach2的工具，拓寬了可標記RNA的范圍，從而更有利于動態定位那些與疾病有關的“有毒RNA”。 Spinach是一種經過設計的RNA復合物，其可以與小型合成分子結
研究實現活細胞及線蟲體內DNA和RNA的同步熒光成像
近期，中國科學院合肥物質科學研究院智能機械研究所智能微納器件研究室研究員張忠平和王振洋領導的團隊在生物體核酸結構的同步原位影像分析方面取得新進展，合成了一種具有高效生物膜穿透能力的陽離子碳量子點，實現了對活細胞及線蟲體內DNA和RNA的同步熒光成像。相關研究成果發表在國際化學期刊《德國應用化學》
RNA“緩沖熒光探針”用于細胞核核仁成像和核仁應激試劑篩選
近日，我所生物技術研究部分子探針與熒光成像研究組（1818組）喬慶龍副研究員和徐兆超研究員團隊發展了能夠與RNA特異性可逆結合，在活細胞內對細胞核核仁穩定成像的“緩沖熒光探針”Nu-AN，實現了對核仁動態輪廓的成像，并通過活細胞內藥物誘導下核仁特定形態的可視化，為核仁應激試劑的篩選提供可視化的工具。
獨特無標記細胞分析技術無需熒光染料標記細胞也可對...
獨特無標記細胞分析技術無需熒光染料標記細胞也可對其進行成像分析簡介基于細胞成像的分析技術一般需要使用熒光染料進行標記，一些熒光標記可能對活細胞具有毒性或者只能用于固定過的細胞進行染色。無標記細胞分析技術使得研究者既無需耗時耗力的染色流程也無需擔心染料對正常細胞活力的影響，就可以計算出細胞數目和細胞匯
淺談細胞成像
2018082457566652.JPG 許多科學研究人員通過加入特定化合物刺激細胞后繼而來觀察細胞的 2D 或 3D 結構變化，借此來闡釋復雜的細胞內信號通路變化。科學研究者利用新的細胞成像和分析技術，大大提升了他們對未知領域的理解水平。 擁有一臺低成本、高效率、高通量檢測分
淺談細胞成像
許多科學研究人員通過加入特定化合物刺激細胞后繼而來觀察細胞的 2D 或 3D 結構變化，借此來闡釋復雜的細胞內信號通路變化。科學研究者利用新的細胞成像和分析技術，大大提升了他們對未知領域的理解水平。 擁有一臺低成本、高效率、高通量檢測分析儀器，例如 ImageXpress? 細胞成像分析系統
標記裂解培養細胞實驗
基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對貼壁細胞）基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對非貼壁細胞）SDS煮沸法裂解細胞實驗方法原理實驗材料待標記的培養細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒37℃標記培養液 ? ? ?
新研究“點亮”熒光RNA成像的結構機制
5月17日，中國科學院生物物理研究所方顯楊研究組與動物研究所李幸研究組合作在《自然-通訊》上發表研究論文，揭示熒光點亮RNA適配體RhoBAST結合與激活熒光團TMR-DN的機制，為理性設計和優化這一重要的FLAP系統提供了機制見解。 在活細胞中對生物大分子如蛋白質和RNA等進行時空定位和追蹤
新研究“點亮”熒光RNA成像的結構機制
5月17日，中國科學院生物物理研究所方顯楊研究組與動物研究所李幸研究組合作在《自然-通訊》上發表研究論文，揭示熒光點亮RNA適配體RhoBAST結合與激活熒光團TMR-DN的機制，為理性設計和優化這一重要的FLAP系統提供了機制見解。在活細胞中對生物大分子如蛋白質和RNA等進行時空定位和追蹤，對于理
新研究“點亮”熒光RNA成像的結構機制
5月17日，中國科學院生物物理研究所方顯楊研究組與動物研究所李幸研究組合作在《自然-通訊》上發表研究論文，揭示熒光點亮RNA適配體RhoBAST結合與激活熒光團TMR-DN的機制，為理性設計和優化這一重要的FLAP系統提供了機制見解。在活細胞中對生物大分子如蛋白質和RNA等進行時空定位和追蹤，對于理
新研究“點亮”熒光RNA成像的結構機制
5月17日，中國科學院生物物理研究所方顯楊研究組與動物研究所李幸研究組合作在《自然-通訊》上發表研究論文，揭示熒光點亮RNA適配體RhoBAST結合與激活熒光團TMR-DN的機制，為理性設計和優化這一重要的FLAP系統提供了機制見解。在活細胞中對生物大分子如蛋白質和RNA等進行時空定位和追蹤，對于理
華東理工楊弋教授發文：這種合成方法實現活細胞RNA成像
2019年11月5日，華東理工大學生物反應器工程國家重點實驗室楊弋教授等在Nature Biotechnology（《自然—生物技術》）雜志上發表了封面學術論文，題為“Visualizing RNA dynamics in live cells with bright and stable fl
用[32P]磷酸標記細胞實驗_標記懸浮培養的HeLa細胞
實驗材料細胞試劑、試劑盒磷酸儀器、耗材無磷酸培養基實驗步驟1. 培養細胞至對數期，600 g 離心 5 分鐘。2. 棄上清，用無磷酸培養基懸浮細胞。3. 培養細胞 3~4 小時以耗盡它們的磷酸儲備。4. 再次離心，棄上清，用無磷酸培養基懸浮，加?32P 磷酸鹽至 20 μCi/ml 培養液，培養 1
以－RNA－為靶目標－FISH－探針的標記實驗
標記的 RNA、DNA 或者核酸類似物可以通過熒光原位雜交（FISH) 的方法檢測細胞標本內的 RNA。目標 RNA 通常是由基因組 DNA 轉錄來的信使 RNA(mRNA)。由于髙特異的核酸堿基互補配對原則，特定的 RNA 分子可以從眾多共表達的 mRNA 分子中篩選出來。對選擇的 mRN
以－RNA－為靶目標－FISH－探針的標記實驗
標記的 RNA、DNA 或者核酸類似物可以通過熒光原位雜交（FISH) 的方法檢測細胞標本內的 RNA。目標 RNA 通常是由基因組 DNA 轉錄來的信使 RNA(mRNA)。由于髙特異的核酸堿基互補配對原則，特定的 RNA 分子可以從眾多共表達的 mRNA 分子中篩選出來。對選擇的 mRNA 分子
細胞RNA含量檢測
實驗步驟展開
提取懸浮細胞RNA
提取RNA器械：離心管2支，吸管4個，酒精燈，打火機，記號筆，200ul,1000UL槍，DEPC泡過的槍頭EP管，紫外照過的手套。濾紙，DEPC純水（750ml無水乙醇＋150mlDEPC水,劇烈振蕩，使勁的搖晃，直至混勻），氯仿，75％酒精，異丙醇，Trizol，預冷的離心機（兩種），EP管架（
細胞RNA含量檢測
實驗步驟 ? ? ? ? ? ? 展開
細胞RNA含量檢測
細胞RNA含量檢測 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 ? ? ? ?
RNA提取心得（組織RNA提取和培養細胞的RNA提取）
一.組織RNA提取 1.最好新鮮組織，這樣RNA提取的效果比較好，這是肯定的。 2. 如果不是新鮮的（最好在半年之內，-80℃或者液氮中凍存的）組織，注意不要反復凍融，從冰凍狀態拿到0-4℃，注意不要拿到常溫，待組織解凍后，用 DEPC泡過的剪刀剪一小塊組織，稱重后，放到預冷的勻漿器中，然后