引物延伸分析（primerextensionanalysis）
引物延伸分析（primer extension analysis）主要用于mRNA 5′端作圖。poly（A）+RNA首先與過量5′端標記的且與靶RNA互補的單鏈寡核苷酸引物雜交，然后用反轉錄酶延伸這個引物。產生的cDNA與RNA模板互補且長度與引物5′端和RNA 5′端之間的距離相等。該法在mRNA 5′端作圖方面具有下述優勢：一旦引物被子起始合成，延伸反應大多會進行到RNA模板的5′最末端，產物大小可精確測定。此外，產物長度不會受靶基因內含子分布與大小的影響。幾乎所有的引物延伸實驗多采用長20~30 bp合成寡核苷酸引物。當用于和靶序列雜交的寡核苷酸引物位于距mRNA 5′端150 bp以內時，可獲得最佳結果。在更遠距離處雜交的引物能增加異源延伸產物，因為反轉錄酶會在模板RNA的二級結構復雜區終止。因此，在設計引物時，除實際的序列之外還應考慮到雜交的位置。應盡可能使寡核苷酸的GC含量在50%左右且在3′端為G或C。用兩個引物......閱讀全文
引物延伸分析（primer－extension－analysis）
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引物延伸分析（primer－extension－analysis）
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PCR實驗指導與常見問題分析4
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PCR實驗指導與常見問題分析2
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·?????????In Vitro RNA Transcription?(Promega)For?in vitro?preparation single-stranded RNA probes or microgram quantities of defined RNA transcripts f
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實驗概要The ?following basic protocol serves as a general guideline and a starting ?point for any PCR amplification. Optimal reaction conditions (incubati