用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析—凝膠蛋白質激酶分析
試劑、試劑盒Tris-HClDTT鹽酸胍尿素激酶分析緩沖液儀器、耗材SDS-PAGE實驗步驟1. 準備下列材料：SDS-PAGE 要用到的所有試劑50 mmol/L Tris-HCl，室溫（pH 8.0)，1 mmol/L DTT6 mol/L 鹽酸胍，50 mmol/L Tris-HCl，室溫（pH 8.0），1 mmol/L DTT8 mol/L 尿素，50 mmol/L Tris-HCl，室溫（pH 8.0)，1 mmol/L DTT50 mmol/L Tris-HCl，4℃ 時（pH 8.0)，1 mmol/L DTT，0.05% Tween-205% TCA 溶液（w/v）適宜的激酶分析緩沖液ATP 儲存液[γ-32P] ATP（3000 Ci/mmol）2. 配制合適的丙烯酰胺濃度的聚丙烯酰胺凝膠溶液。往凝膠混合物中加入 10X 激酶底物儲存液至終濃度 1 mg/ml。灌膠，按常規方法聚合。3. 制備 SDS-PAG......閱讀全文
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析—凝膠蛋白質激酶分析
試劑、試劑盒Tris-HClDTT鹽酸胍尿素激酶分析緩沖液儀器、耗材SDS-PAGE實驗步驟1. 準備下列材料：SDS-PAGE 要用到的所有試劑50 mmol/L Tris-HCl，室溫（pH 8.0)，1 mmol/L DTT6 mol/L 鹽酸胍，50 mmol/L Tris-HCl，室溫（p
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗—蛋白質激酶C
試劑、試劑盒PKC 分析緩沖液組蛋白 HI 儲存液磷脂酰絲氨酸甘油二油酸脂實驗步驟1. 在冰浴的離心管內配制如下 20 μl 反應混合物：5X PKC 分析緩沖液??????????????????????????????????????? 4 μl10 mg/ml 組蛋白 HI 儲存液 ?????
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗
試劑、試劑盒 ATP儲存液實驗步驟 一、Mg-ATP 儲存液的配制ATP 買來時通常是鈉鹽。大多數激酶需要 ATP 鎂鹽作為高效底物。有時可以用錳代替鎂。1. 20 mmol/L MgCl2 或 MgSO42. 20 mmol/L Na2-ATP以 1:1 的比例混合這兩種溶液，測 pH 值。慢慢將
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗
ATP儲存液的配制 依賴環核苷酸的蛋白質激酶 蛋白質激酶C 酪蛋白激酶 酪氨酸激酶 凝膠蛋白質激酶分析 ? ? ? ? ? ?
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗
ATP儲存液的配制依賴環核苷酸的蛋白質激酶蛋白質激酶C酪蛋白激酶酪氨酸激酶凝膠蛋白質激酶分析試劑、試劑盒ATP儲存液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?實驗步驟一、Mg-ATP 儲存液的配制ATP 買來時通常是鈉鹽。大多
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗——酪氨酸激酶
試劑、試劑盒烯醇化酶酪氨酸激酶分析緩沖液實驗步驟1. 制備酸變性的烯醇化酶從兔肌肉中純化的烯醇化酶通常以硫酸銨沉淀或者懸液的形式存在。(1) 含 100 μg 的烯醇化酶，于 4℃ 全速離心 5 分鐘。(2) 去上清，加入含有 1 mmol/L DTT 的 10 μl 50 mmol/L HEPES
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗——酪蛋白激酶
試劑、試劑盒酪蛋白激酶分析緩沖液β-酪蛋白β-酪蛋白儲存液實驗步驟1. 在置于冰上的離心管內配制含下列成分的 20 μl 反應混合物：5X 酪蛋白激酶分析緩沖液? ????????????????????????? 4 μl ?β-酪蛋白?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??????
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗—依賴環核苷酸
試劑、試劑盒激酶分析緩沖液組蛋白 2B 儲存液環核苷酸依賴的蛋白質激酶分析緩沖液環核苷酸儲存液實驗步驟1. 在置于冰上的離心管內配制含下列成分的 20 μl 反應混合物：5X 激酶分析緩沖液 4 μl，10 mg/ml 組蛋白 2B 儲存液 1 μl，[γ-32P] ATP（終濃度為 5 μCi/5
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗——ATP儲存液的配制
試劑、試劑盒ATP儲存液實驗步驟一、Mg-ATP 儲存液的配制ATP 買來時通常是鈉鹽。大多數激酶需要 ATP 鎂鹽作為高效底物。有時可以用錳代替鎂。1. 20 mmol/L MgCl2?或 MgSO42. 20 mmol/L Na2-ATP以 1:1 的比例混合這兩種溶液，測 pH 值。慢慢將 p
用肽底物檢測蛋白質激酶的活性和特異性實驗
利用肽底物分析CaMKⅠ和Ⅱ試劑、試劑盒反應緩沖液儀器、耗材磷酸纖維素濾紙離心管實驗步驟1. 準備 P81 磷酸纖維素濾紙。(1) P81 磷酸纖維素濾紙切成 2cmX2cm 的方塊，折起一個角，用鉛筆在這里做個記號。(2) 將膜塊放在一大張非吸收性材料上，如有機玻璃或者蓋著鋁箔的纖維板。2. 設置
用肽底物檢測蛋白質激酶的活性和特異性實驗
利用肽底物分析酪蛋白激酶Ⅰ和Ⅱ 利用肽底物分析CaMKⅠ和Ⅱ ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 酪氨酸激酶分析緩沖液
用肽底物檢測蛋白質激酶的活性和特異性實驗1
利用肽底物分析酪蛋白激酶Ⅰ和Ⅱ試劑、試劑盒酪氨酸激酶分析緩沖液酪蛋白激酶肽底物溶液實驗步驟1. 在離心管里配制 50 μl 反應混合物：5X 酪氨酸激酶分析緩沖液?????????????????????????? 10 μl10 mmol/L 酪蛋白激酶肽底物溶液??????????????? 5
酪蛋白激酶分析實驗_用多肽底物
實驗方法原理酪蛋白激酶 I 可用多肽 AspAspAspGluGluSerIleThrArgArg 進行分析，最近釀蛋白激酶 II 也已被特異性的多肽底物分析，如 ArgArgArgGluGluGluThrGluGluGlu（下劃線殘基是磷酸受體）。兩個多肽均可通過精氨酸殘基結合到 P81 磷酸纖維
蛋白質分離和分析——凝膠蛋白質染色
實驗步驟?基 本 方 案 1 考馬斯亮藍染色檢測范圍為〇.3?lMg 每蛋白質條帶。材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)聚丙烯酰胺凝膠（單 元 12. 3)考馬斯亮藍、銀染用固定液考馬斯亮藍染液甲醇/乙酸脫色液7 % (V /V ) 水乙酸Whatman 3M M 濾 紙（可選）干 膠 儀（可選
凝膠中激酶直接分析實驗
基本方案 直接分析 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 鹽酸胍或脲都能使蛋白質變性，選用哪一種取決于不同的激酶，但一般首選鹽酸胍，因為對大多數激酶而言它的變性效果更好。
凝膠中激酶直接分析實驗
實驗方法原理 鹽酸胍或脲都能使蛋白質變性，選用哪一種取決于不同的激酶，但一般首選鹽酸胍，因為對大多數激酶而言它的變性效果更好。實驗材料 10 mmol L 激酶底物有激酶活性的酶樣品試劑、試劑盒 2-丙醇Tris?Cl鹽酸胍 脲DTTTween 20匹配的激酶反應緩沖液 Mg／ATP 溶液 [γ-3
用分離的亞細胞組分進行激酶分析
實驗材料細胞器樣品試劑、試劑盒激酶分析緩沖液ATP儀器、耗材SDS-PAGE 凝膠實驗步驟1. 準備反應混合物：反應體積通常是 50~100 ml。5X 激酶分析緩沖液????????????????????????????? 10 μl[γ-32P] ATP（終濃度 5 μCi/5μmol/L)?
凝膠中激酶直接分析實驗——－直接分析
蛋白激酶的分析是使用標記的供體底物，當酶樣品中含有磷酸轉移酶活性時，蛋白 質或多肽受體底物中標記物的積累就很容易被檢出。實驗方法原理鹽酸胍或脲都能使蛋白質變性，選用哪一種取決于不同的激酶，但一般首選鹽酸胍，因為對大多數激酶而言它的變性效果更好。實驗材料10 mmol L 激酶底物有激酶活性的酶樣品試
蛋白質組氨酸激酶的基本信息
中文名稱蛋白質組氨酸激酶英文名稱protein histidine kinase定 義蛋白質-組氨酸-近-激酶(protein-histidine-pros-kinase，編號EC 2.7.3.11)和蛋白質-組氨酸-遠-激酶(protein-histidine-tele-kinase，編號EC
蛋白質組氨酸激酶的基本信息
中文名稱蛋白質組氨酸激酶英文名稱protein histidine kinase定 義蛋白質-組氨酸-近-激酶(protein-histidine-pros-kinase，編號EC 2.7.3.11)和蛋白質-組氨酸-遠-激酶(protein-histidine-tele-kinase，編號EC
蛋白質酪氨酸激酶的基本信息
中文名稱蛋白質酪氨酸激酶英文名稱protein tyrosine kinase;PTK定 義編號：EC 2.7.10.1。特異地將蛋白質底物上某些酪氨酸殘基磷酸化，從而調節該蛋白質功能的酶。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
蛋白質酪氨酸激酶的基本信息
中文名稱蛋白質酪氨酸激酶英文名稱protein tyrosine kinase;PTK定 義編號：EC 2.7.10.1。特異地將蛋白質底物上某些酪氨酸殘基磷酸化，從而調節該蛋白質功能的酶。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
蛋白質磷酸化的蛋白磷酸激酶的純化與活性分析
蛋白磷酸激酶是能催化磷酸基團從磷酸供體轉移到受體蛋白的酶，通常ATP的γ位磷酸(或其它三磷酸核苷)為供體。國際生物化學聯合會根據受體氨基酸的特異性，將蛋白激酶分為以下幾類： ①以蛋白乙醇基作為受體的磷酸轉移酶稱為蛋白絲氨酸或蘇氨酸激酶; ②以苯基為磷酸受體的磷酸轉移酶稱為蛋白酪氨酸激酶;
蛋白質絲氨酸/蘇氨酸激酶的基本信息
中文名稱蛋白質絲氨酸/蘇氨酸激酶英文名稱protein serine/threonine kinase定 義編號：EC 2.7.1.37。特異地催化蛋白質底物上的絲氨酸/蘇氨酸殘基磷酸化，從而調節該蛋白質功能的酶。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
蛋白質絲氨酸/蘇氨酸激酶的基本信息
中文名稱蛋白質絲氨酸/蘇氨酸激酶英文名稱protein serine/threonine kinase定 義編號：EC 2.7.1.37。特異地催化蛋白質底物上的絲氨酸/蘇氨酸殘基磷酸化，從而調節該蛋白質功能的酶。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
蛋白質根據蛋白質結構進行分類
纖維蛋白（fibrous protein）：一類主要的不溶于水的蛋白質，通常都含有呈現相同二級結構的多肽鏈許多纖維蛋白結合緊密，并為單個細胞或整個生物體提供機械強度，起著保護或結構上的作用。球蛋白(globular protein)：緊湊的，近似球形的，含有折疊緊密的多肽鏈的一類蛋白質，許多都溶于水
蛋白質組和蛋白質組學分析
?隨著人類基因 組計劃研究成果的公布，人們對基因的認識逐漸清晰，但基因數量的有限性和基因結構的相對穩定性，與生命現象的復雜性和多樣性之間存在巨大反差。如何了解眾多的基因與危害人類身心健康的疾病之間的關系，對生命科學研究者來說仍是一項長期而艱巨的任務。因此，作為生命活動的直接承擔者――蛋白質，成為后基
質譜檢測法如何進行蛋白質分析？
MS/MS操作模式 串聯質譜儀通常使用的都是離子模式來鑒定蛋白質的氨基酸序列。目前所有的MS/MS質譜儀都具有該功能。不過其它特殊的質譜儀也具有MS/MS功能。如果要發現蛋白質中的某個功能基團則需要用到母離子掃描功能或者中性丟失掃描功能，而這就必須用到三重四級桿質譜儀，如Q-Q-Q質譜儀，或四
質譜檢測法如何進行蛋白質分析？
? 串聯質譜儀通常使用的都是離子模式來鑒定蛋白質的氨基酸序列。目前所有的MS/MS質譜儀都具有該功能。不過其它特殊的質譜儀也具有MS/MS功能。如果要發現蛋白質中的某個功能基團則需要用到母離子掃描功能或者中性丟失掃描功能，而這就必須用到三重四級桿質譜儀，如Q-Q-Q質譜儀，或四級桿離子阱質譜儀，如Q
蛋白質定量分析
實驗概要Bradford ?的dye-binding method 是利用Coomassie brilliant blue G-250 (CBG) ?可與蛋白質結合而變色的特性來定量；若試樣中的蛋白質量較多，則結合到蛋白質而變色的CBG ?也多，因而呈色較深。本實驗是以一組標準蛋白質為對象，制作一條