免疫酶染色試驗_細胞免疫酶染色法
細胞免疫酶染色法（以檢測血清中 EB 病毒 IgA 抗體為例說明）實驗方法原理免疫酶染色試驗 (immunoenzymatic staining test, IEST) 是用酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）標記已知抗體或抗原，與相應抗原或抗體結合，形成酶標記抗體－抗原復合物，復合物中的酶在遇到相應的底物時，能催化底物產生顏色反應，根據有色產物的有無及其濃度，即可間接推測被檢抗原或抗體是否存在及其含量，從而達到定性或定量的目的。實驗材料EB 病毒細胞抗原片試劑、試劑盒辣根過氧化物酶 (HRP) 標記的馬抗人 IgA抗體儀器、耗材玻片實驗步驟(1) 首先將保存的 EB 病毒細胞抗原片，移于室溫，吹干。(2) 每孔內滴加 0.01mol/L PBS(pH 7. 4) 稀釋的待檢血清（每個標本加 1 孔），同時分別加1 :10 稀釋的 EB 病毒 VCA IgA 抗體陽性和陰性血清各 2孔做為對照，移入濕盒中置 37℃溫育30 mi......閱讀全文
免疫酶染色試驗_細胞免疫酶染色法
細胞免疫酶染色法（以檢測血清中 EB 病毒 IgA 抗體為例說明）實驗方法原理免疫酶染色試驗 (immunoenzymatic staining test, IEST) 是用酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）標記已知抗體或抗原，與相應抗原或抗體結合，形成酶標記抗體－抗原復合物，復合物中的酶在遇到相
免疫酶染色試驗_細胞免疫酶染色法
細胞免疫酶染色法（以檢測血清中 EB 病毒 IgA 抗體為例說明）實驗方法原理免疫酶染色試驗 (immunoenzymatic staining test, IEST) 是用酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）標記已知抗體或抗原，與相應抗原或抗體結合，形成酶標記抗體－抗原復合物，復合物中的酶在遇到相
免疫酶染色試驗——斑點免疫酶染色法
斑點免疫酶染色法 (dot-ELISA)實驗 （以檢測輪狀病毒抗原為例說明）實驗方法原理該技術是進行 ELISA 測定時，借用了免疫印跡技術的某些原理和方法，利用硝酸纖維素膜為固相載體，使抗原抗體反應在膜上進行，結合在硝酸纖維素膜上的酶抗體結合物通過將底物分解成不溶性的產物而沉積，在硝酸纖維素膜上形
免疫酶染色法
實驗概要免疫酶染色法亦稱免疫酶標組織化學法。標本制備后，首先將其內源酶抑制，接著即可進行免疫酶染色檢查。常規的免疫酶染色法可分為直接法和間接法兩種。前者固定標本中的抗原直接與酶標抗體結合，達到酶染色目的；后者是抗原先與其抗體(第一抗體)結合后，再與酶標抗體(第二抗體)結合，而進行酶染色的。免疫酶染色
免疫酶染色法
實驗概要免疫酶染色法亦稱免疫酶標組織化學法。標本制備后，首先將其內源酶抑制，接著即可進行免疫酶染色檢查。常規的免疫酶染色法可分為直接法和間接法兩種。前者固定標本中的抗原直接與酶標抗體結合，達到酶染色目的；后者是抗原先與其抗體(第一抗體)結合后，再與酶標抗體(第二抗體)結合，而進行酶染色的。免疫酶染色
免疫酶染色法
(一) 原理 免疫酶染色法亦稱免疫酶標組織化學法。標本制備后，首先將其內源酶抑制，接著即可進行免疫酶染色檢查。常規的免疫酶染色法可分為直接法和間接法兩種。前者固定標本中的抗原直接與酶標抗體結合，達到酶染色目的；后者是抗原先與其抗體(第一抗體)結合后，再與酶標抗體(第二抗體)結合，而進
免疫酶染色試驗
實驗方法原理 免疫酶染色試驗 (immunoenzymatic staining test, IEST) 是用酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）標記已知抗體或抗原，與相應抗原或抗體結合，形成酶標記抗體－抗原復合物，復合物中的酶在遇到相應的底物時，能催化底物產生顏色反應，根據有色產物的有無及其濃
免疫酶染色試驗_免疫印跡法
免疫印跡法 （以檢測流行性出血熱病毒結構蛋白和 NP 核蛋白為例說明）實驗方法原理免疫印跡法 是將電泳與免疫酶染色結合起來的一種方法。它先經電泳 (SDS--PAGE)將病毒結構蛋白進行分離，通過轉印將被分離的各區帶原位轉移到硝酸纖維素膜 (nitrocellulose membrane, NC 膜
異相酶免疫試驗和均相酶免疫試驗
Ag為待測抗原，AgAb-E為結合標記物，Ab-E為游離標記物。若抗原-抗體反應影響標記物中酶的活性,如酶活性消失，即結合標記物(AgAb-E)無酶活性，游離標記物(Ab-E)有酶活性； (1) 檢測時不需分離結合標記物(AgAb-E)和游離標記物(Ab-E),檢測體系中標記物酶活性(Ab-E
酶免疫細胞化學染色操作指南2
2、加3% H2O2，細胞片20ul/孔，培養板100ul/孔，使充分覆蓋住細胞。3、室溫10分鐘后，甩掉 H2O2，用PBS輕輕淋洗2分鐘。用濾紙吸干細胞周圍水份，96孔在濾水紙上扣干，但注意保持細胞濕潤。三、封閉細胞片用5-10%正常山羊血清（20ml/孔），細胞板用2-5%BSA（PBS配制）
酶免疫細胞化學染色操作指南1
一、材料和試劑1、玻片：須用免疫組化專用玻片，或用2%多聚賴氨酸包被處理玻片。2、5-10%正常山羊血清封閉液，用PBS配。3、3%牛血清白蛋白（BSA），用PBS配。4、0.01M pH7.4 PBS5、1% BSA-PBS（含0.05% Tween20）6、AEC底物（1）底物緩沖液（20X）
細胞免疫化學：免疫酶標技術
1） 直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1％?H2O2（或1％?H2O2?甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色
免疫酶細胞化學實驗技術
免疫酶細胞化學免疫酶細胞化學是免疫細胞化學（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗體特異反應存在的前提條件下，借助于酶細胞化學的手段，檢測某種物質（抗原/抗體）在組織細胞內存在部位的一門新技術：即預先將抗體與酶連結，再使其與組織內特異抗原反應，經細胞化學染色
酸性α醋酸萘酯酶染色法
實驗概要本實驗介紹了酸性α醋酸萘酯酶染色法的原理、操作流程及注意事項等。實驗原理淋巴細胞內含有許多種酶，如α醋酸萘酯酶(ANAE)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、β葡萄糖苷酸酶等。不同的淋巴細胞細胞亞群所含酶類及其含量各異，如淋巴母細胞富含ACP，而成熟的T淋巴細胞則顯示ANAE活性，
血細胞化學染色的染色法—α醋酸萘酚酯酶染色（αNAE）的介紹
（1）血細胞化學染色的染色法—α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）的原理：α-醋酸萘酚酯酶能將基質液中的α-醋酸萘酚水解，產生α-萘酚，再與重氮染料偶聯，可形成不溶性的有色沉淀，沉淀于細胞質中。 （2）血細胞化學染色的染色法—α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）的操作方法：將甲醛生理鹽水滴加在2張
酶免疫技術酶與底物
酶結合物是酶與抗原或者抗體、半抗原在交聯劑作用下聯結的產物,是 ELISA 成敗的關鍵試劑。它不僅具有抗原抗體的特異性反應,還具有酶促反應的特性,最終產生生物放大的特性。酶免疫反應中,最常用的酶是辣根過氧化物酶,HRP的催化反應需要底物過氧化氫(H2O2)和供氫體(DH2)。供氫體多為無色的還原型染
免疫酶細胞化學實驗技術4
三、ICC在細胞功能研究中的應用 形態學研究目的之一是揭示組織細胞結構特征及其功能意義。利用ICC顯示給與細胞增殖標記物，是組織細胞學研究中形態和功能相結合的重要手段之一。目前常用的細胞增殖標記物有4種，Brdu (5—bromo—2--deoxyuridine), DNA polymerase
免疫酶細胞化學實驗技術2
（四）染色原理及步驟 1．基本原理 酶標抗體與熒光色素標記抗體的染色相同，亦分直接法和間接法。直接法是將酶直接標記在每一抗體上，間接法是將酶標記在第二抗體上，檢測組織細胞內的特定抗原物質。間接法所用的第一抗體是對組織細胞內某種抗原的特異性抗體（80%～90%的抗血清系由家兔制得，而絕大數單克隆
免疫酶細胞化學實驗技術3
一、對照實驗 1．吸收實驗 應用尚無文獻報告的抗血清/自己制備的抗血清進行ICC染色時，需用相應的抗原吸收抗血清后，再孵育標本，判斷結果的可信性（結果應為陰性）。常用的吸收實驗分固相吸收和液相吸收兩種（見本書第一章 ），對于不能形成沉淀，難以用離心沉降法分離的一些小分子多肽類抗原，以固相吸收為佳
免疫染色法檢定蛋白質
實驗概要轉印到紙上的蛋白質抗原，可與其專一性抗體結合，再以二次抗體-酶結合體(2nd Ab-HRP) 或Protein A-HRP 呈色；可在一群轉印色帶中，專一性地挑出目標蛋白質，是最有用的檢定工具。主要試劑1. 抗體溶液：可用傳統抗血清或單株抗體，其最適使用濃度，隨抗體效價不同而異，以下為一般適
免疫染色法檢定蛋白質
實驗概要轉印到紙上的蛋白質抗原，可與其專一性抗體結合，再以二次抗體-酶結合體(2nd Ab-HRP) 或Protein A-HRP 呈色；可在一群轉印色帶中，專一性地挑出目標蛋白質，是最有用的檢定工具。主要試劑1. 抗體溶液：可用傳統抗血清或單株抗體，其最適使用濃度，隨抗體效價不同而異，以下為一般適
琥珀酸脫氫酶染色法
?? 淋巴細胞和單核細胞含有豐富的琥珀酸脫氫酶染色活性。該染色顯示有豐富的甲替顆粒，其分布與線粒體一致。 嗜中性分葉核及粒細胞系統的幼稚階段也有酶活性反應。 巨核細胞和血小板的琥珀酸脫氫酶活性很強。 【臨床意義】 脫氫酶是一組酶，目前用組織化學方法顯示的10余種。雖然顯示各種脫氫酶時所用底物
細胞骨架觀察實驗—抗管蛋白免疫染色法
實驗方法原理細胞骨架微管的主要成分主要為管蛋白（Tublin），用免疫熒光法能顯出其清晰結構。實驗材料細胞試劑、試劑盒PBS丙酮甲醛儀器、耗材碟皿恒溫箱實驗步驟1. ?細胞培養用支持物細胞培養法，把細胞培養在小蓋片上；2. ?漂洗用鑷子挾出小蓋片，在溫PBS中漂洗3 次，每次30 秒；3. ?固定在
酶聯免疫斑點試驗的概念
中文名稱酶聯免疫斑點試驗英文名稱enzyme-linked immunospot assay;ELISPOT assay定 義一種酶聯免疫技術。用于測定分泌特異性抗體或細胞因子的單個細胞對特異性抗原的應答能力，及產生應答的細胞數量。應用學科免疫學（一級學科），應用免疫（二級學科），免疫學檢測和診斷
什么是酶聯免疫斑點試驗
常用于類風濕因子、IFN-γ等細胞因子分泌細胞的定量測定。 在作ELISPOT時，選擇的特異性抗體應該具有高親和力、高特異性、低內毒素的特性。選用的細胞激活物必須不影響細胞的分泌功能。
血細胞化學染色的染色法—中性粒細胞堿性磷酸酶染色（NAP）的介紹
（1）血細胞化學染色的染色法—中性粒細胞堿性磷酸酶染色（NAP）的原理：中性粒細胞堿性磷酸酶在pH 9.6左右環境中，能水解磷酸萘酚鈉底物釋放出萘酚，后者與重氮染料偶聯，可形成不溶性的有色沉淀（紅色顆粒），定位于細胞酶活性所在處。 （2）血細胞化學染色的染色法—中性粒細胞堿性磷酸酶染色（NAP
酶免疫技術中酶和酶作用底物
酶和酶作用底物（一）酶的要求：?一個酶蛋白分子每分鐘可催化10 3 ～10 4 個底物分子轉變成有色產物。用于標記的酶應符合：1.酶的活性要強，催化反應的轉化率高，純度高。2.酶催化底物后產生的產物易于判斷或測量，方法簡單易行、敏感和重復性好。3.作用專一性強 ，酶活性不受樣品中其他成分的影響，受檢
免疫酶標的原理
它以酶作為標記物，與抗體或抗原聯結，與相應的抗原或抗體作用后，通過底物的顯色反應作抗原抗體的定性和定量，亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究，即酶免疫組織化學技術。 應用最多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗（ELISA），它是使抗原或抗體吸附于固相載體，使隨后進行的抗原抗體反應均在載體表面進行，從
免疫酶標技術
1） 直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色
免疫酶技術介紹
免疫酶技術(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫測定，是通過酶標記抗體或抗原來檢測抗原或抗體的方法，其應用范圍極廣。顯示方法是用酶的特殊底物來處理反應后的標本，通過酶催化底物的顯色反應來測定抗原或抗體的存在，以酶標作定量或定性分析。標記酶有辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷